Post on 07-Feb-2018
transcript
Making quality control easy
Uso de materiales de referencia Uso de materiales de referencia
microbiológicos
26 de octubre 2011
1.- Control de calidad de medios de cultivo
2.- Validación de métodos (Comparación de métodos)
3.- Aseguramiento de la calidad
Aplicaciones de los materiales de referencia
3.- Aseguramiento de la calidad- Control de calidad interno (Evaluaciones entre analistas)
(Controles de proceso)
- Control de calidad externo (Ensayos de aptitud)
4.- Calibrar y verificar equipos
Control de calidad de medios de cultivode cultivo
G-ENAC-04 ISO 17025, apartados 4.6 y 5.5
Control de calidad de medios de cultivo
El laboratorio debe asegurar la calidad de los medios de cultivo empleados
Microorganismos de control positivo y negativo
Medios de cultivo listos para su uso:
1. Todos los medios suministrados, utilizables en forma directadeben ser validados
Evaluación cuantitativa sobre la recuperación y/o inhibición de losmicroorganismos
Control de calidad de medios de cultivo
2. Especificaciones del fabricante
Nombre; componentes; período de validez y criterios de aceptabilidad;condiciones de conservación; plan y frecuencia de muestreo; control deesterilidad; control de crecimiento de microorganismos de interés y nodeseados y criterios de aceptabilidad; controles físicos y criterios deaceptabilidad; fecha de emisión de especificidades.
Certificado fabricante
Control de calidad de medios de cultivo
Medios de cultivo listos para su uso:
3. Lotes identificados.
Evidencias cumplimiento de especificaciones de calidad
4. Proveedores ISO 9000. 4. Proveedores ISO 9000.
Validación inicial
Control de calidad de medios de cultivo
Medios de cultivo preparados:
1. Materiales de partida. Conservación en condiciones adecuadas
2. Agua. - Destilada o desionizada, libre de bactericidas, inhibidores o interferentes.
- Controles de calidad:Ensayos químicosEnsayos químicos
Conductividad (Contínuo)pH (Contínuo)COT (Mensual)Metales pesados (Cu,Cd,Zn,Pb) (Anual)Amoniaco (Mensual)
Ensayos bacteriológicosAerobias (Mensual)Validación de lote (Trimestral)
Medios de cultivo preparados:
3. Controles de calidad.
- Propiedades físicas (pH, esterilidad)- Evaluación del crecimiento
Propiedades bioquímicas (Diferenciales y diagnósticas)
Control de calidad de medios de cultivo
Propiedades bioquímicas (Diferenciales y diagnósticas)Recuperación de los microorganismos de interésInhibición de los microorganismos no deseados
Medios de cultivo preparados:
Productividad
A) Medios con agar:
- Comparación con lotes previos.
Control de calidad de medios de cultivo
- Comparación con lotes previos.
- Comparación con medios generales (Calculo de PR: Relación de productividad) (Microorganismos deseados 30-70%; Microorganismos no deseados 0.1-0%)
- Uso de materiales de referencia certificados (CRM)
Medios de cultivo preparados:
Productividad
• Extensión o inclusión. (50-70% de lotes previos)
• Recuento en gota (Miles-Misra)
Control de calidad de medios de cultivo
• Recuento en gota (Miles-Misra)
• Método ecométrico (Mossel). Calculo de AGI (Absolute growth index)
• Filtración membrana
Control de calidad de medios de cultivo
Medios de cultivo preparados:
Productividad
B) Caldos
- Crecimiento en un solo tubo (Comparación de lotes)- Crecimiento en un solo tubo (Comparación de lotes)
- Uso de múltiples tubos (Comparación de lotes)
- Técnica del Número Más Probable (NMP)
Medios de cultivo preparados:
Selectividad
Supresión del crecimiento de un microorganismoSF= D0-Ds (log)
Control de calidad de medios de cultivo
SF= D0-Ds (log)D0 Diferencia entre la dilución más alta con al menos 10 UFC y el medio de referenciaDs La dilución más alta con un crecimiento comparable al del medio de referencia
Especificidad
Caracteristicas esenciales que permiten diferenciar organismos relacionados
Control de calidad de medios de cultivo
1. Etiquetado
2. Envasado
3. Conservación3. Conservación
Control de calidad de medios de cultivo
4. Registro
Validación de Métodos
Clasificación de Métodos
- Fenotípicos
. Aislamiento en cultivo
. Inmunológicos
. Microscópicos
. Cromatográficos
. Electroforéticos. Electroforéticos
- Genotípicos
. Hibridación de sondas
. Amplificación (PCR)
- Características del método
. Identificación
. Cualitativos
. Cuantitativos
- Origen del método. Oficial
Clasificación de Métodos
. Oficial
. Normalizado
. Sistemas de ensayo (Kit)
. Propios
¿Qué es validar?
ISO 17025. Los laboratorios de ensayo deben disponer de métodosadecuados para realizar los análisis que les han sido solicitados.
- Definición y documentación del método
- Validación del método
Validación. Proceso de evaluación de las características de un procedimiento de medida y comprobación de que dichas características cumplen una serie de requisitos preestablecidos.
¿Cómo validar?
- Experiencia y conocimientos personales
- Cursos de formación- Cursos de formación
-Documentación
. ISO 17025
. Guía G-CSQ-2; Guía G-ENAC-04
. AOAC International (Microbiology Guidelines)
. Campend & Chorleywood. Food Research Ass.
. Microbial Analysis of Food and Water. Elsevier
¿Cómo validar?
. Microbial Analysis of Food and Water. Elsevier
. ISO 13843. Guía de validación de métodos micro.
. Guía Eurachem/CITAC. EA Guide04/10. Accreditation for microbiological laboratories.. Quality assurance/Quality control. Guidance for laboratories performing PCR. Analysis of environmental samples (EPA). ISO 16140. Microbiología de los alimentos para consumo humano y animal. Protocolo para la validación de métodos alternativos.
- Documentación (Cont.):
. International Accreditation New Zeland. Technical guide.
. Uncertainty of quantitative determinations derived by cultivation of microorganisms. Mikes. Advisory Commision for metrology. Expert Group for Microbiology
¿Cómo validar?
Microbiology. ISO 13843. Water quality- Guidance on validation of microbiological methods. ISO 17994. Water quality-Criteria for establishing the equivalency of two microbiological methods. Lightfoot and Maier. 1998. Microbiological analysis of food and water. Guideliness for quality assurance. Elsevier. Amsterdam.
Validación en Microbiología
1. Falta de uniformidad de las muestras microbiológicas (Distribución heterogénea)
DistribuciónNo Gaussiana Poisson o Binomial negativa
2. Taxonomias microbiológicas imprecisas
3. Cambios en las muestras microbiológicas (Variabilidad)Organismos “naturales” Organismos colecciónOrganismos “naturales” Organismos colección
4. El análisis microbiológico depende del comportamientoy no de la constitución (Seres vivos) El nº de colonias observadas es una aproximación del nº de cel. vivas. Variación en la morfología celular y cambios en la actividad metabólica.
5. Los métodos microbiológicos no son “Robustos”. Efecto matriz; Estrés; Calidad de los medios de cultivo; Entrenamiento de los analistas
6. Interacciones con el detector. Efecto matriz:
. Factores abióticos
. Factores bióticos
7. Fenómeno de sobredispersión
8. Recuperación de cel. viables:
Validación en Microbiología
8. Recuperación de cel. viables: . Tasa de recuperación absoluta. Tasa de recuperación relativa
9. Muestras naturales o naturales “spiked”. Utilizar muestras con recuentos bajos y microorganismos similares
Diseño de la validación
1. PLANIFICACIÓN
- Asignación de responsable- Descripción documentada del procedimiento:
. Asegurar la correcta realización del ensayo y su rept.
. Establecer los límites de aplicación, objetivos y modode realización
- Definición de las características y requisitos al método
2. REALIZACIÓN
- Serie de pruebas que proporcionen valores para los parámetrosdefinidos en los requisitos.
3. CONTROL
- Comprobación del cumplimiento de objetivos- Declaración final
Validación: Parámetros a determinar
- Método de identificación:
. Especificidad/Selectividad/Sensibilidad
. Falsos positivos/ F. Negativos
. Eficiencia
- Método cualitativo:- Método cualitativo:
. Especificidad/Selectividad/Sensibilidad
. Falsos positivos/ F. Negativos
. Eficiencia
. Límite de detección
. Efecto matriz
- Método cuantitativo:
. Especificidad/Selectividad/Sensibilidad
. Falsos positivos/ F. Negativos
. Eficiencia
. Límite de cuantificación
Validación: Parámetros a determinar
. Límite de cuantificación
. Efecto matriz
. Intervalo de trabajo
. Exactitud
. Precisión
. Linealidad
. Incertidumbre
1. Sensibilidad, Especificidad, Falsos positivos, Falsos negativos,Eficiencia, Selectividad
Especificidad: Grado en que un método se ve afectado por los otros componentes en una muestra con múltiples componentes Un método específico es el que no se ve afectado por ninguno de los otros componentes.
Selectividad: Capacidad de un medio para inhibir o disminuir el crecimiento de la microbiota acompañante.
Validación
de la microbiota acompañante.
Desviación negativa: El método da un resultado negativo sin confirmación y el método de referencia da un resultado positivo. Esta desviación es falso negativo cuando se puede demostrar que el resultado verdadero es positivo.
Desviación positiva: Al contrario que la desviación negativa.
Sensibilidad: Capacidad del método de detectar ligeras variaciones en el número de microorganismos dentro de una determinada muestra.
Validación
Sensibilidad: a/(a+b)
Especificidad: d/(c+d)
F. Positivos: c/(a+c)
Inclusividad
Exclusividad
Validación
F. Negativos: b/(b+d)
Eficiencia: (a+d)/n
Selectividad: log [(a+d)/n]
2. Límite de detección
Número de microorganismos que pueden ser detectados pero en cantidad que no puede ser estimada con precisión.
• Se reconstituye un material BACuanti.• Se efectúan diluciones seriadas y se analizan 10 veces cada una de las diluciones.
Validación
3. Límite de cuantificación
Número de microorganismos dentro de una variabilidad establecida que pueden determinarse bajo las condiciones experimentales del método evaluado.
Validación
LQ = LD + 3 SA)
B) Nº de copias en la que se obtiene un RSDr<25%
Accordance (Conformidad) Repetibilidad cualitativa
Concordance (Concordancia) Reproducibilidad cualitativa
Porcentaje de muestras encontradas con el mismo resultado (P/N)
Validación
Concordance odds ratio (COR):(Oportunidad relativa de concordancia)
Accordance * (100- concordance)COR=
Concordance * (100- accordance)
3. Exactitud
Grado de concordancia entre el resultado de la medición y el valor de referencia aceptado
Validación
A. Técnica de duplicadosB. Materiales de referencia
(BACuanti)
Concordancia entre los resultados obtenidos al aplicar el procedimiento experimental repetidas veces bajo las condiciones establecidas
r (Repetibilidad) Precisión en las mismas condiciones
4. Repetibilidad y reproducibilidad
Validación
rStr 2∞= rSr .8,2=
R (Reproducibilidad) Precisión cambiando condiciones
RStR 2∞= RSR 8,2= 22int8,2 entrelabralb SSR +=
R S D R S D (A nalista) M A R 1 R 2 R 3 R S D 1 A
A na lista 1 M B R 1 R 2 R 3 R S D 1 B
M A R 1 R 2 R 3 R S D 2 A A na lista 2 M B R 1 R 2 R 3 R S D 2 B
M A R 1 R 2 R 3 R S D 3 A A na lista 3 M B R 1 R 2 R 3 R S D 3 B
T O T A L
21
21
21 BA RSDRSDRSD +=
22
22
22 BA RSDRSDRSD +=
233
23 BA RSDRSDRSD +=
Repetibilidad
4. Repetibilidad y reproducibilidad
Validación
T O T A L
ANALISTA 1 ANALISTA 2 ANALISTA 3 RSD RSD (Rango)
Muestra A R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD A
Muestra B
R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD B
TOTAL
3
23
22
21 RSDRSDRSDRSD ++=
2
22BA RSDRSDRSD +=
Reproducibilidad
Solo hay dos verdades absolutas en la vida:
Incertidumbre
Incertidumbre
Muerte Impuestos
Accuracy=Trueness+Precision
Incertidumbre
Uncertainty=Bias (sistematic) +Imprecision (random)
Trueness=1/Bias
Precision=1/Imprecision
Accuracy=Desviación de una medición del valor verdadero
Trueness=Desviación del valor medio de una serie de resultadosy el valor de referencia aceptado
Bias= Diferencia entre el resultado esperado y el valor de
Incertidumbre
Bias= Diferencia entre el resultado esperado y el valor de referencia aceptado (error sistemático)
Precision= Desviación de los resultados entre ensayos independientes obtenidos bajo condiciones establecidas (error aleatorio)
Error = Diferencia entre el valor obtenido y el valor verdadero
Incertidumbre= Parametro asociado con el resultado de una medida que caracteriza la dispersión de los valores que pueden ser razonablemente atribuidos al mesurando.
Incertidumbre= Intervalo alrededor de una medida, en el que una
Incertidumbre
Incertidumbre= Intervalo alrededor de una medida, en el que una repetición de la medida produciría un resultado que se encontraría incluido en dicho intervalo
Incertidumbre=Parámetro asociado al resultado de la medición quecaracteriza la dispersión de los valores que podrían ser razonablemente asignados al mesurando
Incertidumbre
Accuracy=Trueness+Precision
Uncertainty=Bias +Imprecision Uncertainty=Bias +Imprecision (sistematic) (random)
Errores sistemáticos (bias):
Volumen y en concentración- Medida del volumen de muestra
- Error de dilución debido a error en los equipos de medida
- Enmascaramiento de las colonias en la placa (cultivo)
- Recuperación incompleta de la población diana
Incertidumbre
- Recuperación incompleta de la población diana
- Error del analista en el recuento (cultivo)- Cambio en el concentración del microorganismo durante laconservación de la muestra
Dificultad de obtener recuentos exactos Dificultad cálculo bias
Errores aleatorios (random):
Volumen y concentración
- Variabilidad intrínseca de los microorganismos en la muestra(Distribución, recuento, volumen, muestreo, etc.)
Incertidumbre
(Distribución, recuento, volumen, muestreo, etc.)- Equipos empleados
- Variabilidad en los recuentos
1. “Bottom-up” (Componente a componente)
- Costoso y difícil- No tiene en cuenta diferencias en matrices- Bias del analista- No contempla variabilidad entre submuestras- Dificultad de establecer la incertidumbre de diversos
componentes (calidad del medio, fluctuación de Tª..)
Incertidumbre
componentes (calidad del medio, fluctuación de Tª..)- No contempla variaciones en el día a día.
NO APROPIADO PARA MEDICIONES MICROBIOLÓGICAS
2rv
2cvv u+u=u
K
I=ucv
3
resurv =
ucv incertidumbre de calibración y urv incertidumbre de resolución
1) Incertidumbre de volumen
Incertidumbre de calibración Incertidumbre de resolución
Incertidumbre: Técnica de duplicados
K 3
2rp
2cpp u+u=u
K
I=ucp
3
resurp =
ucp incertidumbre de calibración y urp incertidumbre de resolución
2) Incertidumbre de pesada
Incertidumbre de calibración Incertidumbre de resolución
donde:Ci es la concentración inicial de microorganismos ufc/mLVf es el volumen finalVi es el volumen inicialdVi es el error del volumen inicialdVf es el error del volumen finaldCi es el error en el recuento inicial de microorganismos (ufc/mL)
2
2
22
2
2
2
2 dVfVf
ViCidCi
Vf
VidVi
Vf
Ciu
Vf
ViCiCf
d
+
+
=
=3) Incertidumbre de dilución
4) Incertidumbre de reproducibilidad
Se corresponderá con el valor de RSDR encontrado
Incertidumbre: Técnica de duplicados
Se corresponderá con el valor de RSDR encontrado
32
dU E =
5) Incertidumbre de exactitud
Se combinarán todas las incertidumbres obtenidas asumiendo que existe una distribución de Poisson La incertidumbre total expandida para K=2:
6) Incertidumbre combinada
222Er
2dp
2vtotal uuuu+u2=I +++
Desviacion estándar
Número de datosK
IUREF =
MR
MRMRREF n
SWU =
=MRS
=MRn
1) Incertidumbre del material de referencia
3) Reproducibilidad cotidiana
RUσ= CpW %Re=σ
=mS Desviación estándar de los log de los valores obtenidos
n
SWU mEXP
REP = =n Número de experimentos
2) Incertidumbre de repetición
Incertidumbre: Material de referencia (BACuanti)
d
RRp
nU
σ= CpWExpR %Re=σ
Rep%= Reproducibilidad del material de referencia o muestra adicionalesC= Recuento
4) Recuperación no adecuada
3
)1( CRECUREC
−=C= Recuento obtenido
REC= Recuperación
5) Incertidumbre combinada
22Rp
2RECREP
2REFtotal uuu+u2=I ++
2. “ Top-down” (Estimación de la repetibilidad y repr oducibilidad en laboratorios bajo control)
A) S intralaboratorio (Reproducibilidad intermedia)
Incertidumbre
A) SR intralaboratorio (Reproducibilidad intermedia)
B) SR entrelaboratorios (ensayo interlaboratorios)
C) SR entrelaboratorios (ejercicios de intercomparación)
RSD RSD (Analista) MA R1 R2 R3 RSD1A
Analista 1 MB R1 R2 R3 RSD1B
MA R1 R2 R3 RSD2A Analista 2 MB R1 R2 R3 RSD2B
MA R1 R2 R3 RSD3A Analista 3 MB R1 R2 R3 RSD3B
21
21
21 BA RSDRSDRSD +=
22
22
22 BA RSDRSDRSD +=
233
23 BA RSDRSDRSD +=
Repetibilidad
SR intralaboratorio (Reproducibilidad intermedia)1. Reproducibilidad dentro del laboratorio
Incertidumbre
TOTAL
ANALISTA 1 ANALISTA 2 ANALISTA 3 RSD RSD (Rango)
Muestra A R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD A
Muestra B
R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 RSD B
TOTAL
3
23
22
21 RSDRSDRSDRSD ++=
2
22BA RSDRSDRSD +=
Reproducibilidad
ANOVA
Incertidumbre
a) SR obtenido de un estándar:
- No bias- Verificación de la repetibilidad
b) SR obtenido de un Ejercicio de Intercomparación:
Incertidumbre
b) SR obtenido de un Ejercicio de Intercomparación:
- Buenos resultados- El ejercicio cubre todos los componentes de incertidumbre ymatrices.
Incertidumbre
2. Estimación adicional del bias del método y el laboratorio
- Las fuentes del bias deben ser eliminadas- El resultado debería ser corregido si el bias es significativo y
basado en datos como CRM-El bias puede variar dependiendo de cambios en la matriz. Paraello se deberían emplear varios CRM en matrices diferentes.
Calculado a partir:
1. Análisis de CRM2. Participación en Ejercicios de Intercomparación3. Ensayos de recuperación
Incertidumbre
- Bias (Diferencia porcentual del valor certificado)- Incertidumbre del valor certificado
2)(2)( refCUbiasRMSbiasU +=n
ibiasbiasRMS
2)(∑=
ANALISIS DE CRM:
bias n
2)(2)(2)()( refCUn
biasSbiasbiasU ++=
CRM: 11.5±±±±0.5 0.5/11.5=0.26
(0.26/11.5)x100=2.21%
BIAS: x=11.9 S=2.2% n=12 Bias=(11.9-11.5)/11.5=3.48%
Sbias=2.2% n=12
Incertidumbre
Sbias=2.2% n=12
2)(2)(2)()( refCUn
biasSbiasbiasU ++=
%2.42%21.22)12
%2.2(2%)48.3( =++
Bias CRM1 3.48% S 2.2% n=12 U(Cref)= 2.21%Bias CRM2 -0.9% S 2.0% n=7 U(Cref)= 1.8%Bias CRM3 2.4% S 2.8% n=10 U(Cref)= 1.8%
2 222 +−+
Incertidumbre
nibias
biasRMS2)(∑
= %5.23
2%4.22%)9.0(2%48.3 =+−+
U(Cref)= 1.9%
2)(2)( refCUbiasRMSbiasU += %1.32%9.12%5.2 =+
EJERCICIOS DE INTERCOMPARACIÓN:
Incertidumbre
SR (S entre labs)=9% %6.212
%9)( ===
nRS
refCU
Bias 2%,7%,-2%,3%, 6%, 5%n
ibiasbiasRMS
2)(∑=
%6.42%52%62%32)2(2%72%2 =+++−++
2)(2)( refCUbiasRMSbiasU += %3.52%6.22%6.4 =+
%6.47
%5%6%3)2(%7%2 =+++−++
ENSAYOS DE RECUPERACIÓN:
U(Conc)±1.2% U(Conc)=0.6%
U(vol)Max. Bias= 1%; Repetibilidad= 0.5%
%76.02%5.02)3
%1()( =+=volU
%00.120762%6.02)(2)()cov( =+=+= volUconcUeryreCU
Incertidumbre
coveryre
Bias 2%,7%,-2%,3%, 6%, 5%
nibias
biasRMS2)(∑
=%6.4
7
2%52%62%32)2(2%72%2 =+++−++
2)cov(2)( eryreCUbiasRMSbiasU += %3.52%0.12%6.4 =+
Resumen:
1. Uso directo de la SR de un ensayo con material de referencia o a partir de un Ejercicio de Intercomparación.
2. Estimación de la reproducibilidad intralaboratorio+bias y 2. Estimación de la reproducibilidad intralaboratorio+bias y combinación de ambas.
El primer método es más conservador
6. Linealidad
Aseguramiento de la calidadAseguramiento de la calidad
“El laboratorio debe tener procedimiento de control de la calidad de modo que pueda verificar la validez de los ensayos y calibraciones que realiza”.
ISO 17025. Sección 5.9
� Control de calidad externo: Ejercicios de intercomparación (PTs)
Importancia de la gestión de PTs:
• Preparación de muetras• Envío a los participantes
� Control de calidad interno:� Verificación entre analistas� Control de proceso� Gráficos de control
InoculoMuestra preparada
METODO 1 METODO 2
• Envío a los participantes• Interpretación y uso de los resultados
1. Control de calidad externo (Ensayos de aptitud)
• Participación regular• Organizadores acreditados• Material homogéneo y estable (MR o CMR)
Aseguramiento de la calidad
Aseguramiento de la calidad
2. Control de calidad interno
Procedimientos realizados para la evaluación contínua del trabajo
Asegurar la coherencia de los resultados obtenidos y el cumplimiento de los criterios establecidos
Controles periódicos
Control de la variabilidad entre analistas, equipos, etc.
1. Control de las condiciones de trabajoInformación sobre la esterilidad de los medios, materiales y buenasprácticas de realización de los ensayos.
2. Control de la precisiónMuestras naturales sin inocular y/o muestras naturales inoculadas conmateriales de referencia
Aseguramiento de la calidad
3. Control de la recuperaciónMuestras inoculadas con materiales de referencia
4. Ensayos cualitativosControl del límite de detección
1. Concentración:
A) Filtración. - Policarbonato; Reconcentración cartucho filtrante- Sistema de concentración directo (CellTrap)
Aseguramiento de la calidad
B) CentrifugaciónC) IMS
2. Elución:
3. Tratamientos: Ácido, Calor, Eliminación de inhibidores, Extracción, Purificación
4. Aplicación de sistemas de detección: (PCR, etc.)
Aseguramiento de la calidad
Tipos de evaluaciones de ensayos:
• Uso de replicados• Uso de muestras inoculadas (Controles de proceso)
PositivosNegativos
• Controles positivos y negativos• Ensayos cruzados entre analistas• Ensayos en paralelo con métodos alternativos
Aseguramiento de la calidad
• Ensayos en paralelo con métodos alternativos• Gráficos de control
40
60
80
100
120
x-3s (46.82)
x-2s (53.64)
x (70.38)
x+2s (92.35)
COLIFORMES TOTALES SOP/Method: PE-B/001Medium: Tergitol
Batch number: R06007AChart number:
Strain (code & name): COLIFORMES TOTALES
SOP/Method number :PE-B/001
Medium Tergitol
Batch number : R06007A
Chart number :
Count Date Lab code Person1 63 16/7/98 GOA2 61 17/7/98 GOA3 63 22/7/98 RMG4 69 22/7/98 RMG5 54 23/7/98 RMG
Aseguramiento de la calidad: Gráficos de control
0
20
40
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
x+2s (92.35)
x+3s (105.79)
Test value
5 54 23/7/98 RMG6 71 28/7/98 GOA7 68 28/7/98 RMG8 62 30/7/98 RMG9 75 30/7/98 GOA
10 69 3/8/98 GOA11 55 3/8/98 RMG12 70 5/8/98 RMG13 87 5/8/98 GOA14 91 6/8/98 RMG15 68 6/8/98 GOA16 86 10/8/98 CMM17 77 10/8/98 GOA18 87 11/8/98 GOA19 86 13/8/98 RMG20 62 13/8/98 GOA
1. Muestras naturales analizadas por diferentes analistas y métodos en paralelo
2. Muestras inoculadas con material de referencia titulado por los propios analistas
3. Muestras inoculadas con material de referencia certificado
Aseguramiento de la calidad:Ensayos cruzados entre analistas
Aseguramiento de la calidad:Ensayos cruzados entre analistas
Aseguramiento de la calidad:Ensayos cruzados entre analistas
Aseguramiento de la calidad:Ensayos cruzados entre analistas
Aseguramiento de la calidad:Controles de proceso
Inóculo1 L
Aseguramiento de la calidad:Controles de proceso
Muestra preparada
METODO 1 METODO 2 (ACIDO, CALOR, SIN TRATAMIENTO)
Aseguramiento de la calidad:Controles de proceso
1.81
1.071.24
1.14 1.111.06
2.982.792.99
2.94
3.23
3.08
2.241.81
2.121.86 2.09
1.92
1.51
0.93 1.040.891.040.96
0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
Red.Sin Trata Red. Calor Red. Ácido Final
TRATAMIENTO
REDUCCIONES MEDIAS
MUESTRA AMUESTRA B
Serie3MUESTRA AMUESTRA BSerie6
MUESTRA AMUESTRA B
Calibración y verificación Calibración y verificación de equipos
Ct=-3,028 log[DNA]]]] +39,6148
R²= 0,94743 r= -0,9733
Rectas de calibrado
CURVA ESTANDAR
40
50
Certificación Multisector
507 ptos
0
10
20
30
40
0 2 4 6 8 10
Log Nº copies
Ct
Correlación entre PCR a tiempo-real y cultivo para L. pneumophila
Cultivos de Legionella
1
10
100
1000
10000
100000
1000000
1 10 100 1000 10000 100000 1000000
Nº cells calculated from PCR results
CF
U d
ete
cte
d by
cul
ture
y=1.05 x-341.8R2=0.943
Rectas de calibrado
1
10
100
1000
10000
100000
1 10 100 1000 10000 100000
Nº cells calculated from PCR results
CF
U d
ete
cte
d by
cul
ture
Muestras de agua
Nº cells calculated from PCR results
1:1
1:10
1:100
Ct=-3,26 log[DNA]+35,6 R²= 0,759
Recta calibrado IPC
25
30
35
Control interno (IPC)
0
5
10
15
20
25
0 1 2 3 4
Log conc. DNA (fg)
Ct Serie1
Lineal (Serie1)
145 ptos.100 fg DNA
E. coliy = 0.5014x - 0.0828
R2 = 0.7564
2.00
3.00
4.00-D
-Glu
coro
nida
se a
ctiv
ity
� Fluorimetría
Rectas de calibrado
-2.00
-1.00
0.00
1.00
2.00
0 1 2 3 4 5 6 7
Log cfu/100 mL
Log
ββ ββ-D
-Glu
coro
nida
se a
ctiv
ity
� Colorimetría
Rectas de calibrado
1. ¿Qué es un material de referencia?
2. ¿Qué es un material de referencia certificado?
6. ¿Qué proporciona el uso de los materiales de referencia y materiales de referencia certificados?
4. ¿Qué son los productos BACuali, BACuanti, BACuanti PCR y BACuanti DNA desarrollados por Labaqua?
5. ¿Qué diferencia existe entre los diferentes materiales presentados por Labaqua?
3. ¿Qué características principales tienen los materiales de referencia microbiológicos desarrollados porLabaqua?
7. ¿Qué vantajas presentan estos materiales frente a las cepas habituales procedentes de Colecciones deCultivo?
Preguntas más frecuentes
8. ¿ Son los productos BACuali, BACuanti, BACuanti PCR y BACuanti trazables con cepas de Colecciones de8. ¿ Son los productos BACuali, BACuanti, BACuanti PCR y BACuanti trazables con cepas de Colecciones deCultivo?
9. ¿En que actividades del laboratorio puedo emplear estos materiales?
10. ¿Es obligatoria la realización de todas estas actividades?
11. ¿Qué es validar un método de ensayo?
12. ¿Cuales son los controles de calidad que debe efectuar un laboratorio?
13. ¿Cuales son los controles de calidad internos que debe realizar un laboratorio?
14. ¿Qué son los controles externos de calidad?
15. ¿Con que periodicidad debe un laboratorio realizar las actividades internas de control de calidad?
Grupo de Trabajo
fff
w
Phone +34 966 10 55 01Fax +34966 10 55 03
www.ielab.escomercial@ielab.es
Making quality control easy
fffcomercial@ielab.es