Seguridad de productos biológicos y biotecnológicos
VII Encuentro Internacional de FarmacovigilanciaVII Encuentro Internacional de Farmacovigilancia
Gabriela Delgado M.Departamento de Farmacia
Grupo de Investigación en Inmunotoxicología
BIOLOGICOS:BIOLOGICOS: DERIVADOS-RELACIONADOS
HUMANOS
CO
MP
LICA
CIO
NE
S: A
GU
DA
S/C
RO
NIC
AS
: INM
UN
OLO
GIC
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Y N
O
INM
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AS
1. HEMATIES
2. PLAQUETAS
3. PLASMA Y DERIVADOS
1.Plasma fresco congelado2. Crioprecipitado3. Albúmina humana4. Inmunoglobulinas5. Factores de coagulación
ANIMALES
MICROORGANISMOS
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AS1. Antitoxina
2. Gamaglobulina3. Suero hiperinmune4. Alergenos
4. SISTEMAS CELULARES1. Células madre2. Células dendríticas
PLANTAS
1. Alergenos
2. Vacunas
Alergenos
1. Toxoides2. Vivas atenuadas3. Inactivas4. Sintéticas
BIOTECNOLÓGICOSBIOTECNOLÓGICOS
ADN RECOMBINANTE
1. CITOQUINAS
2. ENZIMAS
1. Interferones2. Interleuquinas
1. Altaplase2. Dornasa alfa3. Imiglucerasa
ADN RECOMBINANTE
HIBRIDOMAS
TERAPIA GENICA
3. HORMONAS1. Insulina2. Eritropoyetina alfa3. Hormona de crecimiento
4. FACTORES DE COAGULACIÓN
Anticuerpos monoclonales
No Inmunogenicidad
Inmunogenicidad irrelevante
Efectos sobre la dupla Eficacia/Seguridad
Reducción de la eficacia terapéutica
Reacciones adversas leves a moderadas
Reacciones adversas graves-letales
“FARMACOLOGIA” DE LAS PROTEINASTERAPEUTICAS
Eficacia/Seguridad
Macromoléculas: ADME
Degradación: Proteasas
Inestabilidad: Cambios estructuralesEficacia/Seguridad Inestabilidad: Cambios estructurales
Similitud proteínas endógenas
Complejidad tridimensional
INMUNOGENICIDAD
Proteínas cumplen con las condiciones para ser un b uen antígeno
Más masa: Mayor probabilidad de epítopes
Cambios post traduccionales: Glicosilación/Pegilación
Excipientes-Estabilidad
Agregados. Cambios enzimáticos
Contaminantes
Producción controlada: Indetectables modificaciones a este nivel, son relevantes en la inmunogenicidad del producto
Reconocimiento del complejo péptido-HLA por el TCR de los Linfocitos T
Receptor TCR
Residuo del péptido en contacto con el TCR
Residuo polimórfico
CMH
PéptidoResiduo polimórficodel TCR
Residuo de anclaje delpéptido
Bolsillo del CMH
Parám
etros críticos para la evaluación de un
Biosim
ilarANALISIS BASICO
1. Verificación del contenido y proceso de manufact ura2. Estudio de la actividad biológica3. Integridad fisico-química4. Estudios de estabilidad5. Análisis de integridad
BIOEQUIVALENCIA
EFICACIA Y SEGURIDAD1. Pureza
Parám
etros críticos para la evaluación de un
Biosim
ilar
EFICACIA Y SEGURIDAD
INMUNOGENICIDADPROCESO DE PRODUCCION
FARMACOVIGILANCIA
2. Estructura molecular3. Condiciones de almacenamiento4. Formulación5. Excipientes6. Productos diméricos y de oxidación1. Edad2. Haplotipo HLA3. Cantidad y calidad de proteína endógena4. Vía de administración
FACTORESEnfermedad de baseBackground genéticoStatus inmunológicoTerapia inmunomoduladoraEsquema de dosificación
Proceso de manufacturaFormulaciónFormulaciónCaracterísticas de estabilidad.
** Resumen de la inmunogenicidad en ensayos clínicos
Dependiendo del potencial inmunogénico conocido y de la complejidad de la enfermedad, datos relacionados con el grado de inmunogenicidad deberán ser proporcionados antes de la aprobación. Análisis de inmunogenicidad sistémica, pueden ser incluidos en el plan de manejo de riesgo
Factor paciente-enfermedad:
-Factores genéticos que modulan la RI: Polimorfismo alélico MHC,afinidad estabilidad MHC-proteína, genes que codifican para la respuestaT helper. Puede presentarse aún si la secuencia es humana.-Factores relacionados con un defecto en los genes: Si la terapia se usapara sustituir una proteína, se puede presentar tolerancia inmunológica.-Edad: Si el uso de la proteína es indicado en niños, los ensayos deimunogenicidad deben realizarse en este grupo de edad-Relacionados con la enfermedad: La inmunogenicidad debe ser-Relacionados con la enfermedad: La inmunogenicidad debe serestudiada de forma separada y particular para cada enfermedad, comoparte de los estudios clínicos.-Tratamientos concomitantes: La RI se ve reducida cuando se administraninmunosupresores concomitantemente, por ende se debe evaluar enausencia de la otra terapia.-Duración, vía de administración, modalidad terapéutica. Endovenososmenos inmunogénicos que los subcutáneos o intramusculares. Los tto acorto plazo y administrados continuamente son menos inmunogénicosque los de larga duración ó los administrados de forma intermitente.Exposición a otros productos similares o relacionados. Genera Abs conreactividad cruzada ó memoria celular.
Factor paciente-enfermedad:
-Factores de riesgo de inmunogenicidad relacionados con elproducto. Origen y naturaleza del principio activo (Homologíaestructural, modificaciones post-translacionales), modificación dela proteína nativa (pegilación), impurezas y contaminantes yformulación.-Estructura proteica: La RI puede generarse por cambios en lasecuencia, estructura, degradación/modificación física, química,enzimática (deamidación, oxidación, sulfatación en el proceso deproducción o en el almacenamiento.-Formulación: Debe garantizar la conformación nativa de laproteína terapéutica.-Agregación y formación de aductos: Pueden dar lugar a nuevosepítopes.-Impurezas y contaminantes: Pueden actuar como adyuvantes
NECESIDAD DE UNA DENOMINACIONCOLOMCOLOMBIABIANANA UNIFICADA PARA ESTOSPRODUCTOS :
EMA: BIOSIMILARFDA: FOLLOW ONCANADA: ENTRADA SUBSECUENTEWHO: PRODUCTO BIOTERAPEUTICO SIMILAR
-DISTINTA DE LA DE LOS GENERICOS
-ESTUDIOS DE COMPARABILIDAD, CALIDAD,EFICACIA Y SEGURIDAD
-ESTUDIOS CLINICOS DE EQUIVALENCIA O NO-ESTUDIOS CLINICOS DE EQUIVALENCIA O NOINFERIORIDAD
-LA INMUNOGENICIDAD DEBE SERINVESTIGADA Y VALORADA
ESTOS PRODUCTOS NO SONGENÉRICOS, NO SE GARANTIZA CONSÓLO CARACTERIZACIÓN FÍSICOSÓLO CARACTERIZACIÓN FÍSICOQUÍMICA, QUE EL SIMILAR SEAINTERCAMBIABLE
LOS ESTUDIOS CLÍNICOS DE NOINFERIORIDAD SE BASAN ENMETODOLOGÍAS ESTADÍSTICAS QUEBUSCAN ESTABLECER LABUSCAN ESTABLECER LABIOSIMILARIDAD DEL EFECTO DELPRODUCTO.
A NIVEL DEL PRODUCTO, ESTE DEBE TENERUN REGISTRO, ADJUNTAR UN CERTIFICADODE BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA(PRÁCTICAS DE FABRICACIÓN Y CONTROLESASÍ SEAN DE LA CASA MATRIZ).DECLARACIÓN DE ORIGEN DEL PRODUCTODECLARACIÓN DE ORIGEN DEL PRODUCTOTERMINADO ASI COMO DEL INSUMOFARMACÉUTICO ACTIVO, EL PROTOCOLO DEANÁLISIS OFICIAL (PROVEEDOR TOMA UNAMUESTRA Y SE ANALZA CON LOS PATRONESFARMACOTÉCNICOS).
LAS PROPIEDADES FÍSICO QUÍMICASPUEDEN SER DETERMINADAS PORMEDIO DE LAS MEDICIONES DEL PESOMOLECULAR, DEL PATRÓN DEMOLECULAR, DEL PATRÓN DEISOFORMAS (GLICOFORMAS), DELCOEFICIENTE DE EXTINSIÓN (ESPECTROVISIBLE, UV), DEL PATRÓNELECTROFORÉTICO Y DE LAESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL.
1.HPLC: CON DERIVATIZACIÓN DEAMINOÁCIDOS CON AGENTESFLUORESCENTES.
2. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
3. ESPECTROMETRÍA DE MASAS
4. ANÁLISIS DE LA SECUENCIA FINAL[ALTERNATIVAS COMO LA SECUENCIASEÑAL, ANÁLISIS PÉPTIDO-PÉPTIDO,PUENTES DISULFURO, ESTRUCTURA DECARBOHIDRATOS (DERIVADA DELCARBOHIDRATOS (DERIVADA DELANALISIS DE MASAS)].
5. RESONANCIA MAGNÉTICA,ESTRUCTURA DE ALTO ORDEN(MACROESTRUCTURA PROTEICA).
A NIVEL DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA, SEDEBE ESTABLECER LA POTENCIA DELPRODUCTO, REPRESENTADA ENUNIDADES DE ACTIVIDAD (POR DOSISUNIDADES DE ACTIVIDAD (POR DOSISPOR MILIGRAMO DE PRODUCTO), SEDEBEN PLANEAR BIOENSAYOS PARAESTABLECER DOSIS.
SI NO HAY REGLAMENTACIÓN NO SEPUEDEN OTORGAR REGISTROS (SEDEBE SUSPENDER LA ENTREGA DEREGISTROS Y EVALUARSE LA SITUCIÓNREGISTROS Y EVALUARSE LA SITUCIÓNDE AQUELLOS QUE YA ESTÁNREGISTRADOS Y HAN SIDOINTRODUCIDOS EN EL MERCADO).
TODAS LAS SOLICITUDES DE REGISTRODEBEN ENTREGAR UN PLAN DE MANEJODE RIESGO EN UN PROGRAMA DEFARMACOVIGILANCIA ACTIVA.
INCLUIR INMUNOGENICIDAD, VALORANDOMAS ALLA DE LA PRODUCCIÓN DEANTICUERPOS
GRACIASGRACIAS
Universidad Nacional de ColombiaGrupo de Investigación en Inmunotoxicología (Código Colciencias COL0068495)
([email protected])Departamento de Farmacia
GRACIASGRACIAS
Reconocimiento del complejo péptido-HLA por el TCR de los Linfocitos T
Receptor TCR
Residuo del péptido en contacto con el TCR
Residuo polimórfico
CMH
PéptidoResiduo polimórficodel TCR
Residuo de anclaje delpéptido
Bolsillo del CMH
“FARMACOLOGIA” DE LAS PROTEINASTERAPEUTICAS
Eficacia/Seguridad
Macromoléculas: ADME
Degradación: Proteasas
Inestabilidad: Cambios estructuralesEficacia/Seguridad Inestabilidad: Cambios estructurales
Similitud proteínas endógenas
Complejidad tridimensional
INMUNOGENICIDAD
Proteínas cumplen con las condiciones para ser un b uen antígeno
Más masa: Mayor probabilidad de epítopes
Cambios post traduccionales: Glicosilación/Pegilación
Excipientes-Estabilidad
Agregados. Cambios enzimáticos
Contaminantes
Producción controlada: Indetectables modificaciones a este nivel, son relevantes en la inmunogenicidad del producto
Factores adicionales
ENFERMEDAD
PACIENTES
PROTOCOLO
Efectos sobre Eficacia
Farmacodinámica: Ab se unen a la zona activa del producto. NEUTRALIZANTES
Farmacocinética: Ab NO se unen a la zona activa del producto. AFECTA SU CINETICA
Efectos sobre Seguridad
INSULINA
Preparaciones derivadas de insulina animal
Insulina humana recombinante
Análogos de la insulina
Preparaciones
Insulina inhalada
Mecanismos inmunológicos
Diferencias en la secuencia e impurezas
Formulación y agregados
Vía de administraciónVía de administración
Efecto dosis-respuesta
Factores relacionados con el paciente
Caracterización de los anticuerpos anti insulina
Cuantificación por ELISA
Subclases de inmunoglobulinas
Afinidad de anticuerpos: Radioligand binding
Es la parte de la
toxicología que estudia el efecto de los
xenobióticos sobre el sistema inmune
Es la parte de la
toxicología que estudia el efecto de los
xenobióticos sobre el sistema inmunexenobióticos sobre el sistema inmunexenobióticos sobre el sistema inmune
Dean, 1970
1977. Jeff Vos. El primero en reportar una lista dexenobióticos con capacidad de alterar la reactividadinmune en animales de laboratorio.
1987. Mike Luster y Jack Dean. Establecen laimportancia de la IMT como una sub-disciplina de laimportancia de la IMT como una sub-disciplina de latoxicología.
1995. Se incorpora de forma mandatoria el estudiode la IMT para el diseño, desarrollo y producción dexenobióticos.
De Jong, 2007
Dosis
NOAEL: “No observed adverse effect level”
LOAEL: “Lowest observed adverse effect level”
De Jong, 2007ADVERSO
Evolution of Immunotoxicology. (A) An excerpt from a report published bythe Environmental Defense Fund in 1997 entitled, ''Toxic Ignorance'' [1], whichdepicted the level of ''basic'' health testing of chemicals in the United States. (B) Asummary of the types of immunotoxicological tests conducted by thepharmaceutical industry in 1998 [3].
Holsapple, 2007
Descripción de fenómenos asociados con Descripción de fenómenos asociados con InmunotoxicidadInmunotoxicidad
Inmunosupresión: Una reducción en la función del sistema inmune,expresada por ejemplo en una susceptibilidad a agentes infe cciosos o a laaparición de neoplasias.
Inmunoestimulación : Un incremento en la actividad del sistema inmune que
De Jong, 2007
Inmunoestimulación : Un incremento en la actividad del sistema inmune quepuede resultar en un incremento en la respuesta
Hipersensibilidad: Un incremento en la respuesta inmune específica a unxenobiótico que generalmente involucra un daño a los tejido s
Autoinmunidad: Respuesta a auto-antígenos por una reactividadincrementada, por inmunoestimulación o por reacción frent e a antígenospropios alterados luego de la interacción de xenobióticos c on componentestisulares
RIESGO DE INDUCIR INMUNOTOXICIDAD
Exposición: Cantidad de sustancia química y tiempode interacción con el individuo y/o con el ambiente.
Primero , el efecto tóxico puede ser reversible y, en algunos casos no consideradobiológicamente adverso.biológicamente adverso.Segundo , con apropiada protección, todos las sustancias químicas pueden sermanejadas de forma segura.Tercero , la caracterización del riesgo incluye la identificación del impacto final enun marco incierto.Cuarto , el riesgo aceptable es la probabilidad de la generación de enfermedadque sería tolerada por un individuo ó un grupo de personas.
Holsapple, 2007
Holsapple, 2007
Principios de la evaluación del riesgo en Inmunotox icología:1. Como interpretar la importancia de menor o moderar efectos inmunotóxicos en modelos animales en relación con evaluación del riesgo en humanos?2. Como integrar mejor la consideración de exposición con evaluación del riesgo en inmunotoxicología?3. Como diseñar estudios en humanos para evaluar el impacto sobre el sistema inmunológico dado que es la especie del mayor interés al contexto de evaluación de riesgo?
Perspectivas y limitaciones de la inmunotoxicología in vitro
Corsini, 2005
Métodos in vitro que también se emplean eninmunotoxicología in vitro:
1. Los materiales que necesitan biotransformación requeriríansistemas de cultivo especiales con características fisicoquímias(p. ej. la solubilidad) particulares considerando interferencias delmaterial con el sistema in vitro. Ej: suero, los efectos de vehículousado en la solubilización del compuesto sobre células, y lasustancia química que actúa sobre las células.2. Sistemas in vitro no consideran las interacciones decomponentes diferentes celulares, siendo difícil de reproducir laintegridad del sistema inmunológico in vitro.3. Sistemas in vitro no pueden representar interacciones neuro-de-la-endocrina con el sistema inmunológico.
Corsini, 2005
Muchos avances tienen que ser alcanzados antes de quepruebas in vitro puedan sustituir el uso de animales eninmunotoxicología.
Se espera que los esfuerzos y recursos dedicados el desarrollode alternativas in vitro en inmunotoxicología permitan reducir eluso de modelos animales.
Corsini, 2005
AUTOINMUNIDAD
Dos tipos diferentes de reacciones autoinmunes han sidodescritas: Las “inducidas " o las “de novo " luego de laexposición a medicamentos.
Reacciones autoinmunes pueden ser reveladas o aceleradas porel tratamiento farmacológico produciendo inmunoestimulación oinmunosupresión selectiva en pacientes con unaPREDISPOSICIÓN GENÉTICA ó con una ENFERMEDADAUTOINMUNE INACTIVA.
Ravel, 2005
1. Interrupción de tolerancia central: Causa la liberación de numerososlinfocitos autoreactivos a periferia. La inhibición de cél ulas T anergia víala interrupción de tolerancia central parece ser la respons able.
2. Interrupción de tolerancia periférica:
2.1. Cambios de estructura de la cromatina : La expresión antigénica de2.1. Cambios de estructura de la cromatina : La expresión antigénica demembrana y receptores citoquinas sobre células inmunes pue de serafectada por productos farmacéuticos. Esto puede causar ca mbios de lainducción de anergia y la salida de células autoreactivas qu e conducen arespuestas inmunes hacia antígenos no inmunogénicos. La me tilación deADN, acetilación de histonas y la estructura de cromatina en tre otros,puede ser alterada por productos farmacéuticos humanos.
Ravel, 2005
SI: Mercado
LUPUS Post-tratamiento Reversión demanifestaciones
SI: Mercado
NO: Sale del Mercado
Antígenos Alterados por Fármacos (AAF)
AUTO-ANTICUERPOS-LUPUS
Antígenos Alterados por Fármacos (AAF)
Interacción -Independiente de la estructura-Similares efectos adversos in vivo(propiedades reactivas)
Procainamida
Hepatocito(MMH)
Procainamida-Hidroxilamina In vitro
ProcainamidaHidralazinaIsoniazida Hepatocito
In vivo
Hepatocito
Metabolismo oxidativo
Neutrófilo
Mieloperoxidasa
Procainamida-Hidroxilamina
-Citotóxico (µM)-Interferencia en el ciclo REDOX:Muerte celular-Disminución de E-Ruptura de DNA.-Muerte prematura___catabolismo decromatina en la apoptosis__Formasanormales de cromatina(INMUNOGENICAS: PERDIDA DETOLERANCIA )
2.2 Cambios en la estructura del antígeno ó la hipótesis delhapteno: Como el sistema inmunológico normalmente reconocemoléculas más grandes a 1 kDa, la mayor parte de xenobióticosno son espontáneamente inmunogénicos. Al combinarse conmacromoléculas endógenas, como proteínas, ellos puedengenerar haptenos. El complejo de hapteno-macromolécula espresentado en el contexto de moléculas del complejo mayor de
Ravel, 2005
presentado en el contexto de moléculas del complejo mayor dehistocompatibilidad (MHC) como un antígeno no propio, que esentonces reconocido por células de T con la subsecuenteinducción de una respuesta inmune y el potencial de causar undaño autoinmune o reacciones de hipersensibilidad.
2.3 Cambios en la regulación de la respuesta inmune: Célulasde T CD4+CD25 + juegan un papel regulador de respuestasinmunes, incluyendo respuestas autoinmunes. Su papel enenfermedades autoinmunes inducidas por xenobióticos ha sidodemostrada en varios modelos animales. Mientras queprocainamida y el cloruro mercúrico (HgCl2) inducen la
Ravel, 2005
procainamida y el cloruro mercúrico (HgCl2) inducen laproducción de autoanticuerpos antinucleares (ANA) en ratones, latransferencia de T CD4+CD25 + las células de ratones noexpuestos inhiben la reacción.
2.4 Papel del sistema neuroendocrino: Enfermedadesautoinmunes son más frecuentes en mujeres que hombres.Hormonas sexuales están implicadas en la inducción deautoinmunidad vía mecanismos como la interacción con proto-oncogenes, liberación de citoquinas, apoptosis, y moléculas deadherencia, que sugieren que xenobióticos afectan el equilibrio
Ravel, 2005
del sistema endocrino que contribuye con la generación deenfermedades autoinmunes. Se ha demostrado que losestrógenos favorecen la sensibilidad de ratones a miasteniagravis inducida experimentalmente.
2.5 Imitación molecular: Debido a semejanzas en la secuenciade microorganismos y antígenos humanos, se supone queepitopes microbianos podrían activar células de T autoreactivasespecíficas de antígenos aún con baja afinidad. Han propuestoeste mecanismo para explicar la correlación entre agentes
Ravel, 2005
este mecanismo para explicar la correlación entre agentesinfecciosos y autoinmunidad, en el marco del riesgo teórico paraenfermedades autoinmunes asociadas con procesos devacunación.
2.6 Respuesta inmune no específica : Este mecanismo tambiénllamado efecto “Bystander" tiene relación con la inmunogenicidadde los adyuvantes induciendo lesiones de tejido, estimulación dela producción local de citoquinas proinflamatorias y factores conuna actividad inmunomoduladora. La liberación de TNF-a, IL-1b yIL-6 como resultado del stress oxidativo y la producción de óxido
Ravel, 2005
IL-6 como resultado del stress oxidativo y la producción de óxidonítrico puede estimular la respuesta inmune específica contraautoantígenos vía moléculas y señales de co-estimulación comoCD40L sobre membranas de células T y CD40 sobre célulaspresentadoras de antígenos.
2.7 Liberación de antígenos encriptados: El oro (Au3 +) y lassales usadas como agentes antireumáticos pueden unirsecovalentemente con proteínas endógenas. Antígenossecuestrados o secretos que no han inducido tolerancia pueden
Ravel, 2005
secuestrados o secretos que no han inducido tolerancia puedenser liberados y presentados a células de T autoreactivas.
2.8 Respuesta inmune dirigida contra el fármaco: En estecaso, la respuesta inmune no es dirigida contra autoantígenos; esgenerada contra el medicamento mismo, o sus metabolitoscuando se unen a antígenos propios. La D-penicilamina se unecovalentemente a glóbulos rojos y la respuesta de anticuerpodirigida contra el metabolito induce la lisis del glóbulo rojo y laposterior anemia hemolítica autoinmune. Este mismo mecanismo
Ravel, 2005
posterior anemia hemolítica autoinmune. Este mismo mecanismopuede estar implicado en las trombocitopenias autoinmunes poradministración de quininas o sulfonamidas.
Enfermedades autoinmunes y farmacéuticos humanos
1. Productos farmacéuticos convencionales humanos: Sólopocos productos farmacéuticos convencionales han sidoasociados con reacciones autoinmunes en humanos. Hasta elmomento, pocas reacciones autoinmunes inducidas pormomento, pocas reacciones autoinmunes inducidas pormedicamentos han sido reproducidas en animales cuyo modeloclínico y biológico es generalmente bastante diferente delhumano.
Ravel, 2005
Descotes, 2003
Descotes, 2003
Ensayos de inmunotoxicidad sugeridos de acuerdo al tipo de compuesto con potencial farmacológico
Vía de administración/reportes de la molécula
Pruebas para la evaluación de inmunotoxicidad
Tópica Potencial de sensibilización dérmica: Test de maximización en cobayos (GPMT) ó Ensayo de linfo-nódulos locales (LLNA)
Por inhalación Potencial de sensibilización respiratoria
Evidencia de inmuno-supresión (en ensayos clínicos ó no clínicos) Estudios celulares funcionales
Fármaco con actividad anti-HIV Estudios celulares funcionales
Fármaco a ser empleado en mujeres embarazadas (asociación con inmuno-supresión)
Estudios celulares funcionales y estudios a nivel de toxicología reproductiva
Si el fármaco ó sus metabolitos son acumulados en órganos ó tejidos
inmunesEstudios celulares funcionales
Dean, 2004
Medula Ósea Análisis de los diversos tipos celulares en medul a ósea y distribución celular (solamente cuando se indican cambios en la celularidad)
Timo Celularidad de corteza y medula. Proporción relati va de corteza y medula (medición morfométrica).
Bazo Proporción relativa de eritrocitos y leucocitos en la pulpa. Presencia de folículos secundarios activados. Zonas marginales
De Jong, 2007
Presencia de folículos secundarios activados. Zonas marginales alrededor de los folículos. Celularidad.
Nódulos linfoides Presencia de folículos primarios y secundarios acti vados. Tamaño de la paracorteza (Area de células T). Venul as endoteliales. Presencia de las células plasmáticas.
Sangre Recuento y diferenciación de leucocitos periféricos .
Órganos linfoides (Presencia de procesos) Inflamación (PMN), Necrosis/apoptosis, Fibrosis, He morragias,
Lipidosis, Granuloma.
Ensayos no funcionales: Peso de órganos, histopatología, niveles séricos deinmunoglobulinas (IgM, IgG, IgE, IgA), Análisis de leucoci tos (Recuento total ydiferenciación), evaluación de médula ósea (celularidad y diferenciación), Célulasesplénicas (Número total y análisis por citometría de flujo ), lavado broncoalveolar(diferenciación celular), células de la cavidad peritonea l (diferenciación celular).
De Jong, 2007
Ensayos funcionales: Actividad de macrófagos, actividad celular de células NK en bazo óperitoneo, respuesta humoral (Acs) antígeno-específica ( Ags dependientes de respuestacelular T como TT y Ovalbúmina, Respuesta a mitógenos de espl enocitos (Células T:ConA, PHA; Células B: LPS), cultivo mixto de linfocitos para actividad citotóxica, análisisde la respuesta de hipersensibilidad retardada frente a ant ígenos intracelulares comoListeria monocytogenes ó BCG, modelos de resistencia del hospedero (Bacteriano:Listeria monocytogenes , Streptococcus pneumoniae , Viral: Citomegalovirus de rata, virusde Influenza, Parasitaro : Trichinella spiralis , Plasmodium , Tumoral : Melanoma B16,
De Jong, 2007
de Influenza, Parasitaro : Trichinella spiralis , Plasmodium , Tumoral : Melanoma B16,Carcinoma PYB6.
GRACIASGRACIAS
Universidad Nacional de ColombiaGrupo de Investigación en Inmunotoxicología (Código Colciencias COL0068495)
([email protected])Departamento de Farmacia
GRACIASGRACIAS