Te ´ cnicas de diagno ´ stico Diagno ´ stico de la leishmaniosis cuta ´ nea. Valor de una te ´cnica de reaccio ´n en cadena de la polimerasa para la deteccio ´n de Leishmania infantum en muestras recogidas sobre papel de filtro versus la histologı ´a convencional y la inmunohistoquı ´mica Diagnosis of cutaneous leishmaniosis. Value of a polymerase chain reaction technique for Leishmania infantum detection in samples collected in filter paper versus histological and immunohistochemical methods Alba Pujol a , Roser Fisa a , Cristina Riera a, *, Vic ¸ens Rocamora b y David Boteller a a Laboratorio de Parasitologia, Facultad de Farmacia, Universitat de Barcelona, Barcelona, Espan ˜a b Servicio de Dermatologia, Hospital de Manacor, Manacor, Mallorca, Espan ˜a Las leishmaniosis son un conjunto de enfermedades parasi- tarias causada por protozoos flagelados del ge ´ nero Leishmania, que se multiplica dentro de las ce ´ lulas del sistema mononu- clear fagocı ´tico de los hospedadores vertebrados y son transmitidos por la picadura de dı´pteros del ge ´ nero Phleboto- mus y Lutzomyia 1 . Actualmente existen 350 millones de personas en el mundo en situacio ´n de riesgo, de las cuales 12 millones esta ´n afectadas por la enfermedad, estima ´ ndose que hay 2 millones de nuevos casos por an ˜o (0,5 millones de leishmaniosis visceral y 1,5 millones de leishmaniosis cuta ´ nea) 2 . En el a ´ rea mediterra ´ nea la leishmaniosis esta ´ causada por Leishmania infantum, presenta un cara ´ cter hipoende ´ mico, y las formas clı´nicas que se presentan son la leishmaniosis visceral (LV) y la leishmaniosis cuta ´ nea (LC). En la LC despue ´s de que el vector pica al hospedador, hay un perı ´odo de incubacio ´ n, que puede oscilar entre 2 semanas a 2 meses, hasta que aparece en la zona de la picadura la primera manifestacio ´n en forma de pa ´ pula eritematosa, sonrosada con costra central y exudado seroso, que aumenta lentamente de taman ˜o evolucionando a lesio ´n nodular y ulcerativa. Las lesiones se localizan con mayor frecuencia en zonas expuestas a la picadura del vector como cara, orejas, brazos y nuca, y pueden o bien cronificarse y aumentar en extensio ´n y profundidad, o disminuir e involu- cionar esponta ´ neamente 3 . La LC puede adoptar mu ´ ltiples patrones clı´nicos de expresio ´n como placas mu ´ ltiples primarias o sate ´ lites, maculas eritematosas, lesiones nodulares, lesiones mu ´ ltiples, tipo «lupus eritematoso like», «dermatomiositis like», «lupus vulgar’», tipo eczematiforme, verrugoso, papilomatoso, zos- teriforme, eripileloide, esporotricoide, o tipo macroquelia. Otro tipo de leishmaniosis cuta ´ nea muy difı ´cil de diagnosticar es la leishmaniosis cuta ´ neo-cro ´ nica, de mayor duracio ´n y con lesiones ma ´s polimorfas, y con menor sensibilidad en la te ´ cnica del frotis convencional, de los cultivos y de la biopsia cuta ´ nea al haber menor nu ´ mero de para ´ sitos. En la pra ´ ctica clı ´nica el diagno ´ stico de confirmacio ´n de la LC suele presentar problemas tanto en lo referente a la toma de la muestra como a la sensibilidad y especificidad de las te ´ cnicas diagno ´ sticas empleadas. Es por ello que un porcentaje importante de casos sospechosos no llegan a confirmarse. Un diagno ´ stico correcto deberı ´a considerar tres criterios que nos permitan diferenciar la leishmaniosis de otras entidades clı´nicas: a) antecedentes epidemiolo ´ gicos, b) cuadro p i e l ( b a r c ) . 2 0 1 2 ; 2 7 ( 9 ) : 5 2 7 – 5 3 1 * Autor para correspondencia. Correo electro ´ nico: [email protected](C. Riera). PIEL FORMACION CONTINUADA EN DERMATOLOGIA www.elsevier.es/piel 0213-9251/$ – see front matter # 2012 Elsevier Espan ˜ a, S.L. Todos los derechos reservados. http://dx.doi.org/10.1016/j.piel.2012.06.011
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Tecnicas de diagnostico
Diagnostico de la leishmaniosis cutanea. Valor de una tecnicade reaccion en cadena de la polimerasa para la deteccion deLeishmania infantum en muestras recogidas sobre papel de filtroversus la histologıa convencional y la inmunohistoquımica
Diagnosis of cutaneous leishmaniosis. Value of a polymerase chainreaction technique for Leishmania infantum detection in samplescollected in filter paper versus histological and immunohistochemicalmethods
Alba Pujol a, Roser Fisa a, Cristina Riera a,*, Vicens Rocamora b y David Boteller a
a Laboratorio de Parasitologia, Facultad de Farmacia, Universitat de Barcelona, Barcelona, Espanab Servicio de Dermatologia, Hospital de Manacor, Manacor, Mallorca, Espana
p i e l ( b a r c ) . 2 0 1 2 ; 2 7 ( 9 ) : 5 2 7 – 5 3 1
PIELFORMACION CONTINUADA EN DERMATOLOGIA
www.elsevier.es/piel
Las leishmaniosis son un conjunto de enfermedades parasi-
tarias causada por protozoos flagelados del genero Leishmania,
que se multiplica dentro de las celulas del sistema mononu-
clear fagocıtico de los hospedadores vertebrados y son
transmitidos por la picadura de dıpteros del genero Phleboto-
mus y Lutzomyia1. Actualmente existen 350 millones de
personas en el mundo en situacion de riesgo, de las cuales
12 millones estan afectadas por la enfermedad, estimandose
que hay 2 millones de nuevos casos por ano (0,5 millones de
leishmaniosis visceral y 1,5 millones de leishmaniosis
cutanea)2.
En el area mediterranea la leishmaniosis esta causada por
Leishmania infantum, presenta un caracter hipoendemico, y las
formas clınicas que se presentan son la leishmaniosis visceral
(LV) y la leishmaniosis cutanea (LC). En la LC despues de que el
vector pica al hospedador, hay un perıodo de incubacion, que
puede oscilar entre 2 semanas a 2 meses, hasta que aparece en
la zona de la picadura la primera manifestacion en forma de
papula eritematosa, sonrosada con costra central y exudado
seroso, que aumenta lentamente de tamano evolucionando a
lesion nodular y ulcerativa. Las lesiones se localizan con
mayor frecuencia en zonas expuestas a la picadura del vector
* Autor para correspondencia.Correo electronico: [email protected] (C. Riera).
0213-9251/$ – see front matter # 2012 Elsevier Espana, S.L. Todos loshttp://dx.doi.org/10.1016/j.piel.2012.06.011
como cara, orejas, brazos y nuca, y pueden o bien cronificarse y
aumentar en extension y profundidad, o disminuir e involu-
cionar espontaneamente3.
La LC puede adoptar mu ltiples patrones clınicos de
expresion como placas mu ltiples primarias o satelites,
maculas eritematosas, lesiones nodulares, lesiones mu ltiples,
tipo «lupus eritematoso like», «dermatomiositis like», «lupus
vulgar’», tipo eczematiforme, verrugoso, papilomatoso, zos-
teriforme, eripileloide, esporotricoide, o tipo macroquelia.
Otro tipo de leishmaniosis cutanea muy difıcil de diagnosticar
es la leishmaniosis cutaneo-cronica, de mayor duracion y con
lesiones mas polimorfas, y con menor sensibilidad en la
tecnica del frotis convencional, de los cultivos y de la biopsia
cutanea al haber menor nu mero de parasitos.
En la practica clınica el diagnostico de confirmacion de la
LC suele presentar problemas tanto en lo referente a la toma
de la muestra como a la sensibilidad y especificidad de las
tecnicas diagnosticas empleadas. Es por ello que un porcentaje
importante de casos sospechosos no llegan a confirmarse.
Un diagnostico correcto deberıa considerar tres criterios
que nos permitan diferenciar la leishmaniosis de otras
entidades clınicas: a) antecedentes epidemiologicos, b) cuadro
p i e l ( b a r c ) . 2 0 1 2 ; 2 7 ( 9 ) : 5 2 7 – 5 3 1528
clınico sugestivo de LC y c) diagnostico de confirmacion
mediante la aplicacion conjunta de diferentes metodos
diagnosticos.
El diagnostico directo comporta, en la mayorıa de los casos,
la observacion y/o aislamiento del parasito a partir de
muestras de piel obtenidas mediante raspado, aspirado o
biopsia. La tincion con Giemsa a partir de material de biopsia, o
de frotis por aposicion o escarificacion de la lesion sobre
portaobjetos permite la observacion de las formas amastigotes
del parasito fuera o dentro de los macrofagos. La especificidad
es del 100% y la sensibilidad entre un 50- 65%. El aislamiento de
las formas promastigotes de Leishmania mediante el cultivo in
vitro, a partir de biopsia o exudado, presenta sensibilidades
variables de entre un 25-85%. El aislamiento del parasito
requiere de un largo periodo de incubacion de entre 1 a
2 meses, produciendose con relativa frecuencia la contami-
nacion del cultivo debido a la biota normal presente en la
muestra de piel o exudado de lesion, no permitiendo el
crecimiento del parasito y su aislamiento.
La histologıa convencional aporta sensibilidades variables
entre un 60-80%. Es una tecnica que presenta cierta dificultad
debido a la deshidratacion y deformacion que las formas
amastigotas sufren durante le proceso de fijacion de las
muestras, aunque la caracterıstica formacion de un granu-
loma en lesiones sospechosas orienta el diagnostico. Otros
metodos como la immunohistoquımica (IHQ) sobre cortes a
partir de muestras de biopsia parafinada, presentan una
mayor sensibilidad (80%), ya que gracias al empleo de
anticuerpos monoclonales o policlonales anti-Leishmania, se
obtiene un mayor contraste de coloracion, mejorando la
localizacion y deteccion de las formas parasitas, en compa-
racion con la tecnica histologica convencional4.
En los u ltimos anos las tecnicas de biologıa molecular
basadas en la deteccion de ADN del parasito mediante la
reaccion en cadena de la polimerasa y sus variantes (PCR, PCR
anidada, PCR a tiempo real, etc.), han supuesto un gran avance
debido a su elevada especificidad, sensibilidad y rapidez. La
eleccion de dianas altamente repetitivas del genoma de
Leishmania, como la region conservada de los minicırculos
del kinetoplasto (10.000 copias por parasito) o SSU rDNA
(40-200 copias por parasito) permiten detectar la presencia
de un nu mero muy bajo de parasitos sobre diferentes tipos de
muestras biologicas como sangre, medula osea o piel. La
aplicacion de la tecnologıa de PCR a tiempo real permite
ademas la cuantificacion de la carga parasitaria4–7.
La intradermorreaccion de Montenegro o test de la
leishmanina es un test cutaneo de hipersensibilidad retar-
dada que consiste en la inoculacion intradermica de una
antıgeno compuesto por una suspension de promastigotes
fenolizados a una concentracion de 5x106/mL, la prueba se lee
a las 48 o 72 h y se considera positiva cuando el diametro de la
induracion es igual o superior a 5 mm. El test es utilizado en
estudios epidemiologicos y puede orientar el diagnostico,
pero en ningu n caso confirmar una LC debido a que en un
area endemica, como es la nuestra, hasta un 27% de la
poblacion sana puede tener un test de leishmanina positivo8.
La deteccion de anticuerpos especıficos es de utilidad
diagnostica en la leishmaniosis visceral y mucocutanea.
Sin embargo carece de interes por su baja sensibilidad en
los casos de LC por L. infantum debido a la baja tasa de
anticuerpos circulantes en suero solamente detectables,
en algunos casos, mediante la tecnica de Western blot,
que permite observar serorreactividad (Riera, et al. datos
no publicados) frente a las fracciones antigenicas de 14 y/o
16 kDa consideradas diagnosticas8.
El objetivo del trabajo ha sido valorar la utilidad de una
tecnica molecular cuantitativa de amplificacion de ADN (PCR a
tiempo real) sobre muestras de exudado lesional recogidas en
papel de filtro versus muestras de biopsia de piel parafinadas.
Los resultados se han comparado con los resultados por
histologıa y por inmunohistoquımica.
Material y metodos
Pacientes
Se han incluido en el estudio 23 pacientes atendidos en el
Servicio de Dermatologıa del Hospital de Manacor (Islas
Baleares) 14 de ellos sospechosos de LC con diferentes formas
clınicas de presentacion y 9 pacientes control con otras
enfermedades cutaneas (tabla 1). Todos ellos firmaron el
consentimiento informado en el momento de la toma de
muestra, y el estudio fue aprobado por la Comision de Bioetica
del hospital.
Muestras
De todos los pacientes incluidos en el estudio se ha obtenido
biopsias de piel de las lesiones que fueron conservadas en
bloques de parafina. Las muestras fueron enviadas al
laboratorio de Parasitologıa de la Facultad de Farmacia de
Barcelona (Universitat de Barcelona) para los estudios de
diagnostico por tecnicas de IHQ y PCR.
De los pacientes con sospecha de LC (n = 14) se obtuvieron
exudados o raspados de lesion recogidos en papel de filtro
Whatman n.8 3, para su posterior estudio por PCR a tiempo
real. Las muestras se han obtenido frotando la lesion con o sin
retirar la costra. Cuando las lesiones eran mas cronicas y no
presentaban costra central, las muestras se obtuvieron
despues de realizar la biopsia mediante punch e impregnando
el papel de filtro. Si habıa costra o exudado se rascaba la lesion
sin anestesia. En otros casos se realizaba un pequeno rascado
con bisturı sobre la lesion cronica, que permitıa obtener
material suficiente para la prueba diagnostica (fig. 1). Los
papeles de filtro, despues del secado completo de la muestra,
fueron conservados a temperatura ambiente en sobres
individuales y correctamente identificados durante un tiempo
que oscilo entre una semana y 2 meses.
PCR a tiempo real
La PCR se realizo sobre el ADN extraıdo de las muestras de
exudado lesionar embebido en papel de filtro y de las biopsias
previamente desparafinadas, utilizando el kit comercial High
Pure PCR Template Preparation kit (Roche Molecular Bioche-
micals), siguiendo las instrucciones de la casa comercial. La
deteccion y cuantificacion del ADN de Leishmania se realizo
aplicando una PCR a tiempo real4, que emplea unos cebadores
especıficos y una sonda TaqMan, que amplifican una region
Tabla 1 – Resultados globales del estudio. Resultados de la PCR sobre bloque de parafina y sobre papel de filtro junto conlos resultados obtenidos por histologıa convencional y por inmunohistoquımica (IHQ)
16a NC NC Dermatitis de contacto Neg. 0 Neg. 45 NR NR
17a NC NC Nevus compuesto Neg. 0 Neg. 45 NR NR
18a NC NC Queratosis Neg. 0 Neg. 45 NR NR
19a NC NC Carcinoma escamoso-1 Neg. 0 Neg. 45 NR NR
20a NC NC Carcinoma escamoso-2 Neg. 0 Neg. 45 NR NR
21a NC NC Carcinoma escamoso-3 Neg. 0 Neg. 45 NR NR
22a NC NC Hiperplasia epidermica Neg. 0 Neg. 45 NR NR
23a NC Una NC Neg. 0 Neg. 45 NR NR
H: hombre; M: Mujer; NC: no se conoce; NR: no realizado.a Grupo control, pacientes con otras patologıas.
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constante de los minicırculos del kinetoplasto de Leishmania
spp. La amplificacion se realizo en un termociclador ABI Prism
7700 (Appied Biosystem) a 94 8C y 55 8C durante 45 ciclos. La PCR
en tiempo real se considero positiva para Leishmania cuando el
ciclo umbral Ct era menor a 45. Se denomina Ct para una
Figura 1 – Obtencion de la muestras sobre papel de filtro a
partir de raspado de la lesion.
muestra, el primer ciclo de la reaccion de PCR en el que se
detecta fluorescencia por encima de la lınea base. Cuanto mas
ADN inicial tenga la muestra antes se alcanza este valor, que se
expresa como un Ct bajo. Los resultados se comparan con una
recta patron de ADN.
Histologıa
Se realizo sobre cortes de muestras de biopsia parafinadas,
tenidas con la coloracion estandar de hematoxilina-eosina y
observacion posterior que se realizo en el Laboratorio de
Anatomıa Patologica del Hospital de Manacor.
Inmunohistoquımica
Se realizo sobre muestras de biopsias parafinadas fijadas sobre
portaobjetos: como anticuerpo primario se utilizo un anti-
cuerpo policlonal de conejo anti-Leishmania, (obtenido en el
laboratorio de Parasitologıa) y como anticuerpo secundario la
proteına A peroxidasa (Pierce) y hematoxilina de Harris (Dako
Automation Hematoxylin code: S 3301) para la contracolora-
cion. La valoracion de la carga parasitaria se realizo mediante
un metodo semicuantitativo a traves de la observacion al
Figura 2 – Presencia de abundantes (+++) amastigotes de
Leishmania (x 1.000) revelados en una biopsia de piel por
IHQ. Las flechas senalan diferentes formas amastigotas.
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microscopio optico (x 1.000). La carga parasitaria se midio
como no presente (0), discreta (+), moderada (++) e intensa
(+++) (fig. 2).
Resultados
Los resultados globales del estudio junto con datos referentes
a la localizacion de la lesion y la histologıa figuran en la tabla 1.
Observamos que los resultados de la histologıa y de la IHQ se
correlacionaron con los resultados de la deteccion de ADN de
Leishmania por PCR a tiempo real aplicada sobre las biopsias
cutaneas incluidas en bloque de parafina y sobre las muestras
del exudado lesionar embebido en papel de filtro.
Los resultados de PCR indican que dentro del grupo de los
14 enfermos con sospecha de LC, la presencia de Leishmania se
confirmo en 11/14 (79%) de las muestras de exudado recogidas
en papel de filtro y en 9/12 (75%) de las muestras procedentes
de biopsia incluida en bloque de parafina (tablas 1 y 2). En
todos los casos en que la PCR de la biopsia fue positiva tambien
lo fue la PCR sobre papel. Mediante IHQ y dentro el grupo de
sospechosos de sufrir LC, la presencia del parasito se observo
en 7 de las 12 muestra estudiadas (58%), confirmandose la
infeccion por Leishmania en una muestra mas que por
histologıa convencional (tablas 1 y 2). Al comparar estos
resultados con los obtenidos por PCR, observamos que en
todos los casos donde se ha podido detectar el parasito por
Tabla 2 – Resultados de la IHQ y la PCR a tiempo real sobre padiagnostico confirmado por histologıa y pacientes con histolo
Resultados histologıa PCR papel
+ �
Confirmados por histologıa 6 0
No concluyentes por histologıa 5 3a
Total 11 3
% positividad 11/14 (78,6%)
IC 95% 51,7 - 93,2%
a Muestras de los mismos pacientes.
IHQ, la tecnica de PCR biopsia y en papel de filtro ha sido
positiva (Ct<45 ciclos) (tabla 1). De los 9 pacientes con otras
enfermedades cutaneas, considerado grupo control, solo
pudieron estudiarse muestras de biopsias cutaneas que fueron
negativos por todas las tecnicas (tablas 1 y 2).
Las muestras de pacientes con LC confirmada por histo-
logıa fueron tambien positivas por las tecnicas de PCR e IHQ
(tabla 2). Los resultados obtenidos por PCR a tiempo real en
papel y a partir del bloque indican la presencia de abundantes
formas parasitas (Ct: 15-24 ciclos). Por IHQ la carga parasitaria
fue cuantificada desde discreta (+) a intensa (+++). Dentro del
grupo de muestras consideradas como no concluyentes por
histologıa, 5 de 8 fueron confirmadas mediante el estudio por
PCR a partir del papel y 3 de 6 a partir del bloque. Los valores de
Ct en muestras de papel y bloque oscilaron entre 21 - 40 ciclos,
que indican la presencia de un nu mero bajo de parasitos. Por
IHQ se detecto el parasito en una de las 6 muestras estudiadas
que tenıan histologıas negativas. Se ha observado una buena
correlacion entre la cuantificacion de la IHQ y PCR, sin
embargo por debajo de Cts de 30, con esta tecnica, no se
pudo observar la presencia el parasito. Tal como podemos
observar en la tabla 2, la sensibilidad de la PCR es similar en los
2 tipos de muestra (78,6% en papel y 75% en bloque) y superior
a las otras 2 tecnicas. En cuanto al grupo control formado por
muestras procedentes de enfermos con otras patologıas
cutaneas, los resultados fueron negativos por todas las
tecnicas.
Discusion
El «gold standard» para el diagnostico de la LC requiere
la demostracion de la presencia del parasito por alguna
prueba de diagnostico directo. Actualmente ninguna
prueba de diagnostico consigue diagnosticar el 100% de los
casos. La extension directa del exudado, el cultivo y el estudio
histopatologico a partir de la biopsia, suelen presentar
resultados variables que dependeran de la zona de la lesion
de donde se ha obtenido la muestra, si esta es reciente o no,
de la densidad de parasito y de la experiencia del observador.
Por lo tanto, un resultado negativo por estas tecnicas no
excluye el diagnostico de leishmaniosis.
La biopsia cutanea habitualmente utilizada en la practica
clınica puede ser dolorosa y causar problemas de sangrado o
infecciones, con la consiguiente formacion de cicatrices en
zonas expuestas. Por otra parte esta muestra puede presentar
ciertas limitaciones, desde el punto de vista del diagnostico de
pel de filtro y biopsia parafinada en pacientes congıa no concluyente
PCR bloque IHQ bloque
+ � + �6 0 6 0
3 3a 1 5
9 3 7 5
9/12 (75%) 7/12 (58,33%)
46,2 - 91,7% 31,9 - 80,7%
p i e l ( b a r c ) . 2 0 1 2 ; 2 7 ( 9 ) : 5 2 7 – 5 3 1 531
laboratorio, al aplicar tecnicas histologicas, sobre todo cuando
la lesion tiene un tiempo de evolucion largo. La IHQ aunque no
incrementa de forma importante la sensibilidad respecto a la
histologıa, presenta una ventaja sobre, ya que gracias al
contraste de coloracion, permite identificar especıficamente
los amastigotes en las lesiones cronicas de tipo granuloma-
toso, donde la presencia de una gran cantidad de celulas
enmascara la presencia de Leishmania4.
La PCR a tiempo real utilizada en este estudio sobre
muestras de exudado en papel de filtro y/o biopsia obtenidas
de pacientes con lesiones sospechosas de LC aporta una mayor
sensibilidad que las tecnicas convencionales de diagnostico
directo, siendo muy especıfica con los cebadores utilizados4.
La sensibilidad detectada sobre muestras de exudado en papel
(78,6%), similar a la obtenida en biopsia (75%), demuestra su
utilidad para este tipo de muestras. Nuestros resultados
estarıan de acuerdo con estudios realizados con pacientes con
LC del Nuevo Mundo. Autores como Boggild et al.9,10, al
estudiar por PCR 8 muestras de piel, procedentes de lesiones
de piel infectadas, encuentran una sensibilidad del 100%.
Otros autores como Romero et al.11, utilizando una PCR que
amplifica ADN del kinetoplasto, senalan que la sensibilidad
del papel versus otras muestras de tejido es satisfactoria, y su
reproductividad puede sustituir a la biopsia en pacientes
afectados por L. brazilensis. Una ventaja de la PCR con respecto
a los metodos parasitologicos tradicionales, como es el cultivo
in vitro, es que a pesar de la presencia de infecciones
bacterianas secundarias, habituales en este tipo de muestra,
los resultados no se alteran por la contaminacion10. La utilidad
de la PCR en la confirmacion de una LC, ha sido demostrada
sobretodo en los casos de lesiones cronicas y en los de
leishmaniosis recidivante o lupus like donde la histologıa es
poco sensible debido a las pocas formas amastigotas presentes
en las lesiones4.
La obtencion y recogida de muestras sobre papel de filtro,
tecnica no cruenta, de obtencion facil y no dolorosa, evita la
necesidad de biopsiar la lesion, procedimiento especialmente
dificultoso en ninos, y que puede dejar cicatrices. Mediante
PCR se obtienen resultados de sensibilidad similares a los
obtenidos con la biopsia que validan su utilizacion.
Una ventaja de las muestras recogidas sobre papel es su
estabilidad que permite que puedan ser guardadas a tempe-
ratura ambiente en nuestro estudio hasta 2 meses. Esta
caracterıstica permite que las muestras puedan ser obtenidas
facilmente en la consulta dermatologica y ser enviadas por
correo convencional al centro donde tengan que ser valoradas,
ya que no requieren condiciones especiales de conservacion.
La utilizacion de las tecnicas de biologıa molecular
aplicables tanto sobre biopsias como otro tipo de muestra12–
14, por la elevada sensibilidad y especificidad que presentan,
pueden ser de gran utilidad en el diagnostico de la LC. A partir
de nuestros resultados podemos concluir que la PCR sobre
muestras recogidas sobre papel de filtro puede ser una buena
alternativa para el diagnostico de la LC.
Financiacion
El trabajo ha recibido financiacion de la Conselleria d’Econo-
mia Hisenda i Innovacio de les Illes Balears (CEA09/001).
Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener ningu n conflicto de intereses.
b i b l i o g r a f i a
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![Cumbre Chagas y Leishmaniosis[1]](https://static.documentos.tech/doc/80x56/546ee2a8b4af9f335f8b4641/cumbre-chagas-y-leishmaniosis1.jpg)
