Date post: | 07-Jul-2018 |
Category: |
Documents |
Upload: | marcelo-mendez |
View: | 224 times |
Download: | 0 times |
of 36
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
1/36
03/04/16 1T. Haydée Zúñiga Cáceres
ESPROTEINIZA OS
Principios. PrincipalesAplicaciones
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
2/36
03/04/16 2T. Haydée Zúñiga Cáceres
Desproteinización
• Es la remoción o eliminación de proteínasdel plasma, suero ó sangre con el fn deobtener un fltrado o sobrenadante libre de
proteínas y poder cuantifcar la sustanciamateria de análisis sin intererencias.• Evita: la ormación de espuma, turbidez,
precipita-dos y que las proteínasinterferan reaccionando con los reactios.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
3/36
03/04/16 3T. Haydée Zúñiga Cáceres
Condiciones de un buen
desproteinizante:
!. "o agregar ninguna sust. que pueda intererircon las determs. posteriores.
#. "o pptar ni retener por adsorción lasustancia a determinar, lo que se erifca pormétodos de recuperación $agregar al líq. adesprot. una cant. conocida de la sust. aalorar, la que debe recuperarse en cantidadapro%imadamente igual a la teórica desp. de
desprot.&'. Eliminar otras susts que puedan estar ptes. enel (uido a desproteinizar y que interferan conlas t)cnicas que se aplicarán posteriormente.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
4/36
03/04/16 4T. Haydée Zúñiga Cáceres
Métodos de desproteinización:
A) M. Físicos: "o alteran las proteínas q separan
!. *iálisis#. +ltracentriugación'. +ltrafltración. dsorción por susts particuladas.
B) M. Físico Químicos: roteínas se separan %pptación, q generalm. altera su estado ísicoinicial, y no puede ser retomado:
!. *esnaturalización % el calor#. *es/idratacióna& *es/id. con solentes miscibles con el
aguab& *es/id. con soluciones salinas
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
5/36
03/04/16 5T. Haydée Zúñiga Cáceres
C) M. Químicos: 0ormación de salesinsolubles:
1. Con ácidos: 12, t3ngstico,perclórico, metaosórico, molíbdico,osot3ngstico. 4e ormansales proteicas insol. con las ormascatiónicas de las mol)culas proteicas.
2. Con metaes pesados: 5n, 6g, 2d,0e, b. 4e orman proteinatos insols.con las ormas aniónicas de las mol)culasproteicas.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
6/36
T. Haydée Zúñiga Cáceres
!esproteini"ación es necesaria p. ladeterm. de diersos metabolitos yconiene realizarla rápidam. despu)s de la
recolección de las muestras.uede realizarse utilizando dierentesagentes que proocan la pptación de lasproteínas, que se separan por
centriugación ó fltración, recogi)n-doseun so#renadante i#re de proteínas.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
7/36
03/04/16 7T. Haydée Zúñiga Cáceres
Desprot. ácidos más utiizados!
". #CI O T$N%STICO $Foin %u)Na2WO4 + H2SO4 H2WO4 + Na2SO4
1 vol. Sanre + ! vol. de H2O + 1 vol Na2WO4 1" # + 1 $ol. H2SO4 "%&& N.
&. #CI O TRIC'OROAC(TICO
1 vol sanre + ' vol. (c. )*A 1" #
). #CI O PERC'*RICO
1 vol sanre + 1 vol H2O + 2 vol H*O4 & N
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
8/36
03/04/16 8T. Haydée Zúñiga Cáceres
Desprot. acaino más utiizados!
1. SO+O%,,: S-lato de /inc en 0edio alcalino SO4/n + 2 NaOH SO4Na2 + /nOH2SO4/n + 3aOH2 SO43a + /nOH2
TIT-'AR
:SO4/n # 5e6en corresponderse
3aOH2 "%7 N vol a vol en pcia de
ó NaOH enoltale8na 1# en etanolos desprots se p-eden -ardar en coneladores de92" ó 9" ;*% dependiendo de las s-sts
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
9/36
03/04/16 9T. Haydée Zúñiga Cáceres
Desproteinizante de oin /u ó #cido T0n1stico
A&ua '(m*
+( m* ,(- m* 1 m*
Muestra 1(m*
san&re
1( m*pasma o
suero
1( m*
*.C..
1( m*de
/rina
0& a 1
1(m*
(- m* (2- m*
324/5 (66
1(m*
(- m* (2- m*
!7*8C79: 1:1 1:1 1:- 1:1
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
10/36
03/04/16 10
! # '
gua destilada '.7 m8 '.7 m8 '.7 m8
4uero 9.7 m8
4angre 9.7 m8 9.7 m8
rina '.7 m8
12 7 ; ! m8
1ungstato "a !9; 9.7 m8
6#4 #
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
11/36
03/04/16 11T. Haydée Zúñiga Cáceres
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
12/36
03/04/16 12T. Haydée Zúñiga Cáceres
+2todos de cuanti3icación
a4 +2todo 5u6mico 7+. de Cara8a94
>c. @rico A 6'B!#,9 Aantoína
C/2 A"u de0un&steno
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
13/36
03/04/16 13T. Haydée Zúñiga Cáceres
#CIDO $RICO+2todo de Cara8a9
• Fundamento:El ác. 3rico es o%idado a alantoína y 2# porel ácido osot3ngstico en solución alcalina.
El ác. osot3ngstico es reducido a azul detungsteno que se mide a ?!9 ;m
< >c. @rico A 6'B!#9 Aantoína C/2 A"u de 0un&steno
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
14/36
03/04/16 14T. Haydée Zúñiga Cáceres
#CIDO $RICOMétodo de *ara=a>
REACTI:OS!
;
Tun1stato Na "< =
; #c. Su30rico &>) N
;
Carbonato de Na "? =
;
R. #cido 3os3ot0n1stico
; Stoc@ #c. $rico "d'
Sos Sts de B "< 9 " m1>d'
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
15/36
03/04/16 15T. Haydée Zúñiga Cáceres
Desproteinizado!
trado? ó @.. = 1.- m*? .'- .1- @..
-
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
16/36
03/04/16 16T. Haydée Zúñiga Cáceres
Procedimiento!
F +.P. St.
A1ua
"B G G
Suero desprot. 7"!"
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
17/36
03/04/16 17
4toc cido Drico 1 m&d*
de a&ua
4os 4ts de: .- 1.1.- m&d* de a&ua
En 1.- m* dec4t. aG: .'- .1-
.22- m& c. Drico
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
18/36
03/04/16 18
(cido ?rico0@d+ B**S)S)C DD 1""1"" DD AAMPMP $E AAS)S)
1 - 10 0.0075 - 0.15 mL suero
0.15 - 1.5 x - 100 mL suero
= 0.0075 x 100 = 5 mg/dL suero 0.15
= 0.015 x 100 = 10 mg/dL suero
0.15
= 0.0225 x 100 = 15 mg/dL suero
0.15
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
19/36
03/04/16 19
*S) F AS) G AMP
(cido ?rico0@d+ **S)S) D A D AMPMP AS)
actor 1 III. +actor 2 III
actor 7 III.III.
IIIIII @ 7 p # III @ 7 p # III
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
20/36
03/04/16 20
(cido ?rico0@d+ B**S)S)C DD 1""1"" DD AAMPMP $E AAS)S)
1 - 100 0.0075 - 0.015
0.015 - 1.5 x - 100 mL orina
= 0.0075 x 100 = 50 mg/dL orina 0.015
= 0.015 x 100 = 100 mg/dL orina
0.015
= 0.0225 x 100 = 150 mg/dL orina
0.015
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
21/36
03/04/16 21
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
22/36
03/04/16 22
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
23/36
03/04/16 23
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
24/36
03/04/16 24
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
25/36
03/04/16 25T. Haydée Zúñiga Cáceres
#CIDO $RICO +2todo enzimático
; undamento!
#c. $rico K &
O K O
-ricasa
Aanto6na K
O
K
CO
O
K ? A K Coro3eno
O
Luinona
cooreada K
O
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
26/36
03/04/16 26T. Haydée Zúñiga Cáceres
b4 +2todos enzimáticos
#c. $rico K &&O K O& -ricasa Aanto6na K
&
O
&
K CO
&
1. Hor espectroIotometría diIerencia:c. Drico a#s a 2+, ;m a p3J' G de 2K a 2K, ;m a p3L'
4e mide A#s a as on&s de onda
mencionadas antes G después de aincu#ación de ác. Drico con a Uricasa pte. en suero( pasma u orina.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
27/36
03/04/16 27T. Haydée Zúñiga Cáceres
Procedimiento!
B M.H. 4t.Estándar = = 2 N*4uero = 2 u* =
u /rina $1:1). 1 + + + N*
Me"c suav. e incu#. - min a ,' OC
ó 2 min a temp. am#.EnIriar G eer a -- ;m
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
28/36
03/04/16 28T. Haydée Zúñiga Cáceres
2. E 32/2 producido en a reacción con auricasa se puede cuanti>car así:
32/2 Etano Catalasa Acetadeído 32/
Acetadeído A! Acetadeido !3 Acetato A!3 32/ 4e mide a aparición de A!3 a,5 ;m
32/2 se det. midiendo e cromó&enoIormado P su acción oPidante so#re ao=dianisidina a -, ;m .
32/2 se oPida a ,=meti=2=#en"otia"oinonaG (=dimetianiina en pcia deperoPidasa dando un co. a"u deindamina( ue a#s a 6 ; m
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
29/36
03/04/16 29T. Haydée Zúñiga Cáceres
32/2 reacciona con ,(- dicoro=2=idroPi#enceno=suIónico G 5aminoIena"ona p Iormar un co.roRo de uinonimina( ue a#s a-2 nm G es proporciona a acantidad de 32/2 G por ende de
ác. Srico pte en a muestra.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
30/36
03/04/16 30T. Haydée Zúñiga Cáceres
!" ác. úric# a$%. e& '"as%a se as#cia
e'ide%i#"(gica%e&)e a e&*s. cardi#+asc$,
"ares c#%# e" i&*ar)# de %i#cardi#-
accide&)e cerer#+asc$"ar- i'er)e&si(& ei&s$*ic. cardiaca.
e a 'r#'$es)# )#%ar "a c#&c. e& '"as%a
de ácid# úric# J4 0@d c#%# $& sigde a"er)a.
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
31/36
03/04/16 31T. Haydée Zúñiga Cáceres
TAF'A DE CONTENIDO DE P-RINAS ENA'I+ENTOS
A*7ME0/4EC/ME!AB*E4=- m&.1 &.
A*7ME0/4 A*7M70A-=1- m&.1 &.
A*7ME0/4 AE@70A
1-=1m&.1 &.
FrutaTumos de Iruta@erduras$ePcepto de&rupo deaimentos aimitar)
uecesCereaesHan $ePceptointe&ra)Be#idas $caI é( té(I)Urasas
Uuisantes*e&um#res secasCoiVorEspKrra&osEspinacas4etasHroductos
inte&raesAves $poo( pato(I)Carne $ternera(cordero( cerdo)Hescado $ePceptoos de U,)
@8sceras$8&ado(riLones(sesos)EPtracto decarneAncoas
Arenue4ardinaCa#aaMouscos
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
32/36
03/04/16 32T. Haydée Zúñiga Cáceres
#cido 0rico!
Componente de ries1ocardioJascuar en e S6ndrome
+etabóico
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
33/36
03/04/16 33T. Haydée Zúñiga Cáceres
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
34/36
03/04/16 34T. Haydée Zúñiga Cáceres
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
35/36
03/04/16 35T. Haydée Zúñiga Cáceres
8/18/2019 Desproteinizados y Ácido Úrico
36/36
03/04/16 36T Haydée Zúñiga Cáceres