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María Jesús Molina Cimadevila
OPTIMIZACIÓN DEL MANEJO DE COLONIAS DE
RATONES MODIFICADOS GENÉTICAMENTE
OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
6 EUROS/JAULA/MES
IN 39%
UMH 44%
PROYECTOS 17%
OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES
MEDIDAS PARA OPTIMIZAR EL USO DE RATONES
•Formación
•Seminario. Materiales en la intranet •Curso de gestión de colonias
•Programa de criopreservación
•Asesoramiento •Penalizaciones económicas
IMPORTANCIA DEL FONDO GENÉTICO
FONDO GENÉTICO
Neuron. 1997 Oct;19(4):755-9. Mutant mice and neuroscience: recommendations concerning genetic background. Banbury Conference on genetic background in mice. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9354323
CONSANGUÍNEOS INBRED
•Homocigotos en el 98 % de sus genes • Prácticamente genéticamente idénticos • Se mantienen con cruces hermano-hermana •Adecuados como fondo genético de ratones modificados genéticamente
INBRED
NO- CONSANGUÍNEOS OUTBRED
• Genéticamente diversos • Para mantener su diversidad genética es necesario mantener al menos 20 parejas criando al azar • No son adecuados como fondo de ratones modificados genéticamente
OUTBRED
OUTBRED
FONDO GENÉTICO
http://jaxmice.jax.org/support/husbandry/breeding-considerations.html
FONDO GENÉTICO
http://phenome.jax.org/
FONDO GENÉTICO
http://phenome.jax.org/
FONDO GENÉTICO
http://phenome.jax.org/
FONDO GENÉTICO COMO CAMBIAR EL FONDO GENÉTICO DE UNA LÍNEA
LÍNEAS COISOGÉNICAS
N10 99.8%
X
X
X
N2 Porcentaje de genoma de la cepa donante 50%
N3 75%
N5 94%
Porcentaje de genoma de cepa donante= 1- (1/2)n-1
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
FONDO GENÉTICO COMO CAMBIAR EL FONDO GENÉTICO DE UNA LÍNEA
LÍNEAS COISOGÉNICAS
X
X
X
N2: 3 MESES
N3: 6 MESES
N5: 15 MESES
N10: 30MESES
SPEED CONGENICS
15 meses
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
FONDO GENÉTICO
A partir de N10
Si el alelo no es letal Si el alelo es letal
X
CREAR LÍNEA HOMOCIGOTA CONTINUO BACKCROSSING
CRUCE HERMANO X HERMANA A A
A A A
1/4 1/2 1/4
A A
A A
A A
A A
A A
A X
A
1/2 1/2
X
X
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
NOMENCLATURA LÍNEAS COISOGÉNICAS
Nn Ff
n-1 generaciones de backcrossing f generaciones de cruce hermano-hermana
N15 F8
14 generaciones de backcrossing 8 generaciones de cruce hermano-hermana
Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995
DATOS REPRODUCTIVOS BÁSICOS
REPRODUCCIÓN
•Pubertad 6-8 semanas •Gestación 19-21 días •Destete 21-28 días •Tamaño de camada 2-12 crías (muy dependiente de cepa) •Reemplazo de reproductores 7-8 meses de edad. •Estro postparto
REPRODUCCIÓN
3semanas 3semanas
Nace la primera camada Celo postparto
GESTACIÓN GESTACIÓN LACTANCIA
Nace la segunda camada Celo postparto
Destete de la primera camada
REPRODUCCIÓN
Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas
Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas
REPRODUCCIÓN
Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas
Destete de ratones de 3 semanas
3 semanas
Destete de ratones de 3 semanas
3 semanas
REPRODUCCIÓN
CRUCE
Mes y medio
3 semanas
3 semanas
3 semanas
3 semanas
3 semanas
SUSTITUCIÓN DE REPRODUCTORES
•Reemplazar a los reproductores antes de que decline su eficiencia reproductiva, y siempre si: No producen camadas dentro de los 60 dias del cruce o desde su última camada Producen camadas pero no destetan en 2-3 camadas. •Tener reproductores de distintas edades en la colonia •Cruzar reproductores pronto. •Usar machos expertos con hembras jóvenes.
SISTEMAS DE CRÍA DE RATONES
CRÍA DE RATONES TRANSGÉNICOS
COLONIA DE STOCK/MANTENIMIENTO
COLONIA EXPERIMENTAL
4 meses !NO MÁS!
MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK
HOMOCIGOSIS
COSTE ECONÓMICO: 12-18 euros/mes
MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK
HOMOCIGOSIS
COSTE ECONÓMICO: 18 euros/mes
MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK
HETEROCIGOSIS
COSTE ECONÓMICO: 12 euros/mes
CRÍA DE RATONES TRANSGÉNICOS
COLONIA DE STOCK/MANTENIMIENTO
COLONIA EXPERIMENTAL
COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
•¿ Cuántos animales necesito? •¿Con qué frecuencia? •¿De qué género? •¿De qué genotipo?
Nº de cruces
COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
Para C57BL/6J
COLONIA EXPERIMENTAL
¿CUANTOS CRUCES NECESITO?
http://helixweb.nih.gov/CAMP/ Hoffert, Condinional Allele Mouse Planner (CAMP): software to facilitate the planning and design of breeding strategies involving mice with conditional alleles. Transgenic Res. 2011 Aug 26. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21870117
FECUNDACIÓN IN VITRO
+
Hormonación y obtención de ovocitos (20:00 h.)
Obtención de esperma
4-6 hembras/ sesión 1 macho transgénico/ sesión
Fecundación in vitro
100-200 embriones de 2 células (en función de la línea)
Transferencia de embriones
30-50 ratones
CRIOPRESERVACIÓN
PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN
+
Hormonación y obtención de ovocitos (20:00 h.) Obtención de esperma
4-6 hembras/ sesión 1 macho transgénico/ sesión
Fecundación in vitro
100-200 embriones de 2 células (en función de la línea)
Congelación lenta
PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN
•ANEXO DE CRIOPRESERVACIÓN
•APORTAR 2-4 MACHOS (HETEROCIGOSIS), A SER POSIBLE QUE HAYAN SIDO PADRES.
•COSTE ECONÓMICO: 300 euros /línea
PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN
Dr. Lluis Montoliu
Dr. Lluis Montoliu
ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLOS DEL COMITÉ
ÉTICO
PROTOCOLOS ESTANDARIZADOS BLOQUE ANESTESIA PNT A.1 ANESTESIA INHALATORIA PNT A.2 ANESTESIA CON KETAMINA MEDETOMIDINA … BLOQUE QUIRÚRGICOS PNT Q. 1 CUIDADOS PERIOPERATORIOS PNT Q.2 ELECTROPORACIÓN IN UTERO PNT Q.3 CRANEOTOMÍA ... INCORPORA UNA EVALUACIÓN DE LA SEVERIDAD DEL PROCEDIMIENTO SEGÚN LA NUEVA DIRECTIVA EUROPEA.