ACARA VII

D A R A H

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Darah merupakan salah satu dari cairan tubuhyang mengalir dalam satu sistem peredaran daridan menuju jantung.

Fungsi darah :

mentransport oksigen, sari makanan (nutrien), sisa makanan, CO2, senyawa antara hasilmetabolisme (metabolit) dan hormon.

Menyeimbangkan kadar elektrolit dan pH (sifat homeostatis darah).

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Eritrosit

leukosit

Trombosit

cairan(plasma)

Fraksi-fraksipenyusun Darah

Fungsi plasma darah medium dalam transport nutrien, metabolit, vitamin, hormon dan lain-lain.

Senyawa organik utama yang ada di dalam plasma adalah protein.

Ada tiga jenis protein yaitu :

- albumin

- globulin

- fibrinogen

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Pembekuan darah merupakan fenomena plasma,dimana partikel-partikel kecil darah ditangkap olehjaringan fibrin yang tampak seperti selai.

plasma

Subtansi komplek dalam darah yang mengandungfibrinogen yang akan diubah menjadi fibrin dalamproses koagulasi

Serum

Cairan berwarna kuning pada darah yang sudahtidak mengandung fibrinogen karena telah diubahmenjadi fibrin dalam proses koagulasi

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Gambar Serum dan Plasma

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Plasma diperoleh dengan menambahkan antikoagulan pada darah segar, sehingga plasma darah masih mengandung fibrinogen kemudian

fraksi plasma dipisahkan dengan fraksi sel melalui sentrifugasi.

Serum diperoleh dengan tanpa menambahkan antikoagulan pada darah segar sehingga fibrinogen akan menggumpal, kemudian dilakukan

pemisahan sehingga diperoleh serum (bag. atas) dan bag. bawah (fraksi

sel dan fibrin).

Mekanisme Pembekuan Darah

1. Jaringan yang mengalami cedera dan trombosityang mengalami aglitunasi (lisis)

pelepasan prekursor tromboplastin yangakan bereaksi dengan faktor antihemofilik(plasma) + komponen tromboplastin

tromboplastin

2. Prokonvertin ion Ca konvertin

3.Protrombin Ca+konvertin+tromboplastin trombin

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

4. Accelarator globulin plasma inaktiftrombin

Accelarator globulin serum aktif

5. Protrombin trombin

6. Fibrinogen trombin fibrin

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Defibrinasi metode yang digunakanuntuk mencegah pembekuan darah

Menghilangkan fibrin

Penambahan antikoagulan ataumenurunkan kadar ion Ca yang adadalam larutan darah

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Uji yang Dilakukan Saat Praktikum

Pengaruh ion CaPenggumpalan Darah

Pengendapan Globulin

Pengendapan AlbuminSerum Darah

deproteinasi serum darah

Uji Khlorida

Uji Fosfat

Uji Kalsium

Uji Glukosa

Zat-zat bukan protein dalam serum darah

Uji Benzidin

Uji Hematin

Pigmen Darah

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

PENGGUMPALAN DARAHUntuk mengetahui fungsi ion Ca dalam pembekuan darah

Ke dalam 2 tabung reaksi+ masing-masing 2 ml darah oksalat (atau darahsitrat) dan darah non-fibrin

Tiap tabung + 5 tetes CaCl2 5 % .

Gojoklah, amati terjadinya pembekuan dan catat waktu pembekuan

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Darah oksalat : darah yang diberi antikoagulan AMMONIUM OKSALAT & POTASSIUM OKSALAT sehingga masih punya fibrinogen (masih bisa mengalami pembekuan)Darah non-fibrin : darah yang sudah tidak mengandung fibrin (sudah tidak bisa mengalami pembekuan)CaCl2 + darah oksalat Ca-oksalat + KCl + NH4ClReaksi tersebut terjadi karena ion Ca mempunyai muatan positif (+2) lbh tinggi daripada ion K dan NH4 (+1)

Pengendapan GlobulinUntuk Mengetahui Adanya Globulin dalam Serum Darah dan

Karakteristiknya

3 ml serum + 3 ml larutan (NH4)2SO4 jenuh

Gojoklah. Endapan yang terjadi dipisahkan dengan cara menyaringlarutan

Endapan di atas dipindahkan ke dalam tabung lain, sedangkan filtrat(F1) digunakan untuk uji albumin

endapan + air. Amati dan catat apa yang terjadi

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Bila endapan larut dalam air maka dapat disimpulkan di dalam serum darah terdapat protein globulinSifat globulin :larut dalam airlarut dlm lar. garam encer (2-10 g/100 ml ~ 0,6m) mengendap dgn ammonium sulfat jenuh

Pengendapan AlbuminUntuk Mengetahui Adanya Albumin dalam Serum darah dan

Karakteristiknya

filtrat (F1) + (NH4)2SO4 padat berlebihan.

Gojoklah hingga terbentuk endapan

Saring, endapannya dipindahkan ke dalam tabung, tambahkanair dan digojok

Amati dan catat perubahan yang terjadi

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Bila endapan larut dalam air maka dapat disimpulkan di dalam serum darah terdapat protein albuminalbumin:

- larut dalam air , larutan garam encer dan setengah jenuh

- tidak larut (mengendap) dalam ammonium sulfat (garam) jenuh atau

larutan garam yg sangat pekat yang lain

Zat-zat bukan protein dalam serum darahDeproteinasi serum darah

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

5 ml darah + 10 ml air , lalu didihkan

Teteskan indikator khlorofenol merah pada filtrat. Kemudian asamkanhingga pH menunjukkan 5,4 (warna indikator tepat berubah dari warna

merah menjadi kuning)

Didihkan dan bilamana perlu saringlah, Filtrat (P) yang dihasilkan digunakanuntuk percobaan selanjutnya

+ setetes demi setetes 2 % larutan asam asetat hingga terjadi endapan, laluSaring endapan yang terbentuk

Uji Khloridauntuk mengetahui adanya senyawa khlorida dalam darah

filtrat (P) + 1 tetes HNO3 pekat + beberapa tetes larutan AgNO3

terbentuk endapan putih (AgCl)

+ NH4OH (Endapan akan larut lagi)

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

filtrat + HNO3 dan AgNO3 endapan AgCl (warna putih)

AgCl adalah hasil reaksi antara Cl dalam darah dengan AgNO3Penambahan NH4OH, maka endapan AgCl akan larut

NH4OH + AgCl NH4Cl + AgOH

HNO3 pekat berfungsi untuk mencegah terjadinya endapan perak

fosfat (Ag2PO4)

Uji Fosfatuntuk mengetahui adanya senyawa fosfat dalam darah

filtrat (P) + beberapa tetes ammonium molibdat + 1 tetes HNO3pekat

Panaskan, akan terjadi endapan kuning

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

filtrat + HNO3 dan ammonium molibdat endapan

Ammonium fosfomolibdat (warna kuning)

Uji Kalsiumuntuk mengetahui adanya kalsium dalam darah

filtrat (P) + beberapa tetes larutan kalium oksalat

Terjadi endapan putih (kalsium oksalat)

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

filtrat + kalium oksalat Ca-oksalat + KCl Reaksi tersebut terjadi karena ion Ca mempunyai muatan positif (+2) lbh tinggi daripada ion K (+1)

Uji Glukosauntuk mengetahui adanya glukosa dalam darah

filtrat (P) + 2 tetes gliserol + sedikit bubuk Na2CO3 bebas air + 2 tetes 2,5 % larutan CuSO4

Didihkan selama beberapa menit

Bila terjadi warna kuning keruh/merah bata maka hal itumenunjukkan adanya glukosa (gula reduksi)

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

Endapan merah bata terbentuk karena glukosa darah mereduksi larutan benedict (CuSO4) membentuk Cu2O yang berwarna merah bata.

Uji BenzidinUntuk mengetahui adanya pigmen darah (Hb)

Encerkan 1 tetes darah dengan 10 ml air

Ambil 1 ml larutan + 1, 5 ml larutan Benzidin + 0,5 ml larutanH2O2 3 %

Amati warna biru yang terjadi

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM

H2O2 akan mengalami dekomposisi menjadi 2H2O dan O2 karena

adanya Hb dalam darah. Lalu O2 yang bebas akan mengoksidasi

benzidin menjadi derivatnya yang berwarna hijau/ biru (benzidin

blue).

2/27/2013LAB. BIOKIMIA NUTRISI FAKULTAS

PETERNAKAN UGM