Anatomía Patológica2019
Dra. Leonor Moyano Schlegel
Servicio de Anatomía Patológica
Instituto Nacional del Cáncer
Hospital Clínico Universidad de Chile
TEMARIO
• DEFINICION
• RESEÑA HISTORICA
• LINEA DE TIEMPO
• AMBITOS DE LA PATOLOGIA
• TECNICAS Y PROCESOS
• INFORME HISTOPATOLOGICO
• FRONTERAS MOLECULARES
• IMPORTANCIA DEL COMITÉONCOLOGICO
Definición de :Patología
• Pathos: Enfermedad Logos: Estudio
• PATOLOGIA: Es el estudio científico de las enfermedades
• Implica los cambios morfológicos, funcionales y estructurales producidos en la Enfermedad.
Anatomía Patológica
La anatomía patológica es hoy una ciencia que estudia las enfermedades desde la morfología hasta la biología molecular .
• La patología la impulsaron los cirujanos y
ginecólogos, por necesidad en su práctica
clínica.
• La estrecha relación con estas
especialidades se mantiene hasta hoy.
- Comités oncológicos
- Reuniones de correlación
Línea de Tiempo
FUNCIONES DE UN SERVICIO DE
ANATOMIA PATOLOGICA
• Biopsias intraoperatorias o contemporáneas
• Biopsias diferidas
• Citologías ginecológicas y misceláneas
• Autopsias no medicolegales
• Reuniones anátomo-clínicas
• Comités oncológicos
• Interconsultas y auditorías
• Investigación
• Docencia
PUNTOS DE ACCION EN CLINICA DE LAANATOMIA PATOLOGICA
Diagnóstico: Benigno / Maligno“In situ”/ InvasorTipo HistológicoEstadio
Pronóstico: Factores HistopatológicosFactores InmunohistoquímicosFactores Moleculares
Tratamiento: Evaluación de respuestaIdentificación de dianas
CONTROL DE CALIDADGeneralidades
• FASE PREANALITICA– Toma de la Muestra– Solicitud de examen– Laboratorio confiable
• FASE ANALITICA– Diagnóstico hecho por especialista– Oportunidad– Correlación diagnóstica
• FASE POSTANALITICA– Asegurar la intervención y seguimiento– Participación en comité oncológico
Método de estudio en patología
• Macroscopía.
• Citología.
• Histología básica.
• Histoquímica y técnicas especiales.
• Inmunohistoquímica.
• Inmunofluorescencia.
• Microscopía electrónica.
• Citofotometría - Morfometría.
• Patología molecular.
• Telepatología.
Anatomía patológica: Material utilizado
Muestras célulares
fragmentos tisulares
órganos
Examen
macroscópico
microscópico
técnicas especialesDiagnóstico
histopatológico
Ca Papilar del Tiroides
Macroscopía
• Exámen visual básico
de las muestras.
• Permite orientar el
diagnóstico, la toma
de muestras para el
proceso y elegir las
técnicas para el
diagnósticoDescripción del órgano
Tamaño
Relaciones
Color
Consistencia
Corte
Alteraciones
HISTERECOMIA TOTAL
POLIPO
VESICULA BILIAR
CONGESTION
CALCULOS
DG: COLECISTITIS CRONICA LITIASICA REAGUDIZADA
Examen Macroscópico
44022
Ca de labio
BP 7756 - 01
BP 23825
Citología
• Estudio de la morfología
celular
• Permite examinar las
características nucleares
y citoplasmáticas
que diferencian unas
células de otras en
especial las de tipo
neoplásicas.
HE 100x
SERIE MIELOIDE EN MIELOGRAMA - GIEMSA
a b c d e f
TIPOS DE CITOLOGÍA
• Exfoliativa ( cuello uterino )
• Aspirativa o por punción ( mama, tiroides )
• Fluidos líquidos o lavados de cavidades. (Pleura )
• Raspado impronta o aposición de tejidos. ( úlceras )
Fijadores : Spray, alcohol de 96°
Mezcla de alcohol - citrato
Muy importante la fijación inmediata
BIOPSIA INTRAOPERATORIA
• Fijando el tejido por congelación durante el acto operatorio.
• Los cortes se realizan con un micrótomo de congelación.
• Las láminas se tiñen ( HE , azul de toluidina …)
• El proceso demora alrededor de 15
Indicaciones1. Definir carácter biológico de la lesión para decidir el tipo de cirugía.
2. Estudio de extensión para decidir magnitud de la cirugía.
3. Confirmación de bordes quirúrgicos.
RECURSO CARO Y ESCASO
Existen riesgos de error diagnóstico.
SOLO CUANDO IMPLICA CAMBIOS EN LA CIRUGIA
ETAPAS DEL PROCESEMIENTODE LAS BIOPSIAS
BIOPSIA DIFERIDA
• Es aquella que se estudia en forma definitiva con los
elementos diagnósticos disponibles.
• El nivel de estudio depende del tipo de muestra,
patología y recursos disponibles.
• Se debe considerar el estado del arte para efectos
médico legales.
Etapas de una BIOPSIA DIFERIDA
1. OBTENCION DE LA MUESTRA
2. ENVASE
Frasco de plástico, transparente, con tapa rosca y boca ancha, para que la muestra ingrese y salga con facilidad del frasco e impida la evaporación de la formalina.
TIEMPO DE ISQUEMIA
4. IDENTIFICACION DE LA MUESTRA
5. SOLICITUD DE EXAMEN:
debe contener :
- Nombre completo con ambos apellidos.
- Edad del paciente o fecha de nacimiento.
- Sexo.
- Nombre del profesional solicitante.
- Organo o lugar de procedencia del tejido.
- Tiempo de evolución de la enfermedad.
- Opinión diagnóstica
- Fecha del examen
- Toda información clínica relevante.
FECHA Nº
Solicitud de Biopsia/Citología C.R. ANATOMIA PATOLOGICA
IDENTIFICACION
Nombres A. Paterno A. Materno
RUT
FECHA NACIMIENTO
TELEFONO
EDAD SEXO F BENEFICIARIO M PRIVADO PROCEDENCIA
SERVICIO
PABELLON
FECHA DE OBTENCION MUESTRA
MUESTRAS
DIAGNOSTICO CLINICO
ANTECEDENTES
INTERCONSULTA:
MEDICO RESPONZABLE
Nombre Firma
ANTECEDENTES GINECOLOGICOS ( si procede )
G: P: A: FUR : pap alt: Tratamientos previos:
Embarazo: Cono: HT: RT: QT:
…………………………………………………………………………………………………………… USO ANATOMIA PATOLOGICA Cod dg Screening cod dg NOTIFICACION
RECHAZO CODIGOS MACRO ARCHIVO Aceptada 01-08-001
Rechazo 01-08-002 Tipo 1 01-08-004
Tipo 2 01-08-005
Tipo 3 01-08-006 Tipo 4 01-08-007 01-08-008
BANCO TUMORES
NUMERO DE MUESTRAS: TUMOR
SANO Patólogo Responzable
ES UNA INTERCONSULTA
FIJACION
• La fijación es el proceso mediante el cual
se detiene el proceso de autodigestión
citoplasmática y nuclear.
• Permite que la célula mantenga la forma
que tenía cuando estaba vital.
FORMALINA
• Fijador universal, – tiene como componente activo el formaldehido
• El volumen del líquido fijador – 5 a 10 volúmenes por 1 volumen de muestra.
• La solución comercial es al 37-40 % – al diluir 1L de esta solución 10 veces se alcanzará
entonces la dilución de formaldehído al 4% ó formalina al 10%.
Formalina tamponada o neutralizada.
EN EL LABORATORIO• RECEPCION EN LABORATORIO
• MACROSCOPIA
• ENCAPSULACION
• INCLUSION
• DESHIDRATACION E IMPREGNACION
• CORTE
• TINCION CORRIENTE
• MICROSCOPIA
• TINCIONES COMPLEMENTARIAS
• INFORME ANATOMO PATOLOGICO
• ARCHIVO
RECEPCION
Identificacion únicaIngreso al sistema
INCANCER: Sistema informatizado con base de datos desde 2014
1991
PROCESADOR DE TEJIDOS
Secuencia de baños de parafina, alcohol y xilol que permiten incluir los tejidos y hacerlos compatibles con los reactivos de tinción.
INCLUSION
Moldes o bloques o inclusiones
CORTE - MICROTOMO DE ROTACION
TINCIONY MONTAJE AUTOMATIZADO
Diagnóstico
HISTOQUÍMICAPAS
HE
IHQ - CMV
Banco de Tejidos en Parafina
TINCION CORRIENTE HEMATOXILINA EOSINA
Vellosidad placentaria
citotrofoblasto
Sinciciotrofoblasto
Eritroblastos fetales
NUCLEOS AZULES
CITOPLASMA ROSADO
Unidad Túbulo - Lobulillar
Células mioepiteliales
Actina +
S100 +
CALPONINA+
P63+
CD10+
TUMOR ENDOCRINO DE PANCREAS
Páncreas normal
tumor40x 100x
TECNICAS HISTOQUIMICAS
• Técnicas de tinción con acción bioquímica sobre el tejido.
Rojo Congo - Amiloide
Gram - Bacterias
Ziehl Neelsen - Bacilos ácido alcohol resistentes
Pearls - Fierro
Fontana Masson - Gránulos neurosecresión
Reticulina - retículo
Von Kossa - Calcio
Giemsa - hematología, gérmenes
Oil red O - Grasa
Luxol fast blue - Mielina
PAS
La técnica más utilizada es el
PAS que permite la identificación
de:
-mucopolisacáridos presentes en
las membranas basales.
- pared de hongos
- mucina de adenocarcinomas.
COLONIA DE BACTERIAS
ACTINOMICES
PAS PLATA
ASPERGILLUS (hifas ramificadas en 45° )
Van GiessonTinción tricrómica:
Colágeno rojo
Núcleo negros
Citoplasma amarillo
Linfocitos
Endotelio
Vaso
Colágeno
Van Giesson
Infarto antiguo de Miocardio
cicatriz
INMUNOFLUORESCENCIA
• Utiliza anticuerpos monoclonales contra diferentes antígenos tisulares o depósitos de inmunoglobulina en membranas basales. – Ig A, IgG, Complemento…
• Estos anticuerpos son acoplados a sustancias fluorescentes y luego visualizadas mediante un microscopio
que emite Luz Ultravioleta.
PIEL , PULMON Y RIÑON
INMUNOHISTOQUIMICA
Aplica la tecnología inmunológica
que ha permitido producir anticuerpos
monoclonales específicos contra
antígenos conocidos
Existen numerosos anticuerpos
disponibles que reconocen
marcadores tumorales, sustancias
tejido específica, diferentes
componentes celulares epiteliales,
estromales etc.
INMUNOHISTOQUIMICA (2)
Indicaciones:
• Tipificar estirpe celular
• Dg. diferencial de neoplasias de células grandes o pequeñas
• Tipificar neoplasias hematológicas
• Factores pronósticos.
Se usan en paneles de sondas para diagnóstico
Se requiere tejido muy bien conservado.
Paneles Dg Inmunohistoquímicos
Inmunohistoquímica Automatizada
TUMOR INDIFERENCIADO GASTRICO
GLANDULAS RESIDUALES
CELULAS TUMORALES
CD 20 +
DG: LINFOMA MALT
= linfocitos B
Ac. Anti - Citomegalovirus
Ac anti- EVB
LINFOMA DEL MANTO
CD 20 CICLINA D1
LEUCEMIA DE CÉLULAS VELLUDAS
aaaaaaa
CELULA DE REED STERNBERG
Célula binucleada con al menos un nucléolo en
cada lóbuloCD15
MICROSCOPIA ELECTRONICA
Es una técnica de gran costo y sofisticación, Actualmente restringida al estudio renal y de algunos tumores
La Fijación: se realiza en glutaraldehido, los cortes son semifinos, se montan en grillas metálicas y se somete a un haz de rayos catódicos
Los aumentos utilizados son:M corriente: 4x 10x 40x 1000x M.electrónica: 10000x 40000x
Se pueden observar:Gránulos de neurosecreción
Gránulos de Birbeck
Cuerpos de Weibel Palade
Melanosomas
BIOLOGIA MOLECULAR
Hibridación in situ
• FISH (con sonda fluorescente)– Her2 mama
– t11-14, 8-18 linfoma
– delp17
• PCR: (1984) Método de amplificación de DNA usando una DNA polimerasa en geles.
- para reconocer gérmenes TBC, HPV …
- translocaciones genéticas Linfomas
- reordenamientos Linfoma T
Gene expression patterns of 85 samples representing 78 carcinomas, three benign tumors, and four normal tissues, analyzed by hierarchical clustering using the 476 cDNA intrinsic clone set.
luminal subtype A, dark blue; luminal subtype B, yellow; luminal subtype C, light blue; normal breast-like, green; basal-like, red; and ERBB2+, pink. (B) The full cluster diagram scaled down (the complete 456-clone cluster diagram is available as Fig. 4). The colored bars on the right represent the inserts presented in C–G. (C) ERBB2 amplicon cluster. (D) Novel unknown cluster. (E) Basal epithelial cell-enriched cluster. (F) Normal breast-like cluster. (G) Luminal epithelial gene cluster containing ER.
Luminal A RE +++
Ck7 / 8 /18/ 5 +
BRCA2
Luminal B RE ++
Mut P53
Tipo Basal Triple –
EFGR +
BRCA1
Her2+ RE y RP-
Her2 +
Tipo mama normal RE+-
CK 5 / 7 -
Clasificación Genética del Cáncer de Mama
Oncotype DX: 21-Gene “Recurrence Score” Assay
Sobrevida para PAM50 Subtipos y Valores de ROR
Clin Cancer Res. 16(21): 5222–5232, 2010
Nature 490:61-70, 2012
2013;11:174-182 J Natl Compr Canc Netw
Cambios Genéticos en Tumores Sensibles o Resistentes a Inhibidores de Aromatasa
2013;11:174-182 J Natl Compr Canc Netw
Cambios Genéticos Intra - subtipos
Alteraciones Genéticas Linfomas
Ca. De Mama c-erb B2
Amplificación Her2neunormal
Paciente de alto riesgo. Susceptible a tto con HERCEPTIN
Laboratorio de Patología molecular INCANCER 2019
Identificación Mutación c.182A>T; p(Gln61Leu) en gen NRAS
Mutación NRAS
Control interno(calidad ADN)
La curva en color negro (fluoróforo FAM) indica la presencia de la Mutación c.182A>T;p(Gln61Leu) en gen NRASmientras que la curva anaranjada (Fluoróforo Hex) es el control interno de la muestra que indica que elADN genómico extraído es confiable para la reacción de PCR, representa la amplificación de otra región de ADN. Enparalelo se realizaron los controles negativos y positivos los cuales resultaron en lo esperado, es decir controlesnegativos amplificación (sin señal de fluorescencia FAM, HEX) controles positivos si hay amplificación (presencia defluorescencia FAM, HEX)
PCR EN TIEMPO FINAL : CASO CANCER DE COLON
Informe Histopatológico
• Protocolizados• Diagnósticos universales• Etapificación patológica
• Consensuados en COMITES ONCOLÓGICOS
• Son documentos públicos
Utiles para el diagnóstico, pronóstico y tratamiento.Herramienta para la docencia e investigación.
GRACIAS