Post on 07-Aug-2015
transcript
DETERMINACIÓN DE EDULCORANTES DE
ALTA INTENSIDAD EN VARIOS ALIMENTOS
POR HPLC-MS
CROMATOGRAFIA DE IONES
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
CROMATOGRAFÍA DE GASES
METODOS ANALITICOS ALTERNATIVOS
ELECTROFORESIS CAPILAR
ANALISIS DE INYECCION DE FLUJO
TÉCNICAS ELECTROANALÍTICAS TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS
SENSORES COLORIMETRICOS
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO HPLC-MS
EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SPE) CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO
RENDIMIENTO ESPECTROMETRÍA DE MASA
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
En una variedad de muestras de alimentos
( bebidas, productos lácteos y pescado).
En nueve edulcorantes de alta intensidad: ACESULFAME-K (ACS-K) ASPARTAMO (ASP) ALITAME (ALI) CICLAMATO (CYC) DULCIN (DUL) NEOHESPERIDINA DIHIDROCHALCONA (NHDC) NEOTAME (NEO) SACARINA (SAC) SUCRALOSA (SCL)
SPE EXTRACCIÓN CON BUFFER
EXTRACCION STRATA-X 33 µm POLIMÉRICO BUFFER FA DIPEA PH 4,5
(ÁCIDO FÓRMICO Y N , N -
DIISOPROPILETILAMINA)
Inyector automático 10 µL
CROMATOGRAFO LIQUIDO DE ALTO RENDIMIENTO
Agilent modelo 1100 series
Acoplado a: ESPECTRÓMETRO DE MASAS
Columna C18termostatizada
Fuente de electrospray de iones negativos
Detector DAD
COLUMNA CROMATOGRÁFICA
FASE ESTACIONARIA Pirámide Nucleodur C18(250 x 3 mm, 5 µm)
Fase reversa ligada a octadecilsilano. Mayor estabilidad Mínimo sangrado.
HPLC
FASE MÓVIL
Es preparada con : METANOL SOLUCIÓN BUFFER ACETONA
•Componente A, 69 24 7
•Componente B, 11 82 7
Es desgasificada por ultrasonido antes del análisis.
Separación por PERFIL GRADIENTE PROGRAMADO
0-4 min isocrático al 100% de B 4-14 min gradiente lineal 100% B 14-20 min 53% B 20-24 min O% B 24-26 min isocrático B 0% 26-36 min B 100% columna
equilibrante - Temperatura de la columna 22°C
HPLC
LOS PARÁMETROS DE FUNCIONAMIENTO DE LA FUENTE ESI FUERON LOS SIGUIENTES:
Tensión capilar 4.000 V
La presión de gas nebulizador 350 kPa
La temperatura de secado de gas de 300 ° C
La velocidad de secado de flujo de gas de 12 L min -1
CUANTIFICACIÓN TIEMPO PROGRAMADO
MODO DE MONITOREO DE IONES SELECCIONADOS
0 y 10 min iones ACS-K, SAC y CYC ( m / z = 162, 182 y 178) 10 a 14,1 min iones IS y ASP ( m / z = 192 y 293). 14,1 y 16 min iones de SCL ( m / z = 395) 16 y 17,3 min DUL ( m / z = 225) 17,3 y 21 min ALI ( m / z = 330) 21 y 23 min NHDC ( m / z = 611)
NEO ( m / z = 377) a partir del minuto 23 hasta el final de la serie de análisis.
LA SELECCIÓN DE UN ESTÁNDAR INTERNO
Eluir entre ciclamato y el aspartamo Compuesto no debe ser utilizado en
la industria alimentaria Debe producir respuestas razonables. Se decidió la síntesis de un
compuesto: N - (2-metil) sulfamato(C).
Fue el escogido como patrón interno debido a la respuesta mejor del detector MS
CROMATOGRAMAS DE IONES TOTALES DE UNA MEZCLA DE ANALITOS/STANDARS
CURVA DE CALIBRADODIFERENTES RANGO DE CONCENTRACIONES( SEGUN DOSIS MÁX POR LA LEGISLACIÓN)
ACS-K, SAC,CYC,ASP Y SCL 0,1 a 40,0 µg mL-1 LPA,DUL,NEO YNHDC 0,1 a 8,0 µg mL-1
LINEALES rango de concentraciones estudiadas durante seis edulcorantes investigados (CYC, ASP, ALI, DUL, NHDC, NEO) Tres compuestos (ACS-K, SAC, SCL) dió respuesta no lineal en el rango de concentración investigado.
LÍMITES DE DETECCIÓN del método (que corresponde a (S / N) de la señal-a-ruido de 3) estaban por debajo de 0,25 µg ml -1 (µg g -1 )
LÍMITES DE CUANTIFICACIÓNdel método (que corresponde a S / N de 10) estaban por debajo de 2,5 µg mL -1 (µg g -1 ).
VERACIDADdel método se prepararon BLANCO FORTIFICADOS con estándar de cada edulcorante. Las recuperaciones a las concentraciones ensayadas (50%, 100% y 125% de la dosis máximas de empleo) las desviaciones estándar <10%, independientemente del tipo de matriz de la muestra
REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
Adicion de 50% de dosis máx. de empleoTres dias consecutivos tres veces al día Repetibilidad intra-díaReproducibilidad entre-día
LOS ANÁLISIS DE MUESTRAS DE ALIMENTOS
Más de 30 diferentes muestras de alimentos Cada muestra fue analizada por triplicado
Yogur
Bebida
Adobo
RESULTADOS OBTENIDOS
Se encontraron en las muestras ACS-K, SAC, CYC, ASP y SCL ACS-K, SAC se encontró como los edulcorantes más utilizados Un poco menos populares son el aspartamo y ciclamato La sucralosa fue encontrado en cinco muestras. La mitad de las bebidas analizadas contenían tres o cuatro combinaciones de edulcorantes de los componentes. Mezclas de dos componentes también fueron populares
LA APLICACIÓN DE LA ESPECTROMETRÍA DE MASAS PERMITIÓ LA DETERMINACIÓN ALTAMENTE SENSIBLE Y SELECTIVA DE TODOS LOS COMPUESTOS ESTUDIADOS EN UN SOLO PASO CROMATOGRÁFICO.
DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN
COLORIMÉTRICA DE EDULCORANTES NATURALES
Y ARTIFICIALESSensores colorimetricos encapsulados (pin de impresión) Membrana hidrofílica 16 pigmentos nanoporososIndicadores de PH y colorantes inmovilizados en una matriz que es a la vez muy sensible, de rápida respuesta a los analitos acuosos
Silano organicamente modificado (ormosil)
matriz
Detecta e identifica concentraciones milimolares
Bajo costo (descartables)
Simple matriz de sensores colorimétricos Capaz de discriminación entre un número fácil
Uso común edulcorantes naturales y artificiales
A pH biológico
En la presencia de interferentes del "mundo real“
El cartucho fue colocado en un: Epson Perfection V200 escáner
CARACTERÍSTICAS DE LOS SENSORES
DETECCIÓNLa selectividad se basa en: las diferencias de las constantes de asociación de los ácidos bórico con dioles con formación de complejos
lo que se traduce en cambios en el pH de la solución
por lo general disminuye el pH de la solución
DISCRIMINACIÓN DE LOS EDULCORANTES NATURALES Y ARTIFICIALES
Cada analito se disolvió en una solución amortiguadora de fosfato débilmente tamponadas (1 mM) a un pH de 7,45 con 5 mM 3-nitrophenylboronic ácido
ASPECTOS DESTACADOS Esta técnica de atrapamiento permite la interacción
rápida entre los analitos acuosos (o sus derivados) y los indicadores hidrofílicos, ello se traduzca en respuestas rápidas y reproducibles.
La matriz se comporta bien en la presencia de interferentes acuosos y ha mostrado una estabilidad excelente, incluso durante varias semanas.
Ha demostrado la capacidad de analizar las muestras en el mundo real.
¡¡¡GRACIAS!!!