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Pruebas básicas de Pruebas básicas de CoagulaciónCoagulación
Departamento de Hemostasia y Departamento de Hemostasia y Trombosis. IIHEMA Trombosis. IIHEMA
Academia Nacional de MedicinaAcademia Nacional de Medicina
Vía Intrínseca de la Vía Intrínseca de la coagulacióncoagulación
BioqBioq. Luis Bastos. Luis BastosDpto. Hemostasia y TrombosisDpto. Hemostasia y Trombosis
IIHEMA IIHEMA Academia Nacional de MedicinaAcademia Nacional de Medicina
Fibrinógeno
M. Fibrina
Fibrina
IIa
FTVIIaCa2+
XIIIa
VIA INTRÍNSECA VIA INTRÍNSECA DE LA DE LA
COAGULACIONCOAGULACION
XII XIIa
XI XIa
IX IXaVIIIaFLCa2+
Ca2+
PK
X
XaVaFLCa2+
QAPM
IIHEMAIIHEMA
II
¿QUÉ PRUEBAS ¿QUÉ PRUEBAS EVALÚAN LA VIA EVALÚAN LA VIA
INTRÍNSECA DE LA INTRÍNSECA DE LA COAGULACION?COAGULACION?
IIHEMAIIHEMA
XIIXII XIIaXIIa
XIXI XIaXIa
IXIX IXaIXaVIIIaVIIIaFLFLCaCa2+2+
CaCa2+2+
FCFC
XX
XaXaVaVaFLFLCaCa2+2+
IIII
IIaIIaFibrinógenoFibrinógeno
FibrinaFibrina
ActivadorActivador+ FL+ FL
VIA INTRINSECAVIA INTRINSECA
APTT APTT KCT KCT SCTSCT
APTT o KPTTAPTT o KPTT•• Prueba de elección para la evaluación Prueba de elección para la evaluación
de la vía intrínsecade la vía intrínseca
IIHEMAIIHEMA
APTTAPTT
¿CUALES SON LOS ¿CUALES SON LOS COMPONENTES Y/O COMPONENTES Y/O
REACTIVOS NECESARIOS REACTIVOS NECESARIOS PARA REALIZAR LA PARA REALIZAR LA DETERMINACIÓN?DETERMINACIÓN?
IIHEMAIIHEMA
Tiempo de Tiempo de TromboplastinaTromboplastinaParcial ActivadaParcial Activada
•• Fosfolípidos de distinto Fosfolípidos de distinto
origen y concentraciónorigen y concentración
•• Activador (Kaolín, Activador (Kaolín, AcAc. . ElágicoElágico, ,
Sílice)Sílice)
•• Cloruro de calcio 0,025 MCloruro de calcio 0,025 M
IIHEMAIIHEMA
APTTAPTT
¿Qué sensibilidad ¿Qué sensibilidad debería poseer el debería poseer el
reactivo de elección ?reactivo de elección ?
IIHEMAIIHEMA
APTTAPTT
Déficit de factores de la víaDéficit de factores de la vía
Presencia de heparinaPresencia de heparina
Inhibidores de la víaInhibidores de la vía
IIHEMAIIHEMA
¿ DE QUÉ VARIABLES ¿ DE QUÉ VARIABLES VA A DEPENDER LA VA A DEPENDER LA
SENSIBILIDAD DE LA SENSIBILIDAD DE LA PRUEBA?PRUEBA?
IIHEMAIIHEMA
APTTSensibilidad
Activador Naturaleza y concentración de FL
IIHEMAIIHEMA
¿ CÓMO REALIZAMOS ¿ CÓMO REALIZAMOS LA PRUEBA ?LA PRUEBA ?
IIHEMAIIHEMA
APTT o KPTTAPTT o KPTT
•• 100 100 µµl plasma pacientel plasma paciente
•• 100 100 µµl l cefalinacefalina + activador+ activador
2 minutos 37 2 minutos 37 ººCC
••100 100 µµl l cloruro de calcio 0,025Mcloruro de calcio 0,025M
••V.NV.N.: 37.: 37--48 segundos48 segundosIIHEMAIIHEMA
¿ES IMPORTANTE ¿ES IMPORTANTE
RESPETAR EL TIEMPO RESPETAR EL TIEMPO DE INCUBACIÓN?DE INCUBACIÓN?
IIHEMAIIHEMA
VIA EXTRINSECAVIA INTRINSECA
XIIIaXIIIa
VIIaFTPL Ca 2+
fibrinógeno fibrinafibrina
Fibrina insolubleFibrina insoluble
IX IXa
VIIIaPL Ca 2+X
Xa XVaPL Ca 2+
II IIa
XIIa QAPM PK
XI XIa
IIHEMAIIHEMA
FASE DE CONTACTO
¿ EN QUÉ ¿ EN QUÉ SITUACIONES SITUACIONES
PENSARIAMOS AL PENSARIAMOS AL OBTENER UN APTT OBTENER UN APTT
PROLONGADO ?PROLONGADO ?IIHEMAIIHEMA
APTT prolongadoAPTT prolongado
•• Pacientes bajo tratamiento Pacientes bajo tratamiento anticoagulante oral
•• DDééficit de factores : VIII, IX, XI, ficit de factores : VIII, IX, XI, XII, QAPM, PKXII, QAPM, PK
anticoagulante oral
•• Fibrinógeno < 100 Fibrinógeno < 100 mgmg//dldl
IIHEMAIIHEMA
APTT prolongadoAPTT prolongado
•• Heparina no fraccionadaHeparina no fraccionada
•• InhibidoresInhibidores
•• P. P. PolitransfundidoPolitransfundido ↓↓ VIII, VVIII, V
IIHEMAIIHEMA
APTT prolongadoAPTT prolongado
•• DDééficitficit de de vitaminavitamina KK
•• HepatopatHepatopatííasas
•• CIDCID
IIHEMAIIHEMA
ANTE UN APTT ANTE UN APTT PROLONGADO, PROLONGADO,
¿ QUÉ PRUEBA ¿ QUÉ PRUEBA DEBEMOS REALIZAR ?DEBEMOS REALIZAR ?
IIHEMAIIHEMA
Corrección con
plasma normal
( relación 1:1)
IIHEMAIIHEMA
APTT prolongadoAPTT prolongadoAPTT mezcla plasma del
paciente con plasma normal (1:1)
No corrige o prolonga
Corrige
Déficit de factores Inhibidor
IIHEMAIIHEMA
APTTAPTT
Corregir con plasma normal (1:1)
Indice de Rosner
APTT (P+N) – APTT N
APTT P
> Valor de corte (0,1)⇒ No Corrige
≤ Valor de corte ⇒ Corrige
IIHEMAIIHEMA
APTTAPTT
APTT (P+N) – APTT NAPTT P
= 0,10Valor de corte
P = 80 P = 80 segseg N = 40 N = 40 segsegP+NP+N
46 46 segseg 55 55 segseg
Corrige Corrige No CorrigeNo Corrige
¿ QUÉ HACER SI ¿ QUÉ HACER SI TENEMOS UN APTT TENEMOS UN APTT PROLONGADO, QUE PROLONGADO, QUE
CORRIGE Y FACTORES CORRIGE Y FACTORES VIII, IX, XI, XII VIII, IX, XI, XII NORMALES ?NORMALES ?
IIHEMAIIHEMA
APTT c/incubación prolongada (10 min. a 37°C)
Corrige
Posible déficit Precalicreínas
IIHEMAIIHEMA
¿ CÓMO REALIZAMOS ¿ CÓMO REALIZAMOS LA DETERMINACIÓN LA DETERMINACIÓN DE LOS FACTORES DE DE LOS FACTORES DE
LA VÍA ?LA VÍA ?
IIHEMAIIHEMA
Determinación de factoresDeterminación de factores
•• Modificación del APTTModificación del APTT
•• Reactivos:Reactivos:-- fosfolípidos de distinto origen fosfolípidos de distinto origen
y concentración y concentración
-- activadoractivador
-- cloruro de calcio 0,025 M cloruro de calcio 0,025 M
-- plasma deficiente en factor plasma deficiente en factor
a estudiar, (diluido ?)a estudiar, (diluido ?)IIHEMAIIHEMA
Determinación de factoresDeterminación de factores
•• Muestra: plasma diluido 1/5, 1/10, 1/20Muestra: plasma diluido 1/5, 1/10, 1/20
•• Curva del factor :Curva del factor :
--diluciones del estándar:diluciones del estándar:
1/5, 1/10, 1/20, 1/401/5, 1/10, 1/20, 1/40
•• Diluyente Fluido II Diluyente Fluido II (buffer (buffer OwrenOwren
modificado, pH 7,35)modificado, pH 7,35)
IIHEMAIIHEMA
Determinación de factoresDeterminación de factores
•• 50 50 µµl dilucil dilucióón pacienten paciente
•• 50 50 µµl dilucil dilucióón plasma deficienten plasma deficiente
•• 50 50 µµl l cefalinacefalina + activador+ activador
2 minutos 37 2 minutos 37 ººCC
•• 50 50 µµl l cloruro de calcio 0,025Mcloruro de calcio 0,025M
IIHEMAIIHEMA
Determinación de factoresDeterminación de factores
•• V.NV.N.: 50%.: 50%--150%150%
•• Valores : Valores :
déficit del factor déficit del factor
inhibidorinhibidor
IIHEMAIIHEMA
Determinación de factoresDeterminación de factores
IIHEMAIIHEMAFactor (U/dl)
Tiem
po (s
eg)
normal
inhibidor específico
o déficit
DEFICIENCIA DE FACTORESDEFICIENCIA DE FACTORES
DEFICIENCIADEFICIENCIA INCIDENCIAINCIDENCIA HERENCIAHERENCIA
FibrinógenoFibrinógeno 1:1 millón1:1 millón ARAR
Factor IIFactor II 1:2 millones1:2 millones ARAR
Factor VFactor V 1:1 millón1:1 millón ARAR
Factor VIIFactor VII 1:500.0001:500.000 ARAR
Factor VIIIFactor VIII 1:10.0001:10.000 XLRXLR
Factor IXFactor IX 1:60.0001:60.000 XLRXLR
Factor XIFactor XI 1:100.0001:100.000 ARAR
Factor XIIIFactor XIII 1:2 millones1:2 millones ARAR
IIHEMAIIHEMA
Vía final Vía final o comúno común
BioqBioq. Luis Bastos. Luis BastosDpto. Hemostasia y TrombosisDpto. Hemostasia y Trombosis
IIHEMA IIHEMA Academia Nacional de MedicinaAcademia Nacional de Medicina
VIA EXTRINSECAVIA INTRINSECA
XIIa HMK PK
II IIa
fibrinógeno fibrinafibrina
Fibrina insolubleFibrina insolubleXIIIaXIIIa
XI XIa
IX IXaVIIIaPL Ca 2+
X Xa
VIIaFTPL Ca 2+
XVaPL Ca 2+
IIHEMAIIHEMA
¿ QUÉ PRUEBAS ¿ QUÉ PRUEBAS PODEMOS UTILIZAR PODEMOS UTILIZAR
PARA EVALUAR PARA EVALUAR
ESTA VÍA ?ESTA VÍA ?
IIHEMAIIHEMA
Tiempo de Tiempo de
Trombina (TT)Trombina (TT)
Fibrinógeno (I)Fibrinógeno (I)
IIHEMAIIHEMA
Tiempo de Tiempo de
Trombina (TT)Trombina (TT)
Tiempo de TrombinaTiempo de Trombina
•• Mide el tiempo de coagulación del Mide el tiempo de coagulación del plasma en presencia de trombinaplasma en presencia de trombina. .
•• Evalúa la transformación de Evalúa la transformación de fibrinógeno a fibrina, pero excluye la fibrinógeno a fibrina, pero excluye la participación del factor XIII.participación del factor XIII.
IIHEMAIIHEMA
Tiempo de TrombinaTiempo de Trombina
•• Reactivo: Reactivo:
-- solución de trombina de solución de trombina de
10 unidades/ml10 unidades/ml
•• Muestra: Muestra:
-- plasma citratadoplasma citratado
IIHEMAIIHEMA
¿ CÓMO REALIZAMOS ¿ CÓMO REALIZAMOS LA PRUEBA ?LA PRUEBA ?
IIHEMAIIHEMA
Tiempo de TrombinaTiempo de Trombina
•• 100 100 µµl de plasmal de plasma 30 segundos 3730 segundos 37ººCC 100 100 µµl de l de
trombinatrombina
•• Se debe informar su valor en Se debe informar su valor en relacirelacióónn
con el normal del dcon el normal del díía.a.
-- valores normales entre 16valores normales entre 16--22 segundos.22 segundos.
IIHEMAIIHEMA
¿ EN QUÉ ¿ EN QUÉ SITUACIONES SITUACIONES
TENDRÍAMOS UN TT TENDRÍAMOS UN TT PROLONGADO ?PROLONGADO ?
IIHEMAIIHEMA
T T prolongadoT T prolongado
•Fibrinógeno disminuido (<100mg%)•Fibrinógeno anómalo
•Heparina
•PDF-DD
•Paraproteínas
•HeparinoidesIIHEMAIIHEMA
T. TROMBINAT. TROMBINACorregir con plasma normal (1:1)
P= 25seg N= 16segN/2= 20seg P+N= ¿?
P+N< N/2 ≥ N/2
Corrige No Corrige
Fibrinógeno (I)Fibrinógeno (I)
IIHEMAIIHEMA
Determinación de FibrinógenoDeterminación de Fibrinógeno
•• Modificación Tiempo de TrombinaModificación Tiempo de Trombina
(método de (método de ClaussClauss))
•• Reactivos: solución de trombina Reactivos: solución de trombina
(concentración de 100 ó 75 U/ml)(concentración de 100 ó 75 U/ml)
IIHEMAIIHEMA
Determinación de FibrinógenoDeterminación de Fibrinógeno•• Muestras :Muestras :
-- diluidas 1/10 en buffer veronal diluidas 1/10 en buffer veronal
OwrenOwren pH=7,35pH=7,35
•• Curva de calibración: Curva de calibración:
-- diluciones 1/5, 1/10, 1/20 y diluciones 1/5, 1/10, 1/20 y
1/40 del 1/40 del estándardestándard..
IIHEMAIIHEMA
¿ CÓMO REALIZAMOS ¿ CÓMO REALIZAMOS LA PRUEBA ?LA PRUEBA ?
IIHEMAIIHEMA
100 100 µµl Trombina +l Trombina +100 100 µµl de dilucil de diluciónn de plasmade plasma
Tiempo de Tiempo de coagulacicoagulacióónn
Tiempo de coagulación es Tiempo de coagulación es inversamente proporcional a la inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógenoconcentración de Fibrinógeno
IIHEMAIIHEMA
Determinación de FibrinógenoDeterminación de Fibrinógeno
•• Los resultados se expresan en Los resultados se expresan en mgmg/dl./dl.
•• V.NV.N.: 200.: 200--400 400 mgmg//dldl
IIHEMAIIHEMA
Resultados : TT alterado,TP normal,APTT normalResultados : TT alterado,TP normal,APTT normal
mezcla del plasma del paciente
c/normal (1:1)
Dosaje de Fibrinógeno
Hipo o afibrinogenemia
Corrige No corrige
Disminuido
T de Reptilasa
Alterado Normal
Disfibrinogenemiacongénita o adquirida
Inhibición tipo
heparina
IIHEMAIIHEMA
¿ Qué hacer ante un paciente ¿ Qué hacer ante un paciente con antecedentes de con antecedentes de
sangrado tardío, que presentasangrado tardío, que presentaAPTT, PT y TT normalesAPTT, PT y TT normales ??
IIHEMAIIHEMA
Determinar
Factor XIII
IIHEMAIIHEMA
Factor XIII
Alterado Normal
Determinación de α-2 antiplasmina
Disminuído: déficit congénito o adquirido
Déficit congénito o adquirido del FXIII o inhibidor del FXIII
IIHEMAIIHEMA
ESTRUCTURA DEL FACTOR XIIIESTRUCTURA DEL FACTOR XIIISubunidad A (XIIIA):Cromosoma 6globularSitio activoMonocitos, megacariocitos,placenta, hígadoA
A
B
B
Tetrámero (A2B2)Subunidad B (XIIIB)
Cromosoma 1FilamentosaTransportador XIIIAHígado
IIHEMAIIHEMA
¿ CUALES SON LAS ¿ CUALES SON LAS FUNCIONES DEL FUNCIONES DEL
FXIII?FXIII?
IIHEMAIIHEMA
•• Estabilizar el coágulo Estabilizar el coágulo ((transamidasatransamidasa))
•• Produce la unión entre la fibrina y Produce la unión entre la fibrina y la la αα2 antiplasmina.2 antiplasmina.
IIHEMAIIHEMA
Funciones del F XIIIFunciones del F XIII
•• Entrecruzamiento (uniones covalentes) Entrecruzamiento (uniones covalentes) entre: entre:
IIHEMAIIHEMA
monmonóómeros de fibrina meros de fibrina
malla de fibrina malla de fibrina
fibronectinafibronectina
colcoláágeno (matriz para proliferacigeno (matriz para proliferacióón n
de fibroblastos) de fibroblastos)
αα22-- antiplasminaantiplasmina
fibrinógeno fibrinafibrina
Fibrina insolubleFibrina insolubleXIIIaXIIIa
VIA INTRINSECAXIIaHMKPK
XI XIa
VIA EXTRINSECA
IX IXaVIIIaPL Ca 2+
X
Xa
VIIaFTPL Ca 2+
XVaPL Ca 2+
II IIa
IIHEMAIIHEMA
E
D
E E E
D D D D D DE
D D
E
D DD D
trombina
2FpA + 2FpBD
A AB B
E
D D
FIBRINOGENO
E
D DE
D D
MONOMERO DE FIBRINA
DIMERO DE FIBRINA
F XIIIa
POLIMERO DE FIBRINA IIHEMAIIHEMA
Manifestaciones clínicasManifestaciones clínicas
•• Diátesis hemorrágicas tardías:Diátesis hemorrágicas tardías:
-- caída del cordón umbilicalcaída del cordón umbilical
-- traumas o cirugíastraumas o cirugías
-- hemorragias intracraneales hemorragias intracraneales
(SNC, ¼ pacientes deficitarios)(SNC, ¼ pacientes deficitarios)
•• Cicatrización tardía y anómala de heridasCicatrización tardía y anómala de heridas
•• Abortos espontáneos y recurrentes Abortos espontáneos y recurrentes
IIHEMAIIHEMA
PruebaPrueba de de solubilidadsolubilidad
¿¿CCóómomo evaluarevaluar la la deficienciadeficiencia de FXIIIde FXIII??
Urea oUrea oAc.AcAc.Acééticotico
CaCa2+2+ o o IIaIIa
plasmaplasma
¿¿SensibilidadSensibilidad??
IIHEMAIIHEMA
SOLUBILIDADPlasmas deficientes (artificiales)Plasmas deficientes (artificiales)
0
50100
150
200250
300
1% NP 5% NP 10% NP
IIa/Aa
Ca/Aa
Ca/Urea
3000
2000
1000
500
Tiempo (min)
Concentración de plasma (%)
IIHEMAIIHEMA
PRUEBA DE PRUEBA DE SOLUBILIDAD DEL SOLUBILIDAD DEL
COAGULOCOAGULO
Trombina/Ac.AcTrombina/Ac.Acééticotico
mayor mayor sensibilidadsensibilidadtiempostiempos mmáás s cortoscortos
EQAS, 2003EQAS, 2003
IIHEMAIIHEMA
Prueba de solubilidad en urea 5MPrueba de solubilidad en urea 5M
• 200 µl de PPP• 100 µl buffer Owren• 200 µl Cl2Ca
30 minutos a 37º C
3 ml de urea 5 M
Valor normal: insoluble > 24 horas IIHEMAIIHEMA
Solubilidad en TrombinaSolubilidad en Trombina--AcéticoAcético
•• 200200µµl fisiológica l fisiológica •• 200 200 µµl plasma l plasma •• 100 100 µµl trombina (30UI/ml)l trombina (30UI/ml)
30min 3730min 37
3ml 3ml AcAc. Acético al 2%. Acético al 2%
IIHEMAIIHEMA
Laboratorio (Cuantificación)Laboratorio (Cuantificación)
•• Inmunoelectroforesis específica Inmunoelectroforesis específica ((LaurellLaurell) para subunidades A y B.) para subunidades A y B.
•• Elisa para subunidades A y B.Elisa para subunidades A y B.
IIHEMAIIHEMA
Sistema Sistema FibrinolíticoFibrinolítico
BioqBioq. Luis Bastos. Luis BastosDpto. Hemostasia y TrombosisDpto. Hemostasia y Trombosis
IIHEMA IIHEMA Academia Nacional de MedicinaAcademia Nacional de Medicina
Sistema FibrinolíticoSistema Fibrinolítico
Plasminógeno PAIPAI
Plasmina
α2 - Antiplasmina
u-PA/u-PARt-PA
FibrinaFibrina PDFIIHEMAIIHEMA
Sistema FibrinolíticoSistema Fibrinolítico
TestGlobales
PAI
α2 -PI
•Lisis de Euglobulinas
•Lisis en Sangre Entera
Inhibidores
•PDF/f.
•D-Dímero
Marcadores de Fibrinolisis
• Plasminógeno
• t-PA
Sustrato y activador
IIHEMAIIHEMA
Evaluación Fibrinolítica
Método funcional Dosaje de plasminógeno cromogénico
Electroinmunoensayo
Método funcional Dosaje de α2-antiplasmina cromogénico
Electroinmunoensayo
Lisis de Euglobulinas
Método funcional Dosaje de plasminógeno cromogénico
Electroinmunoensayo
Método funcional Dosaje de α2-antiplasmina cromogénico
Electroinmunoensayo
Lisis de EuglobulinasIIHEMAIIHEMA
Pre y post Lisis de Euglobulinas isquemia por
oclusión venosa
TPA Método funcional PAI cromogénico
Dímero D Aglutinación PDF en látex
IIHEMAIIHEMA
Evaluación Fibrinolítica
Puntos a tener en cuenta:Puntos a tener en cuenta:•• Reposo previoReposo previo : :
-- 20 minutos (el estrés y ejercicio 20 minutos (el estrés y ejercicio
la liberación endotelial de la liberación endotelial de tPAtPA))
•• Ayuno previo:Ayuno previo:
-- Cafeína: la actividad Cafeína: la actividad
fibrinolítica.fibrinolítica.
-- Carbohidratos ricos en calorías: Carbohidratos ricos en calorías:
la actividad del PAIla actividad del PAI--11IIHEMAIIHEMA
Puntos a tener en cuenta:Puntos a tener en cuenta:
•• EvitarEvitar ::
-- AlcoholAlcohol: : la actividad fibrinolíticala actividad fibrinolítica
por la liberación delpor la liberación del
PAIPAI--11
-- Tabaco: el antígeno del Tabaco: el antígeno del tPAtPA
IIHEMAIIHEMA
0
5
10
15
9 12 15 18 21 24 3 6 9
Hora
PAI B
ioló
gico
(UI/m
l)
RITMORITMOCIRCADIANOCIRCADIANO
NormalesNormales
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
9 12 15 18 21 24 3 6 9
Hora
tPA
Bio
lógi
co (U
I/ml)
0
2
4
6
8
9 12 15 18 21 24 3 6 9
Hora
tPA
inm
unol
ógic
o (n
g/m
l)
AE AE WallnöferWallnöfer etet al, 1993al, 1993IIHEMAIIHEMA
Lisis del coáguloLisis del coágulo
•• Evalúa globalmente la actividad Evalúa globalmente la actividad fibrinolíticafibrinolítica
•• Afectada por los niveles de Afectada por los niveles de PlgPlg//PlmPlm, , fibrinógeno, activadores e inhibidores de fibrinógeno, activadores e inhibidores de la fibrinolisis (la fibrinolisis (αα22--PI)PI)
IIHEMAIIHEMA
Lisis del coáguloLisis del coágulo
•• Sangre recién extraída en tubo de vidrio Sangre recién extraída en tubo de vidrio limpio y seco.limpio y seco.
•• Baño a 37Baño a 37ºCºC, tomar la hora cuando , tomar la hora cuando coagula.coagula.
•• Tomar el tiempo de lisis completa del Tomar el tiempo de lisis completa del coágulocoágulo
IIHEMAIIHEMA
Lisis de Lisis de EuglobulinasEuglobulinas
•• Precipitación de fracción proteica Precipitación de fracción proteica (“Euglobulinas”) en medio ácido(“Euglobulinas”) en medio ácido
Activadores del Activadores del
Plasminógeno Plasminógeno
PAI
FibrinógenoFibrinógeno
PlgPlg
Plasmina PAIPlasmina
SobrenadanteSobrenadante::-- Inhibidores de la Plasmina (Inhibidores de la Plasmina (αα22--PI)PI)
IIHEMAIIHEMA
Lisis de Lisis de euglobulinaseuglobulinas
• 250 µl PPP* • 4 ml agua destilada • 70µl ácido acético (1%)
30 min. en heladera 4-8ºC
• Centrifugar a 1000 rpm, 5 min
(*) PPP obtenido de sangre anticoagulada (9:1) con citrato ácido de sodio. IIHEMAIIHEMA
Lisis de Lisis de euglobulinaseuglobulinas
• Descartar el sobrenadante
• 250µl de borato de sodio
• 250µl de CaCl2 0,025M
IIHEMAIIHEMA
FIBRINOLIFIBRINOLISISSIS
Respuesta a la isquemiaRespuesta a la isquemia
• Muestra basal (pre)
• Muestra luego de 10 min. de compresión(post)
• Esfingomanómetro: presión media entre la mínima y la máxima (del paciente)
IIHEMAIIHEMA
Respuesta a la isquemia• Tanto la muestra basal como la post oclusión
se deben recoger en tubos con citrato ácido y mantener refrigeradas
• Índice post/pre:
< 0,70 buena respuesta
0,70-0,75 pobre respuesta
> 0,75 mala respuesta
IIHEMAIIHEMA