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“AÑO De la integración nacional del
reconocimiento de nuestra diversidad”
EAP:
INGENIERÍA AMBIENTAL
tema:
Catedra:
MICROBIOLOGIA GENERAL
Catedratico:
Bglo. Mg CORDERO AZABECHE, Jorge
Integrantes:
AGUSTÍN BALDEON GABY HUISA ALTAMIRANO DEISY MOLINA VILCAS IMELDA ORELLANA CERRÓN PAMELA SÁEZ LANASCA RUTH SALAZAR HUÁNUCO JOEL. CAMARGO COLQUE CHAGUA .NEHEMÍAS
CULTIVO DE MICROORGANISMO
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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS
MICROBIOLOGÍA GENERAL
Este presente trabajo está dedicado a nuestros padres por la abnegada labor que desarrollan en bien de sus hijos y a nuestro docente por brindarnos sus conocimientos.
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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Indice:
1. Introducción……………………………………………………………………………………..02
1.1. Objetivos generales……………………………………………………………………….02.
1.2. Objetivos especificos……………………………………………………………………..02
2. Marco teorico / estrillado/………………………………………………………………..02
2.1. Materiales……………………………………………………………………………………….02
2.2. Procedimiento…………………………………………………………………………………02
2.3. Resultado………………………………………………………………………………………..02
2.4. Resultado de discusiones…………………………………………………………………02
2.5. Conclusiones……………………………………………………………………………………02
3. Marco teorico / diseminacion/…………………………………………………………..02
3.1. Materiales……………………………………………………………………………………….02
3.2. Procedimiento…………………………………………………………………………………02
3.3. Resultado…………………………………………………………………………………………02
3.4. Resultado de discusiones…………………………………………………………………02
3.5. Conclusiones…………………………………………………………………………………….02
4. Marco teorico / estrillado/………………………………………………………………….02
4.1. Materiales…………………………………………………………………………………………02
4.2. Procedimiento………………………………………………………………………………..02
4.3. Resultado………………………………………………………………………………………….02
4.4. Resultado de discusiones………………………………………………………………….02
4.5. Conclusiones…………………………………………………………………………………….02
BIOGRAFIAS………………………………………………………………………………………….02
o ANEXOS…………………………………………………………………………………….02
MICROBIOLOGÍA GENERAL
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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
INTRODUCCIÓN:
El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente
debido a su tamaño tan pequeño, por lo que es necesario recurrir a medios
nutritivos artificiales, donde se puedan desarrollar rápidamente y producir
grandes poblaciones. En estas condiciones se pueden manipular y efectuar
las investigaciones sedeadas.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es
imposible diferenciarlas solo con el uso de microscopio; en este caso, para
identificar cada tipo de bacteria, se estudiaran sus características
bioquímicas sembrándolas en medios de cultivos especiales. Algunos medios
contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las
especies.
Los medios nutritivos donde se desarrollan y multiplican los
microorganismo contienen nutrientes necesarios para su crecimiento, y se
denominan medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados.
En general los medios son ricos en proteínas no específicas, con el fin de
estimular el crecimiento de los microorganismos.
MICROBIOLOGÍA GENERAL
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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS
OBJETIVO GENERAL:
Aislar bacterias por el método de estriado, diseminación y difusión.
OBJETIVO ESPECIFICO:
Emplear la metodología adecuada para cada tipo de muestra. Diferenciar bacterias Gram (+) y Gram (-).
MARCO TEORICO
I. CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El cultivo de microorganismo consiste en proporcionarles las condiciones físicas químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función a las características del medio y cultivos discontinuos y continuos en función a su disponibilidad de nutrientes.
1.-SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
Gracias a la aplicación de los medios de cultivo, se ha llegado a conocer ampliamente el comportamiento cultural y fisiológico de la variada flora microbiana que pulula en los ambientes, permitiéndose la identificación específica.
a.- Siembra y Aislamiento de Microorganismos.
Concepto de Siembra: acondicionamiento de un microorganismo en un medio de cultivo
Aislamiento: permite la separación de microorganismos al estado de pureza a partir de una MUESTRA PROBLEMA.
Trasplante: la separación primaria de !a cepa a un medio de cultivo apropiado en tubo, que puede ser líquido o sólido. Se conserva la cepa pura y por tanto trasplantes en medios especiales, se logran conocer las propiedades culturales y bioquímicas y como resultado, la identificación específica.
Los trasplantes pueden ser:
De líquido a líquido De líquido a sólido De sólido a líquido De sólido a sólido
Referencias bibliográficas manual de microbiología Cultivos de Micro organismo
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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Cultivo microbiano Un cultivo es el crecimiento de poblaciones microbianas de forma controlada en un medio artificial.
Medio de cultivo Soporte que va a contener los nutrientes necesarios, así como unas condiciones óptimas de pH y humedad que permite el desarrollo y crecimiento de microorganismos.
Clasificación de los medios de cultivos
En función de su consistencia
Sólidos: al medio de cultivo sólido se le añade un agente gelificanté o solidificante. Se preparan en Erlenmeyer, se dejan enfriar y luego se pueden pasar o bien a una placa o bien a un tubo.
Los gelificantés más habituales son:
Agar Agar: es un alga que se caracteriza por ser inerte frente a los microorganismos y porque es líquido a la temperatura de ebullición y solidifica entre los 45-50ºC.
Líquidos o caldos: contiene los nutrientes y, en lugar de añadir el agar, tienen el agua que se utiliza para diluir el medio de cultivo. Se preparan en tubo.
Semisólidos: contienen agar (<5-10%). Se utilizan cuando queremos observar movilidad bacteriana. Se hace en tubo y se utiliza la siembra en picadura con asa recta.
Caldo nutritivo: extracto de carne + peptona + agua
Agar nutritivo: extracto de carne + peptona + agua + agar.
En función del uso que se le da
Enriquecidos: son aquellos medios en los cuales a un medio base se le añaden determinadas sustancias nutritivas que son necesarias para el crecimiento de un microorganismo exigente. Ejemplo: agar-sangre.
De enriquecimiento: se utilizan solamente cuando se sospecha que el microorganismo de la muestra se encuentra en un número muy pequeño. Se le aporta los nutrientes y se espera que crezcan de 6 a 8 horas. Esto se utiliza, por ejemplo, cuando se sospecha la contaminación en alimentos por Salmonella.
Diferenciales: incorpora determinadas sustancias que nos permiten diferenciar entre dos tipos de microorganismos. Ej. El agar de sal y manitol: nos permite diferenciar en el caso de los staphylococos, los que utilizan el manitol en su metabolismo de los que no. Si lo utilizan originan ácidos, con lo que el pH disminuye y el indicador cambia de color.
Selectivos: llevan incorporadas determinadas sustancias que inhiben el crecimiento de un microorganismo y facilita el crecimiento del microorganismo que nos interesa. Ej. Agar de sal y manitol: el NaCl (5%) inhibe el crecimiento de ciertos m.o y facilita el desarrollo de otros que crecen mejor en ese medio.
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Transporte y mantenimiento: se utilizan cuando la muestra no se puede procesar inmediatamente después de haberla tomado.
Condiciones de almacenamiento de los medios de cultivo
La mayoría de los medios de cultivo se encuentran deshidratados y éstos se deben conservar de la siguiente forma:
http://Informe-3-Bioquimica-Medios-de-Cultivo
Método de estriado:
Es el método más fácil y la más usada pata obtener cultivos. Para ello, con una aza de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio solido preparado en placa Petri. Conforme se van haciendo zigzag con el asa, debe tener una separación unas de otras de 1-3 mm para que cada vez se deposite en la superficie del medio menos microorganismo. La distribución puede ser por estrías simples/ un solo plano por todo el medio/ el número de estrías depende la cantidad de inoculo.
Estriado simple: esteriliza el filamento del aza de siembra y toma la parte de la caja de Petri que contiene el medio de cultivo sembrando. Cercas del mechero espera que se enfrié el aza y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera, ahora, toma un placa con agar estéril y con cuidado de no romper el gar, inocula la muestra en un extremo de la placa y con el aza en posición ligeramente horizontal realiza las estrías muy juntas.
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SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
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Para la siembra de estos microorganismos utilizamos la técnica del ISO PAGO,
BUCAL los materiales que utilizamos son un Isopo esterilizado, una placa Petri y nuestra muestra a sembrar “bacterias que se encuentra en la zona bucal”
Técnica de la siembre la bacterias bucales, realizamos el paso del Isopo en forma de sic sac en tres partes de la placa Petri 1 junto 2 semi junto y el 3 de manera separada
Muestra de bacterias bucales, rotuladas y debidamente aislada para su respectivo crecimiento
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MATERIALESHisopos
Placas petri con agar
Lápiz graso o plumón
MATERIALES PARA REALIZAR EL AISLAMIENTO POR EL METODO DE ESTRIADO
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PROCEDIMIENTO (AISLAMIENTO POR EL METODO DE ESTRIADO)
Recopilar las muestras respectivas de los diversos microorganismos existentes:
en la mano, cara y zona bucal; con hisopos respectivamente.
Tomar con la mano izquierda la placa Petri con agar, descansando la base sobre
los dedos, medio, angular o meñique; el índice actúa de bisagra y con el pulgar;
levantar la tapa lo suficiente para el paso del hisopo cargado. esta operación se
realiza a la altura del mechero encendido.
Con los hisopos se distribuye el inoculo por estrías en ZIGZAG con escasa
separación unas de otras.
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Recopilación de las muestras
Cogiendo la placa petri
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Dejar caer la tapa con el control de los dedos pulgar e índice.
Rotular los datos sobre el dorso de la placa petri sembrada así numero de
grupo tipo de siembra y fecha.
Rotulando
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Distribuyendo el inoculo
Muestra
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Incubar a 37°C por 24 horas. Colocar las placas en la estufa en posición
invertida.
RESULTADOS (FALTA)
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Incubar a 37°C
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AISLAMIENTO POR DISEMINACION (LECHE)
Se practica mediante la pipeta de Pasteur estéril para la toma del inoculo. Esta por capilaridad permite el ascenso del inoculo a discreción el cual es depositado sobre el medio solido contenido en la placa , una asada o una gota de la muestra a sembrar que luego se extenderá por toda la superficie del medio de cultivo con una espátula de Drigalsky.
La placa Petri del cultivo debe destaparse lo suficiente como para permitir la estrecha penetración de la espátula de siembra, así se evite la contaminación.
MATERIALES:
INSTRUMENTOS DE LABORATORIO
ESPATULA DE DRIGALSKY
PIPETA PASTEUR
PLACA PETRI
MUESTRA
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LECHE
PROCEDIMIENTO:
AISTLAMIENTO POR DISEMINACION (LECHE)
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Desechar la espátula en el frasco bacteriano. Tomar el inoculo de la muestra problema
con la pipeta Pasteur y depositar una gota sobre el medio de la placa Petri, que descansa en posición normal sobre la mesa.
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Introducir la espátula de drigalsky y diseminar la gota por la superficie del medio, no pasando dos veces por el mismo plano.
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AISLAMIENTO POR DIFUSION
El método que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra
en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar después cantidades conocidas de
las mismas en una serie de placas de Petri. Considerando que alguna de las diluciones
será tal que al distribuir una parte de ella en la placa, originará colonias aisladas.
Contando el número de colonias, el volumen sembrado en la placa y la dilución
correspondiente, podremos calcular el número de unidades formadoras de colonias
presentes en la muestra inicial.
Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y
hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias
aisladas. Se debe trabajar, como siempre, en condiciones estériles, flameando la boca
de los tubos antes y después de introducir la pipeta, en las proximidades del mechero.
Mediante una pipeta estéril, tomar una muestra del cultivo mixto, y depositar 1ml en
el primer tubo (dilución 10-1). Agitar hasta conseguir una suspensión homogénea.
Tomar otra pipeta estéril, y transferir de esta primera dilución 0,1ml al siguiente (10-
2), y así sucesivamente. A partir del tubo con dilución 10-2 y 10-4, con una pipeta
estéril, inocular en placa Petri tras incubar se podrán obtener colonias aisladas.
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MATERIALES:
EQUIPOS:
HORNO
son dispositivos eléctricos utilizados para esterilización que forman parte del equipamiento de laboratorio
BALANZA ELÉCTRICA
Se utiliza para pesar pequeñas cantidades de masa, en este caso para determinar el la masa de la tierra agrícola.
VORTEX Es un dispositivo simple que se usa comúnmente en los laboratorios para agitar pequeños tubos o frascos de líquido
MATERIALES DE VIDRIO:
LUNA DE RELOJ
Este instrumento en este caso nos ayudó para poder pesar la muestra.
VARILLA DE VIDRIO
La varilla de vidrio es de gran grosor y de vidrio que sirve para mover, remover, en este caso nos sirvió para homogenizar la muestra con la peptona.
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PLACAS PETRICajas cilíndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo.
TUBOS DE ENSAYO
Son de forma cilíndricas de vidrio por lo general, cerrado por un extremo, hay de varios tamaños; en este caso nos sirvió para la soluciones de(10-1,10-2,10-3,10-4)
PIPETAS ESTERILES
Tubos cilíndricos delgados terminados se emplean en la medición de pequeñas cantidades de líquidos, en este caso nos sirvió para tomar muestra y así depositarlas a cada soluciones que se encuentran en los tubos d ensayo
VASO PRECIPITADO
Es un recipiente que está hecho de vidrio graduado. Se usan principalmente para la preparación de disoluciones, en este caso utilizamos para la mezcla.
Solución:
• PEPTONA
Muestra:
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TIERRA AGRÍCOLA
• Traer 100 gramos
PROCEDIMIENTO
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1 .- P e sa r e n la b a la n za a n a líti c a 1 0 g d e ti e rra a g r íc o la
2 .- C o lo c a r e n e l v a so d e p re c ip ita c ió n u n p o c o d e p e p to n a y lu e g o e c h a r la ti e rra a g r íc o la 1 0 g y d iso lv e r.
3 .- C o n a y u d a d e u n a p ip e ta e ste r il sa c a m o s d e l v a so d e p re c ip ita c ió n (m u e stra o r ig in a l) 1 m l d e lo d isu e lto y e c h a r a u n o d e lo s tu b o s d e e n sa y o q u e se e n c u e n tra c o n la p e p to n a d e 9 m l y h o m o g e n iz a r (1 0 -1) .
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MICROBIOLOGÍA GENERAL
4.- Agitamos bien el tubo de 10 -1 con la ayuda del vórtex y con una nueva pipeta estéril transferir 1ml a un segundo tubo con
9ml de la solucion 10 -1. marcarndo como la dilución 10 -2
5.- Agitamos bien el tubo 10 -2 con la ayuda del vórtex y con una nueva pipeta estéril transferir 1 ml a un tubo con 9 ml de la
solcuión 10 -2. M arcando con la dilución 10 -3
6.- Finalmente agitamos bien el tubo 10 -3 con la ayuda del vórtex y con una nueva pipeta esteril transferir 1ml a un tubo
con 9ml de la solucion 10 -3. marcando con la dilucion 10 -4
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Resultados:
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7 .- P re n d e r e l M e ch e ro d e B u n se n y a b rir la p la ca P e tri co n te n id o e l a g a r n u tr ic io y co lo ca r 2 g o ta s d e la d ilu c ió n 1 0 -3 y 1 0 -4 y e sp a rc ir lo co n la e sp á tu la p a ra lu e g o se r
in cu b a d a p o r 2 4 - 4 8 h o ra s.
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CULTIVO DE MICROORGANISMOS CULTIVO DE MICROORGANISMOS
CONCLUSION:
Esta técnica consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas.
Tras incubamos podremos obtener colonias aisladas. El recuento de estas colonias nos permitirá conocer el número de células existentes en el cultivo original.
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