“Purificación virtual de una proteína”
PRESENTA: MARTÍNEZ CASTAÑEDA FERNANDO
Para empezar…
Estable a T>50 °C pH entre 3.5 y 11
¿QUÉ ESPERARÍAMOS?
Como primer paso… PRECIPITACIÓN - Remoción contaminantes - Concentrar la muestra - Desnaturalizar proteínas
Tratamiento con calor
¿Qué condiciones
usar?
50 °C/15 min
A continuación…
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
- pH 6.0 - Gradiente de 0.0 a 0.5 M - Resina dietilaminoetilcelulosa (DEAE) Aniónico (+), proteínas pH>6 (-)
Cromatografía intercambio iónico
De las 20 que tenía…
Separación en función de su tamaño Elución en orden decreciente de PM
Filtración en gel
Finalmente…
Cromatografía de afinidad Anticuerpo monoclonal MC10C (Alta afinidad)
Elución con Tris/HCl 2mM pH 7.4
Y como resultado se tiene…
GRACIAS POR SU ATENCIÓN