Licda. Yarisel Rodríguez
Mgtra. Dalis Mojica
ICGES/LCRSP
PROGRAMA DE EVALUACIÓN
EXTERNA DE LA CALIDAD
SUPERVISIONES PRUEBAS DE
PROFICIENCIA
CONTROL DE CALIDAD
INDIRECTO
RED NACIONAL DE DENGUE
No hay laboratorios de la red
Evaluación de los Kits comerciales para diagnóstico que
ingresen a Panamá (Decreto 148 del 9 de agosto de 1999 (gaceta oficial 23868)
Guzman et al., Nature Rev, 2011
ACCESIBILIDAD
CONFIABILIDAD
MÉTODOS DIRECTOS MÉTODOS INDIRECTOS
Aislamiento
Viral
Detección del
genoma
Detección de
antígeno
Serología
IgM
Serología
IgG
MUESTRAS: Suero
Momento de recolección:
- 5 a 21 días
CADENA DE FRÍO: Muestras < 4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º C)
DATOS COMPLETOS : Formulario único de vigilancia epidemiológia: (Fecha de inicio de los síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, etc.)
CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD
IMPORTANTE EVITAR CICLOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO
DE LAS MUESTRAS
MUESTRAS: Suero (1ml) o sangre completa (sin aditivos o con gel)
Momento de recolección:
> 9 días de inicios de síntomas hasta 45 días
CADENA DE FRÍO: Muestras < 4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º C)
DATOS COMPLETOS : Formulario único de vigilancia epidemiológica (Fecha de inicio de síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, etc.)
CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD
Transmisión de CHIKV: Por picaduras de artrópodos infectados.
Protegerse: ropa, mosquitero impregnado, repelente e insecticida
CHIKV es un agente de bioriesgo de nivel 3, La viremia es más alta y
se transmite más facilmente que el dengue (sangre-piel). Se considera que se pueden transmitir por el contacto con animales infectados, sangre, suero, plasma y tejidos
Durante toma de muestra y manipulación: Equipo de protecciónpersonal: guantes, bata, mascarilla, lentes protectores o mascara protectora
de rostro. Diagnóstico molecular o de serología: BSL2, aislamiento BSL2* o BSL3
Las muestras deben enviadas como material potencialmenteinfeccioso, utilizar guantes cuando se manipulan
Toda muestra sospechosa o todo instrumento en contacto con esas muestras:
descartar en basuras de bioriesgo
IgG
IgMViremia Viremia
Signos y síntomas Signos y síntomas
Vaughn, 2005
ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE DENGUE EN LA RED NACIONAL DE DENGUE
LABORATORIO DE LA RED NACIONAL DE DENGUE
RECIBE PACIENTE CON FORMULARIO COMPLETO
CLASIFICA MUESTRAS
5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS IgM/IgG
PRUEBA DE ELISA
*Los casos con sospecha de Dengue Grave deben ser enviados inmediatamente al ICGES previa notificación aEpidemiología local y al ICGES.
NEGATIVO
DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO-Detección del AgNS1 - Pacientes hospitalizados - Vigilancia del serotipo circulante-Enviar muestra al ICGES
POSITIVO
REPORTAR
CITAR AL PACIENTE PARA II MUESTRA
EN FASE CONVALESCIENTE
ENVIAR 10% DE MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD Y
VIGILANCIA VIROLÓGICA AL ICGES*
ENVIAR 10% DE MUESTRAS PARA
CONTROL DE CALIDAD AL ICGES
4 DÍAS DE SÍNTOMAS*
NEGATIVOPOSITIVO
REPORTAR REPORTAR
NO TOMAR MUESTRA Y CITAR AL PACIENTE PARA TOMARLA DEL DÍA 5 AL 21 DE INICIO DE
SÍNTOMAS
0-3 DÍAS DE SÍNTOMAS
MUESTRAS ENVIADAS POR LOS LABORATORIOS DE LA RED NACIONAL DE DENGUE AL INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD
CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS
0-4 DÍAS DE SÍNTOMAS
CASO CONFIRMADO
5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS
POSITIVO
CASO CONFIRMADO
NOTA: Los Laboratorios de la Red enviarán el 10% de muestras Negativas y Positivas para detección de anticuerpos IgM e IgG y Antígeno NS1, además las muestras agudas para vigilancia virológica de acuerdo a lo establecido en los lineamientos para la temporada baja y de brote de casos de dengue.
NEGATIVO
PRUEBAS SEROLÓGICAS
NEGATIVO POSITIVO
REPORTAR
RT-PCR TIEMPO REAL *
REPORTAR REPORTAR
* En caso de agotarse los reactivos para RT-PCR Tiempo Real, las muestras serán analizadas mediante cultivocelular, del cual se obtienen resultados entre los 14 a 30 días.
REPORTAR
Versión 2013
ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE CHIKUNGUNYA EN EL ICGES
MUESTRAS ENVIADAS POR LAS INSTALACIONES DE SALUD A NIVEL NACIONAL AL INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD
CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS
0-8 DÍAS DE SÍNTOMAS
CASO CONFIRMADO
Mayor o igual a 9 DÍAS DE SÍNTOMAS (PRIMERA MUESTRA)
POSITIVO
CASO CONFIRMADO
NEGATIVO
ELISA IgM CASERA PARA CHIKV O COMERCIAL CON R.S
NEGATIVO POSITIVO
REQUIERE SEGUNDA MUESTRA*
RT-PCR TIEMPO REAL CHIK V *
REPORTAR REQUIERE SEGUNDA MUESTRA*
* LA SEGUNDA MUESTRA DEBE OBTENERSE DOS SEMANAS DESPUÉS DE TOMADA LA PRIMERA MUESTRA.
POSITIVO
SOSPECHOSO
POSITIVO
SOSPECHOSO
REQUIERE SEGUNDA MUESTRA*
NEGATIVO
REPORTAR
NEGATIVO
INDETERMINADO
Versión 2014
SencillaGran cantidad de suerosDiagnóstico de rutinaAmpliamente distribuídaDiagnóstico rápidoELISA (formato más común)Infección reciente
Standard test: Detección de IgM e IgG
Serum
Saliva
Filter paper
MUESTRAS
La prueba de ELISA de captura contra Acs IgM para Dengue utilizada en la red no distingue entre Infección primaria o secundaria.
IgM
La prueba de ELISA de captura contra Acs IgG para Dengue utilizada en la red sólo es positiva en casos de Infección Secundaria.
Ig G
• MUESTRAS DEL DÍA 4 NO SE DEBEN PROCESAR EXCEPTO CASOS FATALES , GRAVES UHOSPITALIZADOS.
• LOS LINEAMIENTOS DE LABORATORIO SOLO APLICAN PARA LAS MUESTRAS NO PARAMANEJO CLÍNICO.
• CONTROL DE CALIDAD (ENVIAR AL ICGES):– 10% DE MUESTRAS POSITIVAS Y NEGATIVAS EN EL DX DE ACS– 10% DE POSITIVAS Y 10% DE NEGATIVAS EN EL DX DE NS1
• VIGILANCIA VIROLÓGICA (ENVIAR AL ICGES):– EN TEMPORADA BAJA: TODAS LAS MUESTRAS AGUDAS (O-3 DÍAS DE SÍNTOMAS)– EN BROTE O EPIDEMIA: SÓLO EL % DE MUESTRAS QUE ESTIPULE EPIDEMIOLOGÍA.
• ES OBLIGATORIO EL USO DEL FORMULARIO UNICO PUES CONTIENE VARIABLESNECESARIAS PARA LA TOMA DE DECISIONES EN LA REALIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DELABORATORIO.
• SE REQUIERE UNA COMUNICACIÓN Y COORDINACIÓN PERMANENTE ENTRELABORATORIO, EPIDEMIOLOGÍA Y CLÍNICOS PARA EL ADECUADO USO DE LAS PRUEBASY RECURSOS DE LA INSTALACIÓN.
ELISA IgM DE CAPTURA -ELISA Casera (Protocolo del CDC)
ELISAs COMERCIALES (IgM, IgG)-En proceso de registro sanitario
HRPHRP
1. Coat With Goat anti-Human IgM
4°Overnight
2. Add Patient Serum @ 1:400
37°@ 1 Hour
3. Add Antigen4° Overnight
4. Add HRP anti-group McAb
37° 1 Hour
• Reacción cruzada posible con otros alfavirus (Mayaro, EEEV)
• Confirmar muestras positivas con 2nda muestra (y neutralización en placas)
No neutralization
Neutralization
CHIK IgM Capture ELISA (P/N)
CHIK VEE MAY EEE
12.3 0.89 1.9 1.2
10.6 1.1 1.9 1.3
14.5 1.1 3.1 0.89
20.4 1.5 7.1 1.8
26.6 2.2 1.7 1.5
21.2 2.2 1.2 1.6
15.3 1.6 1.9 2.2
31.3 1.7 2.9 1.8
22 1.8 1.4 1.4
18.8 1.2 1.5 1.1
34.3 1.6 2.8 9.1
Cortesía, Dr. Robert Lanciotii, DVBID, CDC-USA
Colaboración con el CDC
Cada 15 días se realiza genérico de alfavirus para muestras con sospecha de dengue que resulten
negativas. Identificación de CHIK
-RT-PCR en tiempo final genérico para Alfavirus (Sanchez-Seco
MP, J Virol Methods 2001;95:153-61)
-Secuenciación y comparación por BLAST
Diagnóstico diferencial sólo clínicamente indicado
La confirmación etiológica específica de CHICK sólo es posible por técnicas de laboratorio.
Las plataformas para vigilancia de dengue, permitirán la detección y vigilancia de CHICK.
Los laboratorios deben implementar y fortalecer la capacidad básica para la detección viral (limitaciones de ensayos serológicos)
La detección de IgM en una sola muestra es presuntiva.
Una vez demostrada la circulación autóctona, no será necesario confirmar el 100% de los casos.
PAHO/OMS