Date post: | 16-Sep-2015 |
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Lic. David BarrosoLic. Rhaider BaptistaLic. MsSc. Zulitza Pimentel
DefinicinEs una tcnica que combina la especificidad de los anticuerpos con la sensibilidad de un ensayo enzimtico. Esta tcnica es utilizada para medir tanto antgenos como anticuerpos, de manera cualitativa, semicuantitativa y cuantitativa.
Fases de la respuesta inmuno humoral
Tipos de ELISA1.- Anticuerpos Marcados
ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA Sndwich1.- Antgeno Marcado
ELISA Competitivo
ANTIGENO ESPECIFICO FIJADOAL FONDO DEL POZOANTICUERPOS CONTRA ANTIGENO PRESENTE EN LA MUESTRAANTICUERPOS CONTRA INMUNOGLOBULINA HUMANA ACOPLADO CON PEROXIDASAH2O2Oxidacin de TMBH2SO4H2O2 y Substrato TMBELISA INDIRECTO LavadoBufferLectura de 450 a 620nm1 HORA TA15 Minutos TA30 Minutos TALavadoBufferSTOP
Anticuerpo Especifico dirigidoContra el Antigeno a Determinar antigeno presente en la muestraAnticuerpos marcados con peroxidasaH2O2Oxidacin de OPDH2SO4H2O2 y Substrato TMBELISA DE CAPTURALavadotampn PETLectura a 450 a 6201 HORA TA15 Minutos TA15 Minutos TALavadotampn PET
Anticuerpo espeficico, fijado al fondo del pocilloAntgeno de la muestra del paciente y antgeno conjugado a peroxidasa (comercial)H2O2 y Substrato H2O2Oxidacin de TMBELISA COMPETITIVOH2SO4STOP
Anticuerpo espeficico, fijado al fondo del pocilloAntgeno de la muestra del paciente y antgeno conjugado a peroxidasa (comercial)H2O2 y Substrato H2O2Oxidacin de TMBELISA COMPETITIVOH2SO4STOP
Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica
AnticuerposMonoclonalesPoliclonalesPptidos sintticosAntgenos recombinantes
Produccin de anticuerpos policlonalesExtraccin del sueroPurificacin
Diferencias entre Monoclonales y Policlonales
EspecificacionesPoliclonalesMonoclonalesEpitopes que reconocenVariosnicoEspecificidadVariableNo variableRendimientoVariable segn la especieBaja en tejidosAlta en lquido ascticoCostoBajoAlto
Antgeno Completo
Extracto total
Fraccin purificada
Pptido sinttico
Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica
Materiales de la fase slida
Sistemas de LavadosComponentes
Cantidad
Nmero de ciclos
Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica
Sistema de revelado Ags - Acs
Enzimas
SustratosCompuestos solubles
Fcil de manipular
No resulten txicos
Bajo costo
Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica
Revelador de la actividad enzimtica cido Sulfrico 0,5N 1N 2N
cidos fuertes
Bases fuertes
Mezclar bien los pocillosFactores que afectan la colorimetraTemperaturaTiempoExposicin a la luz
Lectura de los resultadosLector de placas de ELISAD.O.
Calculo e Interpretacin de los resultados Calculo de la media de los controles
Calculo del Cut off
Resultado (D.O./C-off)
Interpretacin de los resultados
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