EVALUACIÓN DEL EFECTO ANSIOLÍTICO MEDIADO POR LA
SINERGIA DE DOS ESPECIES DEL GÉNERO Passiflora EN
RATONES DE LABORATORIO
SILVIA GONZÁLEZ NIEVES
Grupo de Ecofisiología del Comportamiento y Herpetología, Universidad de los Andes
RESUMEN: Las fitomedicinas representan una alternativa de tratamiento para la ansiedad y dentro de las
más usadas están las plantas del género Passiflora. El presente estudio pretende evaluar si existe una
sinergia entre extractos de Passiflora vitifolia y Passiflora smithii que produzca un efecto ansiolítico en
un ratones de laboratorio. Para medir si existe ansiolisis se utilizó la prueba estandarizada del laberinto
elevado en cruz. Los resultados fueron sometidos a un análisis discriminante lineal y se observó una
diferencia entre la actividad del extracto de P. smithii y el extracto combinado de P. vitifolia y P. smithii.
Palabras clave: Passiflora smithii, Passiflora vitifolia, ansiedad, laberinto elevado en cruz, fitomedicina.
Desde hace siglos, los desórdenes de
ansiedad han sido tratados con medicinas
herbales o fitomedicinas en la mayoría de
las poblaciones humanas. Actualmente, un
gran número de personas que padecen éstos
trastornos recurren al uso de las medicinas
alternativas como tratamiento (Sarris et al.,
2011). La investigación en este campo ha
venido creciendo en la última década
(García-García et al., 2008) generando
evidencia de la eficacia de algunas de estas
plantas.
Dentro de las fitomedicinas más usadas se
encuentran algunas especies del género
Passiflora (K. Dhawan, Dhawan, &
Sharma, 2004). Los efectos ansiolíticos de
estas plantas han sido usados desde antaño
por la medicina popular alrededor del
mundo debido a sus propiedades
ansiolíticas, sedativas, somníferas, anti-
convulsivas y anti-inflamatorias (Miyasaka,
Atallah, & Soares, 2007; Dhawan et
al.,2004).
La especie más estudiada de éste género es
P. incarnata. La acción ansiolítica y
sedativa de ésta planta está bien soportada
en modelos animales (Appel et al., 2011; K.
Dhawan et al., 2004). Adicionalmente, se
conoce su contenido químico que consta de
flavonoides y alcaloides; estos compuestos
actúan sobre el sistema nervioso central,
específicamente en receptores del ácido
gamma-aminobutírico (GABA), generando
como resultado ansiolisis (Elsas et al.,
2010; Lolli et al., 2007; Nassiri-Asl,
Shariati-Rad, & Zamansoltani, 2007).
La segunda especie más estudiada es
Passiflora edulis y ha sido establecida
como una fuerte depresora del sistema
nervioso central (Deng, Zhou, Bai, Li, & Li,
2010). Además, su actividad ansiolítica ha
sido demostrada en pruebas de laberinto
elevado en cruz en ratas (Petry et al, 2001;
Coleta et al., 2001). Otras especies con
ansiolisis comprobada son Passiflora
quadrangularis (de Castro et al., 2007), P.
coerulea (Medina et al., 1990), P. actinia
(Lolli et al., 2007) y P. alata (Petry et al.,
2001).
Asimismo, se ha comprobado la acción
sinérgica de extractos de Passiflora
incarnata con otras plantas. Capasso &
Sorentino (2005) demostraron la actividad
sinérgica de P. incarnata y Kava kava al
producir una disminución en la retoma
sináptica de serotonina en ratones de
laboratorio. También se reportó el efecto
sedativo mediado por la sinergia entre
Passiflora incarnata y Hypericum
perforatum en ratas (B. L. Fiebich, Knörle,
Appel, Kammler, & Weiss, 2011). Sin
embargo, hasta el momento los estudios
sobre de la acción sinérgica de compuestos
provenientes de diferentes plantas son muy
escasos (Sarris et al., 2011).
Este estudio pretende evaluar en un modelo
animal el efecto ansiolítico de la sinergia
entre extractos de Passiflora vitifolia y
Passiflora smithii, dos especies que hasta el
momento no han sido estudiadas en el
campo de la fitofarmacología.
MATERIALES Y MÉTODOS
MATERIAL VEGETAL
Las hojas de Passiflora smithii y P. vitifolia
fueron colectadas del municipio de La Vega
(Cundinamarca), donde son mantenidas en
cautiverio como alimento para mariposas.
Originalmente, P. smithii proviene de
Bucaramanga (Santander) y P. vitifolia de
Mocoa (Putumayo). Las concentraciones de
los metabolitos secundarios de plantas en
cautiverio pueden variar considerablemente
con respecto a aquellas mantenidas en
estado silvestre (Arthur, Guthrie & Newell,
1930).
PREPARACIÓN DE LOS EXTRACTOS
VEGETALES
Para la preparación de los extractos se
secaron las hojas en un horno a 55°C por
36 h. El polvo obtenido fue sometido a la
extracción en etanol 96% a 45 °C por 24
horas, usando una proporción de 10 g de
polvo por 400 mL de etanol, posteriormente
se filtró la mezcla (tamaño de poro del
papel filtro: 20-25 µm). La solución filtrada
fue secada nuevamente por 72 h a 55 ºC.
Finalmente el residuo fue diluido en
solución salina de cloruro de sodio 0.9%.
ANIMALES
Se utilizaron ratones blanco suizo obtenidos
del Bioterio del Departamento de Ciencias
Biológicas de la Universidad de los Andes.
Los ejemplares eran machos adultos.
Fueron mantenidos en cajas metálicas bajo
condiciones controladas, recibiendo agua y
comida ad libitum.
TRATAMIENTOS Y DOSIS
Se evaluaron cinco tratamientos: solución
salina 0.9% (control negativo), Passiflorina
® Funat (0.52 mg/kg) disuelta en solución
salina (control positivo) y los extractos de
Passiflora vitifolia (4.33 mg/kg), Passiflora
smithii (7.67 mg/kg) y Passiflora vitifolia
con P. smithii (V.S) ( P.smithii 3.83 mg/Kg
y P. vitifolia 2.15 mg/kg para una
concentración total de 5.98 mg/kg). Estas
concentraciones fueron las cantidades
obtenidas en la preparación de cada
extracto. Las sustancias fueron inyectadas
en la zona intraperitoneal 30 minutos antes
de las pruebas a un volumen de 1 mL/kg
LABERINTO ELEVADO EN CRUZ
Los ratones fueron transferidos al laberinto
30 minutos después de la administración de
cada tratamiento. Las dimensiones de la
arena fueron las estandarizadas para ésta
prueba (Walf & Frye, 2007). El laberinto
consiste de dos brazos abiertos (5 cm de
ancho X 30 cm de largo) y dos brazos
cerrados (5 X 30 X 15 cm de alto),
dispuestos perpendicularmente y unidos por
un cuadrado central (5 X 5 cm). El laberinto
está elevado 40 cm del suelo. Los animales
fueron localizados en el cuadrado central
del laberinto y se grabó en video toda su
actividad durante 5 minutos. Se midieron
distintas variables: tiempo gastado en
brazos abiertos y cerrados, en la zona
centro, el número de entradas tanto para los
brazos abiertos como para los cerrados y la
movilidad total. Cada ratón fue usado una
sola vez. Todas las pruebas fueron
realizadas en las horas de la mañana de 8:00
a.m. a 12:00 p.m. Para analizar los videos
se utilizó el software Ethovision ®
Figura 1. Análisis discriminante lineal para la prueba del laberinto elevado en cruz en
ratones de laboratorio para medir el efecto ansiolítico de extractos de dos especies de
Passiflora, la combinación de éstas y los respectivos controles. Variables: A. Movimiento
total, B. Entradas a brazos cerrados, C. Tiempo en zona centro, D. Tiempo en brazos
abiertos, E. Entradas a brazos abiertos. Sobre cada eje: gráficas de densidad de Kernel de
cada eje para cada tratamiento.
ANÁLISIS ESTADÍSTICOS
Las variables comportamentales medidas
fueron sometidas a una prueba de
correlación múltiple, la cual mostró
equivalencia entre las variables de brazos
abiertos y cerrados. Posteriormente,
descartando la variable de brazos cerrados
se realizó un análisis discriminante lineal.
Adicionalmente, se llevó a cabo el test de
Levene y se encontró que no existe
homogeneidad de varianzas entre
tratamientos para ninguna variable
(p>0.05).
RESULTADOS
El análisis discriminante lineal mostró
diferencias significativas en el
comportamiento de los ratones solo para
aquellos que fueron inyectados con extracto
de Passiflora smithii con respecto a los
inyectados con el extracto combinado de P.
smithii y P. vitifolia (V.S) (Figura1). En
este caso, las variables comportamentales
del extracto V.S presentaron mayores
valores en el eje canónico 1.
En cuanto al comportamiento de los
roedores con el extracto Passiflora smithii,
se observaron valores más bajos en ambos
ejes canónicos con respecto a los demás
tratamientos.
Significativamente no existió
homogeneidad de varianza entre
tratamientos para ninguna de las variables
(p>0.05). La varianza del control negativo
fue muy grande y V.S tuvo menor varianza
en todas las variables con respecto a los
demás tratamientos (Figura 1 y 2).
Figura 2. Variables medidas en la prueba del laberinto elevado en cruz en ratones de
laboratorio para medir el efecto ansiolítico de extractos herbales de dos especies de
Passiflora, la combinación de éstas y los respectivos controles: movimiento total,
proporción de tiempo gastado en brazos abiertos y proporción de tiempo gastado en
brazos cerrados, entradas a brazos abiertos y entradas a brazos cerrados.
En la Figura 2 se observa que el control
Passiflorina ® y P. smithii tuvieron
diferencias en el movimiento total, siendo
el último extracto el tratamiento que
registró los valores más inferiores en esta
variable. Finalmente, las demás variables
por si solas no mostraron diferencias
significativas entre tratamientos (Figura 2).
DISCUSIÓN
Este estudio es el primero en evaluar la
actividad ansiolítica de extractos de
Passiflora smithii y Passiflora vitifolia y
por lo tanto el primero en evaluar un efecto
sinérgico entre estas dos especies. Los
resultados obtenidos mostraron diferencias
entre el extracto de P. smithii y el extracto
combinado de las dos especies, siendo éste
último el de mayor actividad ansiolítica. Lo
anterior ocurrió aun cuando P. vitifolia por
sí sola no mostró diferencias con otros
tratamientos, incluido el control negativo.
Algunos estudios han reportado resultados
semejantes entre Passiflora incarnata y
especies de otros géneros. Capasso &
Sorentino (2005) encontraron que al
combinar extracto de P. incarnata con
extracto de Kava kava se potencializaba el
efecto anti-depresivo de Kava, a pesar que
P. incarnata por sí sola no tuvo efectos
significativos. Fiebich et. al (2011)
encontraron resultados similares al mezclar
extractos de Hypericum perforatum con P.
incarnata; en este estudio se encontró que
la actividad sedativa de Hypericum
mejoraba al estar en presencia de
Passiflora.
Otro resultado que cabe destacar fue la
reducción de la varianza en el extracto
combinado V.S en comparación a los otros
extractos y al control. Lo anterior implica
que este extracto produjo una
homogeneización del comportamiento de
los ratones.
Como ya se ha mencionado, P. smithii
mostró una reducción en el movimiento
total, esto puede estar indicando la
existencia de propiedades sedativas de este
extracto. Según Rolland et. Al (1991) una
sustancia ansiolítica presenta actividad
sedativa en altas concentraciones y a bajas
concentraciones se presenta la actividad de
ansiolisis esperada. En base a lo anterior, el
extracto de P. smithii representa un fuerte
ansiolítico; por lo tanto, se podría
hipotetizar que a muy bajas dosis se
presentaría un efecto ansiolítico.
Teniendo en cuenta lo anterior, surge otra
posible explicación a la mayor actividad
ansiolítica del extracto V.S. Puede ser que
sólo P. smithii esté actuando en este
extracto y se obtuvo un mejor resultado
porque en el extracto combinado la
concentración de esta planta disminuyó. En
consecuencia, serían necesarios nuevos
estudios en los cuales se aborde la curva de
acción dependiendo de la concentración de
esta especie.
En el análisis discriminante las variables
con mayor peso fueron el movimiento total
y el número de entradas a brazos abiertos.
Un incremento en la actividad locomotora
total es considerado un indicador de
ansiolisis (Dalvi & Rogers, 1999), así como
el aumento las entradas a brazos abiertos
(Pellow et. al, 1985). Lo anterior permite
decir que este análisis muestra el efecto
ansiolítico global de los extractos. Además,
los análisis monovariados no permitieron
observar las diferencias que el análisis
multivariado arrojó. Lo anterior permite
proponer un análisis multivariado como una
mejor aproximación a la medición de
actividad ansiolítica de una sustancia.
En conclusión, se obtuvo una mayor
actividad ansiolítica del extracto de P.
smithii cuando a éste se le agregó extracto
de P. Vitifolia; esto se puede deber a una
sinergia entre las dos especies o a una
disminución de la concentración en el
extracto de P. smithii. Finalmente, ésta
última especie puede ser un fuerte
ansiolítico a muy bajas concentraciones y
en dosis mayores producir un efecto
sedativo.
LITERATURA CITADA
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