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Escuela de Tecnología Médica Universidad Santo tomas Viña del Mar
GUIA DE LABORATORIO HEMATOLOGÍA CLÍNICA 2014
Material recopilado y revisado por: T.M. Paulina Lara S
2
I N D I C E
Estudios de correlación…………………………………………………......03
Mielograma según Wintrobe…………………………………………….….03
Precursores eritroides…………………………………………………….....05
Precursores granulocitos…………………………………………………...06
Precursores monociticos……………………………………………............06
Precursores linfociticos…………………………………………………......07
Precursores megacariocitos y plaquetarios…………………………… ...07
Ferremia………………………………………………………………………08
Tinción de Perls……………………………………………………………...08
Clasificación de anemia……………………………………………… ….. 09
Respuesta medular………………………………………………………… 10
Estudio de laboratorio anemias microcíticas……………………………. 11
Macrocitosis y megaloblastosi, deficiencia de Vit B12 y folatos………12
Diagnóstico de las anemias megaloblásticas…………………………….13
Causas de anemia megalobalastica………………………………………13
Anemias hemolíticas: Extracorpusculares………………………………..14
Intracorpusculares………………………………...15
Hemoglobina fetal………………………………………………………..….15
Resistencia globular osmótica……………………………………………..16
Leucocitos……………………………………………………………………18
Alteración benignas de serie blanca……………………………………....20
Leucemias crónicas…………………………………………………………22
Leucemias agudas…………………………………………………………..24
Clasificación FAB LLA……………………………………………………... 24
Clasificación inmunofenotipo LLA………………………………………... 25
Clasificacion LMA FAB……………………………………………………..26
Citoquímica………………………………………………………………......27
Inmunofenotipo……………………………………………………………...28
Referencias bibliográficas………………………………………………….29
3
ESTUDIO DE CORRELACIÓN: Recuento de glóbulos rojos x 3 = Hb (g/dl)
Hemoglobina (g/dl) x 3 = Hto (%)
Recuento de glóbulos rojos x 9 = Hto (%)
1. Recuento de glóbulos blancos
Estimación al frontis (lente 40x)
N° de células Estimación
2 – 4 4 – 7 x 10³ células / mm³
4 – 6 7 - 10x10³ células / mm³
6 – 10 10 – 13x10³ céls / mm³
10 – 20 13 – 18x10³ céls / mm³
2. Recuento de plaquetas
Estimación al frotis (lente inmersión 100x)
Número de plaquetas en 10 campos observados por 2.000 = Recuento de
plaquetas / mm³.
MELOGRAMA SEGÚN WINTROBE
CELULARIDAD Aumentada, disminuida, normal
MEGACARIOCITOS Aumentados, ausentes, disminuidos o normales.
Inactivos o funcionalmente activos
SERIE ERITROIDE Rango X
Pro eritroblasto Basófilo 1 – 8 4
Eritroblasto Basófilo 1 – 4 2
Eritroblasto Policromático 5 – 15 10
Eritroblasto Ortocromático 3 – 12 6
TOTALO SERIE ERITROIDE 25%
SERIE MIELOIDE
Mieloblasto
Promielocito
Mielocito Neutrófilo
Juvenil Neutrófilo
Baciliforme Neutrófilo
Segmentado Neutrófilo
Mielocito Eosinófilo
Juvenil Eosinófilo
Baciliforme Eosinófilo
0.3 – 5
1 – 8
5 – 19
10 – 20
10 – 25
7 – 30
0.5 – 3
0.5 – 2
0.5 – 2
2
5
12
15
18
20
1.5
2
2
4
Segmento Eosinófilo
Basófilo
Linfocitos
Monocitos
Cél. Plasmáticas
Cel. Reticulares
Megacariocitos
0.5 – 4
0.5 – 2
3 – 17
0.5 – 5
0 – 2
0.5 – 2
0 – 1.5
2
2
10
3
1
1
0.5
TOTAL SERIE MIELOIDE 75%
COMENTARIO
Relación Mieloide / Eritroide 3 / 1
Tipo de maduración Normoblástica o Megaloblástica
CONCLUSIÓN:
En el adulto, la hematopoyesis tiene lugar en la médula ósea roja localizada en los
huesos planos del esqueletos (cráneo, costillas, esternón, vértebras y pelvis) y en
algunas epífisis de los hueso largos. Previamente, en la vida fetal, los órganos
hematopoyéticos han ido el saco vitelino, el hígado y el brazo.
Las células hematopoyéticas se distribuyen en la médula ósea (M.O.) en dos
principales comportamientos morfológicos - funcionales bien diferenciados:
a. Comportamiento de célula madre o de división.
b. Comportamiento de maduración y diferenciación celular
a. Compartimiento de
células madres: Desde el punto de vista morfológico las células de este
comportamiento no son identificables, correspondiendo en todo caso a
células similares a linfocitos. La característica funcional más importante de
estas células en su capacidad de dividirse y de auto perpetuarse (mantener
su propio número), para finalmente en respuesta a un delicado equilibrio
entre factores simuladores e inhibidores dar lugar a las primeras células
reconocibles de cada serie, que se consideran ya en el comportamiento de
maduración y diferenciación.
NOMENCLATURA
CFC – ML o CFU – ML: (pluripotencial)
Célula madre pluripotencial mieloide - linfoide
CFC – GEMM: (multipotencial) Célula formada de colonias granulocíticas, eritroides, monocíticas y megacariociticas
CFC – GM: (bipotencial) Célula formada de colonias o agregados gránulos – monocíticos (comprometida)
CFC – E: (unipotencial)
Célula madre compromedita eritroide en tres fracciones (primitiva y más madura).
CFC – B*CFC – EO: (unipotenciales)
Células madres comprometidas para basófilos, megacariocitos y eosinófilos.
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CFC – G: (unipotenciales)
Célula madre comprometida para granulocitos neutrófilos.
CFC – M:
Célula madre comprometida para monocitos y macrófagos.
b. Comportamiento de maduración y diferenciación: A partir de las células
madres comprometidas o unipotenciales se producen las células precursoras
morfológicamente reconocibles de cada línea.
Precursores Eritroides:
Proeritroblasto
Eritroblastos basófilo
Eritroblasto policromático
Eritroblasto ortocromático
Reticulocito o policromtófilo
Precursores Granulocitos:
Mieloblasto
Promielocito
Mielocito
Metalielocito o juvenil*
Baciloforme*
Segmentado*
*Neutrófilos, Basófilos, Eosinófilos
Precursores Monocíticos:
Monoblasto
Promonocito
Monocitos
Precursores de los Linfocitos:
Linfoblasto
Prolinfocitos
Linfocitos
Precursores Plaquetarios:
Megacarioblasto
Promegacariocito
Megacariocito
Plaquetas
A partir, de las células madres comprometidas o unipotenciales se producen las
células morfológicas reconocibles de cada línea.
PRECURSORES ERITROIDES: Los hechos que caracterizan la formación de los
eritrocitos son básicamente dos: Pérdida de basofilia, la hemoglobinización
progresiva y la reducción en el tamaño nuclear hasta su picnosis y expulsión final,
para dar origen al eritrocito normal. Se distinguen cinco estados:
Proeritroblasto: tamaño celular 20-25 u de diámetro, citoplasma escaso y
basofilia intensa, núcleo de cromatina laxa, algo gruesa, que por lo común
aparece con aspecto punteado, debido a la condensación de la cromatina.
Suele presentar dos o más nucléolos.
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Eritroblasto basófilo: tamaño celular 16-18 u de diámetro con núcleo algo
menor y con basofilia intensa en citoplasma, generalmente no se observa el
nucléolo.
Eritroblasto policromático: tamaño celular 8-12 u de diámetro. Posee ya
cierta cantidad de hemoglobina, lo que motiva una coloración intermedia
entre la basofilia de los precursores más jóvenes y la coloración
hemoglobínica propia de las células maduras. La cromatina es más
condensada o maciza.
Eritroblasto ortocromático: tamaño celular 7-10 u de diámetro, como
indica su nombre, la coloración citoplasmática es similar a la de la célula. El
núcleo es ya muy picnótico.
Reticulocito o Policromatófilo: etapa anucleada, aún persisten restos de
basofilia citoplasmática, se llama reticulocitos, por el aspecto reticulado que
muestra con las coloraciones supravitales, debido a la presencia de restos
de organelos. De mayor volumen que los hematíes adultos. Presentes en
sangre periférica entre 0.5 a 2%.
PRECURSORES GRANULOCÍTICOS: Los hechos evolutivos de estas células
son reducción de tamaño y segmentación nuclear, reemplazo de los gránulos
azurófilos por gránulos específicos. La secuencia es la siguiente:
Mieloblasto: tamaño 14 – 18 u de diámetro con alta relación núcleo –
citoplasma. Cromatina laxa, posee dos a tres nucléolos, citoplasma basófilo
sin gránulos.
Promielocito: tamaño 18 – 24 u de diámetro, con abundante granulación
primaria o azurófila que también cubre el núcleo. Este a veces levemente
indentado con nucléolo.
Mielocito: tamaño 15 – 18 u de diámetro, núcleo menor, redondeado,
aparece por primera vez la granulación específica o secundaria a partir de la
cual se diferencian en neutrófilos, eosinófilos o basófilos. No se observa el
nucléolo.
Metamielocito o juvenil: tamaño 10 – 15 u de diámetro, el núcleo inicia el
proceso de segmentación mostrándose hendido o arriñonado. Citoplasma con
gránulos específicos.
Baciliforme: el núcleo adopta la forma de bastón o cinta ocupada escaso
volumen respecto del citoplasma. Es la primera célula que en condiciones
normales se encuentra en sangre periférica. (1 a 5%).
Segmentado: el núcleo presente la típica segmentación de 2 a 5 lóbulos (2
para los eosinófilos) y el citoplasma la característica granulación específica o
secundaria (finas de color lila para los nueutrófilos, más grande, gruesas,
redondas y de color naranja o pardo para los eosinófilos y gruesos irregulares
y de color azul oscuro para los basófilos.)
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PRECURSORES MONOCÍTICOS:
Constituido por los monoblasto y promonocito.
Monoblastos: 18 – 25 u de diámetro, (> que el mieloblasto) núcleo grande con
nucléolo y el núcleo aparece plegado o mellado.
Promonocito: 15 – 20 u de diámetro, aparecen algunas granulaciones finas
azurófilas, citoplasma azul grisáceo. Núcleo adquiere forma arriñonada con
cromatina laxa.
Monocito: 18 – 22 u de diámetro la forma de la célula es irregular, cromatina laxa y
reticulada, el citoplasma abundante, color gris pizarra opaco, algunos presentan
granulaciones azurófilas, finas y abundantes.
PRECURSORES DE LINFOCITOS:
La célula más inmadura es el linfoblasto. El núcleo ocupa casi toda la célula,
contiene 1 ó 2 nucléolos. El citoplasma es azul profundo y no tiene gránulos.
Resulta difícil de distinguir de los mieloblastos.
El prolinfocitos (tamaño 15 – 18 u de diámetro) continúa con el citoplasma azul,
núcleo redondo, sin nucléolo visible, cromatina más condensada. Tamaño más
pequeño que su antecesor.
El linfocito: es el más pequeño de los mononucleares de acuerdo a la cantidad de
citoplasma éstos pueden ser pequeños, medianos y grandes. El núcleo es
redondo u ovalado, levemente indentado, de cromatina compacta y se tiñe
intensamente. En el citoplasma de esta célula pueden contener granulaciones
azurófilas, gruesas y escasas.
PRECURSORES MEGACARIOCÍTICOS Y PLAQUETARIOS:
Megacarioblastos: tamaño 50 u de diámetro, citoplasma basófilo, núcleo redondo
con varios nucléolos, cromatina laxa.
Promegacariocitos: 50 a 80 u de diámetro, citoplasma acidofilo y un núcleo
gigante esbozando globulaciones.
Por último, el megacariocito formador de plaquetas es una célula de 80 – 100 u
de diámetro (+grande en M.O). El núcleo es poliploide y lobulado.
Plaquetas se forman por fraccionamiento del citoplasma del megacariocito
8
FERREMIA
Principio: Debido a que el Fierro circula en el plasma unido en su totalidad a la
transferrina (TF-Fe+++) puede ser cuantificado a partir de un extracto
desproteinizado del mismo. Añadiendo una sustancia precipitante y reductora se
produce la liberación del hierro de la transferrina y su reducción a Fe++, al cual se
le une posteriormente un derivado de la fenantrolina o compuesto cromógeno y
con ello se produce un cambio de color.
TF-Fe+++ Precipitación Fe++ +TF CC+C
Reducción +C
C= Cromógeno
CC= Compuesto coloreado
La densidad óptica o absorbancia (A) del compuesto coloreado es analizada en
fotocolorímetro (filtro verde) o en espectrofotómetro a 535 nm.
Revisar inserto de Ferremia Y TIBC
TINCION DE PERLS, HEMOSIDERINA
FUNDAMENTO
Se basa en la producción de ferrocianuro férrico (azul de Prusia) cuando los iones
(Fe+++) férricos, reaccionan con ferrocianuro en solución ácida.
Los eritroblastos con hemosiderina se denominan sideroblastos
REACTIVOS
1. Ferrocianuro de potasio al 2%........................................ 1 vol.
Ácido clorhídrico exento de Fe al 2%.............................. 1 vol.
2. Solución de safranina al 0.5% en agua bicarbonatada a pH 7.5- 8.0
DESARROLLO
1. Fijación: vapores de formol durante 10- 15 minutos o etanol o metanol absoluto
3 minutos.
2. Lavado por inmersión con agua destilada dos o tres veces.
3. Inmersión en el reactivo ácido de ferrocianuro ( o recubrimiento en gradilla)
durante 30 minutos.
4. Lavar con agua destilada alcalinizada levemente con carbonato o bicarbonato
de sodio (pH 7.5- 8.0).
5. Controlar al microscopio con cubreobjetos interpuesto.
6. Si es necesario hacer reaccionar otros 30 minutos.
7. Lavar los extendidos con agua bicarbonatada.
8. Escurrir y sin lavar agregar solución colorante de safranina. Dejar de 5 a 10
minutos.
Es importante mantener la alcalinidad del medio porque de lo contrario se disuelve
el precipitado de azul de Prusia. Secar en posición vertical y observar con
9
inmersión directamente sobre el preparado. Resiste la conservación de manera
indefinida.
Puede lavarse con xilol para quitar aceite.
RESULTADOS Hierro no hemínico azul brillante. En estado normal es pequeña la cantidad de Fe no hemínico
UTILIDAD:
Estudio del Fe medular para conocer las reservas de Fierro
Valorar el Fe no hemínico del citoplasma de los eritroblastos.
Determinar el número de precipitados de hemosiderina (sideroblastos)
Se informa en grados:
Grado 0: Ausente Grado I: Disminuido
Grado II: Normal Grado III: Aumentado
Ferropenia: 0-I
Sobrecarga: II-III
CLASIFICACION DE LAS ANEMIAS
Anemia significa la disminución del peso absoluto del eritrón periférico, constituido
por la masa eritrocitaria circulante. Así pues, anemia, como signo biológico es la
disminución de la hemoglobina de la sangre. En sentido fisiológico clínico, anemia
es la disminución de la capacidad de transporte de oxígeno por el eritón periférico,
lo que genera signos y síntomas derivados fundamentalmente de la hipoxia.
CLASIFICACIÓN:
Premedulares: La médula ósea como órgano hematopoyético está sano, le falta
aporte para una normal hematopoyesis.
Déficit de fierro glóbulos rojos tienen un VCM bajo < 80 fL y una CHCM
<32%.
Déficit de ácido fólico o de vitamina B 12: glóbulos rojos tienen un VCM > 100 fL y
una CHCM normal.
Déficit de vitamina B6 alteración en la síntesis, del grupo Hem de la
hemoglobina: CHCM <32% VCM dentro de valores normales alto.
Este grupo de anemias premedulares se caracteriza por:
Tener médula ósea sana
Tener alteraciones morfológicas
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Ser arregenerativas sin tratamiento
Buena respuesta al tratamiento
Medulares: Médula ósea dañada como órgano formador de células:
Anemias aplásticas daño al Stem cell
Aplasia pura de serie roja
Metástasis
Fibrosis medular
Este grupo de anemias medulares se caracteriza por:
Tener la médula ósea dañada o infiltrada, ya sea por células propias o extrañas a
la médula.
Ser los glóbulos rojos normocíticos – normocrómicos salvo la fibrosis medular.
Ser arregenerativas.
Ser refractarias al tratamiento
Postmedulares:
Por pérdidas: Hemorragias agudas
Mayor destrucción: (anemias hemolíticas)
Intracorpúsculares
Extracorpúsculares
Intracorpúsculares: Alteraciones de membrana
Alteración de las enzimas
Alteración de hemoglobina
Extracorpúsculares: Inmunológicas
No inmunológicas
Este grupo de anemias se caracteriza por tener:
Médula ósea capaz de aumentar su producción de 7 a 8 veces.
Ser regenerativa
Glóbulos rojos con un VCM> 95 Fl si los reticulocitos están muy aumentados.
Si es por hemólisis intracorpúscular por alteración de membrana encontramos:
Microesferocitos
Ovalocitos
Si es por destrucción mecánica en CID, o valvuloplastía
Esquistocitos
Poiquilocitos
Acantocitos
RESPUESTA MEDULAR
La respuesta medular se expresa indirectamente por el cálculo del Valor absoluto
de reticulocitos o también calculando el índice reticulocitario.
Valor absoluto: reticulocitos % x millones eritrocitos
Médula ósea regenerativa => 120.000 ret. /mm³
Médula ósea arregenerativa = 120.000 ret. /mm³
Índice Reticulocitario (I.R.)
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CORRECCIÓN SEGÚN GRADO DE ANEMIA
Hto. PACIENTE
I.R. RETICULOCITS % X
Hto. IDEAL (45%)
CORRECCIÓN SEGÚN DÍAS DE MADURACIÓN
Hto. PACIENTE
I.R. RETICULOCITOS % X
Hto. IDEAL (45%)
2
Recuento Absoluto de Reticulocitos (R.A.R)
Ejemplo:
Hematocrito = 22%
Eritrocitos = 2.200.000 / mm³
Ret. = 4%
R.A.R = 88.000/mm³
Índice reticulocitario (I.R) o Índice de Producción Reticulocitaria (I.P.R)
Ejemplo:
Mujer Hto. =25%
Ret. =16%
I.R. o I.P.R = 25 x 16
45
2
I.R. o I.P.R. = 5
ESTUDIO DE LABORATORIO DE LAS ANEMIAS HIPOCROMAS:
Basado en:
a) Morfología: VCM CHCM
b) Fierro circulante: Ferremia Transferrina Saturación Deposito: Ferritina (plasma) Hemosiderina (M.O) Hipocromías: Disminución de Fe Anemia secundaria a inflamación, o inflamación crónica. Talasemia-anemia sideroblastica. Distribución del fierro:
a) Transporte: grupo Hem de la hemoglobina >%
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b) Almacenamiento: Mioglobina. c) Deposito: Hemosiderina. d) Ferritina
Desarrollo de la anemia ferropriva: Dieta pobre: 1° Disminuyen los depósitos. 2° Circulante 3°Morfología Con tratamiento primero se corrige:
a) Morfología b) Circulante c) Deposito
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MACROCITOSIS Y MEGALOBLASTOSIS. DEFICIENCIA DE Vit B12 Y
FOLATOS
Entendemos por macrocitosis, el aumento patológico del volumen eritrocitario que
se objetiva por el volumen corpuscular medio (VCM) superior a 100 fL.
El 95% de los macrocitos corresponden a megablastos (VCM > 110 fL) y se
traducen en un trastorno de la síntesis de ADN en las células hematopoyéticas
con alteraciones madurativas del ciclo nuclear y de las mitosis eritroblásticas, sin
acortamiento del período madurativo citoplasmático.
El 5% restante de anemias macrocíticas se deben a trastornos diversos como por
ejemplo de una aceleración de la eritropoyesis, con acortamiento del tiempo
madurativo y reducción del número de mitosis, por demandas periféricas de
recuperación o aumento del eritrón periférico (macrocitosis hiperregenerativa)
(VCM habitual es de 100 – 110 fL).
El proceso fundamental e indispensable de la división celular es la síntesis de
nuevas moléculas de ADN, y para ello es necesaria la presencia de una serie de
sustratos, entre los que se encuentra la cobalamina (vitamina B12) y el ácido fólico
y sus derivados metabólicos.
La sensibilidad e intensidad de la lesión que estas deficiencias ocasionan están en
relación con la velocidad de división celular, son más sensibles y por ende más
lesionados aquellos tejidos con alto índice mitótico especialmente líneas celulares
en división de la M.O células epiteliales de los tractos gastrointestinales,
respiratorios y urogenitales.
Acción biológica de la vit B12
Participa como metil cobalamina en el metabolismo del folato, desmetilando el 5N-
metil tetrahidrófilo (forma circulante del ácido fólico) y lo transforma en
tetrahidrofolato (forma activa intracelular).
Degradación de ácidos grasos de cadena impar. Propionil C. A. succinil Co. A.
Acción biológica de ácido fólico
Metilación de la homocisteína a metionina. Proceso acoplado con la
transformación del 5N-metil tetrahidrofólico en tetrahidrofólico siendo necesaria la
metilcobalamina o vitamina B12.
Síntesis del timidilato a partir de desoxiuridilato. Este proceso es esencial para la
síntesis de ADN.
Transformación del ácido formimino glutámico en ácido glutámico
Aspectos nutricionales y metabólicos de la Vit B12 y ácido fólico
Vit B12 Ácido Fólico
Lugar de absorción Ilión terminal Duodeno o yeyuno
Mecanismo absorción F. Intrínseco / proteína R Conversión a metil tetrahidrofólico
Requerimientos diarios 2 ug 100 ug
Reservas corporales 2000 a 4000 ug 10.000 a 15.000 ug
Fuentes alimentarias Origen animal Todo vegetal, fresco y levaduras
Efecto del calor Estable Lábil
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DIAGNÓSTICO DE LAS ANEMIAS MEGALOBLÁSTICAS:
Médula ósea: hiperplasia celular especialmente marcada de la serie eritroide
cuyos elementos aparecen francamente aumentados de tamaño (megaloblastos).
Presentan asincronía madurativa núcleo – citoplasmática que es muy llamativa en
los megaloblastos poli y ortocromáticos, los que además pueden presentar uno o
más corpúsculos de Howell-Jolly, punteado basófilo grosero o anillos de Cabot.
Los elementos de la serie ganulocítica también aparecen aumentados de tamaño
y con cierto asincronismo de maduración en tanto que los megacariocitos
impresionan por la hipersegmentación nuclear. En medio de las células
hematopoyéticas frecuentemente se encuentran macrófagos cargados de restos
celulares en diverso estado de digestión. Esta fagia de eritrocitos, megaloblastos,
granulocitos y plaquetas es signo inequívoco de hematopoyesis ineficaz.
Hemograma: La anemia es macrocítica (V.C.M. 110 – 140 fL) y normocroma. El
porcentaje de reticulocitos puede estar algo elevado pero el índice reticulocitario
es menor de 1. Hay una franca anisocitosis sobre todo cuando la anemia es
severa. Los cambios observados en los neutrófilos son más precoces. Aparece
algo aumentado de tamaño y con clara tendencia a la hipersegmentación nuclear.
Estos son los pleocariocitos, y son los últimos en desaparecer con el tratamiento.
Hay además leucopenia y trombocitopenia.
Como consecuencia de la eritropoyesis ineficaz el Fe sérico ésta aumentado y la
capacidad total de fijación de Fe está norma o disminuida. El Fe medular y en
general el Fe de depósito está aumentado. La bilirrubina precoz aumentada, la
haptoglobina disminuida y la deshidrogenasa láctica aumentada.
Las anemias por déficit de vit B12 (ácidos grasos anómalos serían incorporados
en los lípidos de membrana de las células neuronales provocando trastornos en la
conducción nerviosa e interviniendo en el proceso de desmielinización).
CAUSAS DE ANEMIAS MEGALOBLÁSTICAS:
I.Deficiencias de Vit B12:
1. Ingreso inadecuado - Vegetarianos estrictos
2. Absorción defectuosa:
- Anemia perniciosa
Déficit de F. Intrínseco (FI)- Gastrectomía parcial o total
- Déficit congénito FI
- Asas ciega
Malabsorción en intestino delgado – Síndrome Malabsorción
Necesidades excesivas - Infestación por parásitos
II.Deficiencias de ácido fólico:
- Aporte insuficiente - Alcoholismo
-Hemodiálisis
- Absorción defectuosa -Síndrome de. Malabsorción
- Síndrome de asa ciega
- Utilización inadecuada -Déficit de ácido ascórbico
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-Terapia con antagonistas
-Terapia anti convulsionante
- Requerimientos excesivos -Embarazo, Lactancia
-Crecimiento
-Hemólisis
Causas de anemias macrocíticas no megaloblásticas
- Alcoholismo crónico
- Enfermedad hepática crónica
- Reticulocitosis importante
- Insuficiencia respiratoria con hipoxia
- Recién nacidos
ANEMÍAS HEMOLÍTICAS Intracorpúsculares
Tipo Cuadro Clínico Frotis Exámenes complementarias
Microesferocítica congénita
Ant. Familiares. Crisis hemolíticas Esplenomegalia
Microesferocitosis Predominante
Disminución Resistencia globular. Autohemólisis tipo I
Ovalocitosis Hereditaria
Ant. Familiares Esplenomegalia
Ovalocitosis Predominante
Disminución resistente globular.
Enzimopatias G.G.P.D.
Ligado al sexo. Crisis hemolítica después de ingestión de drogas, habas
Cuerpos de Heinz espontáneos y provocados. Autohemólisis tipo I.
Piruvato kinasa Esquistocitos Autohemólisis tipo II.
Hemoglobina Inestable
Crisis hemolíticas después de drogas, orinas oscuras.
Precipitación de Hb Por calor.
Ant. Hereditarios y étnicos. Esplenomegalia Alts. Óseas
Dianocitos Hipocromía Drepanocitos
Electroforesis Hb
Hemoglobinuria Paroxística
Hemoglubinuria en la mañanas
Test de Ham Test de la sucrosa Hemoglobinuria Hemosiderinuria
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ANEMÍAS HEMOLÍTICAS Extra corpusculares
Tipo Cuadro Clínico Frotis Exámenes complementarias
Anemias e isoinmunización Rh ABO
Ictericia Incompatibilidad feto materna
Microesferocitos (ABO) Eritroblastosis (Rh)
Bilirrubina indirecta Coombs (Rh) Hemoglobinuria
Anemias Autoinmunes Idiopáticas
Microesferocitos Coombs
Anemias Autoinmunes Secundarias
LEG: colágeno Drogas, Neumonía atípica
Microesferocitos Crioaglutinina Hemolisinas
Anemias Hemolíticas Microangiopáticas
Síndrome urémico hemolítico. Prótesis cardíacas. Carcinomatosis hemoglobinuria de la marcha CID
Esquistocitos Trombocitopenias
Signos patológicos de base
Anemias hemolíticas Por tóxicos
Venenos animales (IRA) Drogas
Microesferocitos Esquistocitos
Hemoglobinuria Cuerpos de Heinz
Por agentes físicos Quemaduras Esquistocitos
LEG: Lupus eritematoso generalizado IRA: Insuficiencia renal aguda
CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA FETAL
Normalmente, el ser humano posee varios tipos de hemoglobina (Hb) durante su
desarrollo. En la actualidad, se conoce muy bien la estructura molecular y las
funciones de la hemoglobina. Dentro de ellas, la hemoglobina fetal (Hb F) es la
predominante en el período fetal. El orden en que aparece y desaparece esta
hemoglobina en el ser humano constituye uno de los ejemplos conocidos de
laregulación de la síntesis proteica. La persistencia de altos niveles de síntesis de
hemoglobina fetal en la época postnatal en prematuros, es una clara indicación de
que la transición sintética de Hb F a Hb A no está influenciada por la época del
nacimiento. Por tal motivo, el grado de la transición sintética de Hb F a Hb A es
especie-específica, lo cual quiere decir, al menos en los humanos, que el desvío
sintético de una a otra está relacionado el grado de maduración biológica y por
tanto no se afecta por una exposición precoz a su vida extrauterina.
La hemoglobina fetal es un tetrámero estructural de tipo alfa2 gama2, con
cualidades muy particulares. Se destaca su alta afinidad por el oxígeno dada por
su estructura y su baja interacción con el 2,3 difosfoglicerato , característica que le
confiere su importante papel funcional en la vida intrauterina, en donde existe una
baja tensión de oxígeno en el ambiente placentario. La observación en 1968 de
una heterogeneidad de las cadenas gama, demostró que en la posición 136 de las
mismas puede estar presente un residuo de glicina o de alanina. La terminología
G ℘ y A ℘ se emplea cuando una glicina o alanina, respectivamente, ocupan
dicha posición, variando la tasa de cada una de ellas según la edad o el desorden
hereditario en que la Hemoglobina fetal se ve comprometida. Posteriormente, en
1976, se observó un nuevo tipo de cadenas gama con un residuo de treonina en
lugar de isoleucina en posición 75.
17
Por analogía con la anterior nomenclatura, estas globinas se denominan T ℘ e
I℘.Por otra parte, la Hemoglobina fetal es la única hemoglobina primaria en donde
se presenta isoleucina en sus cadenas gama.
En la actualidad, existen varios métodos para la cuantificación de la hemoglobina
fetal, basados la mayoría en la característica relevante de esta hemoglobina de
ser resistente a la desnaturalización por álcalis. Otros procedimientos son
cromatográficos, por inmunodifusión radial (IDR) y radioinmunoensayo . También
existen técnicas citoquímicas, que permiten evaluar la presencia y distribución de
esta hemoglobina en los eritrocitos. Una de ellas es de tipo eminentemente
fisicoquímico y otra lo es de carácter inmunocitológico .Ambas se utilizan tanto
para la evaluación de hemorragias materno-fetales , como para establecer
fenotipos en diversos trastornos hemoglobinopáticos, tales como síndromes
talasémicos y los de la persistencia hereditaria de hemoglobina fetal.
Revisar inserto de hemoglobina fetal por radioinmunoensayo (IRD).
RESISTENCIA GLOBULAR OSMOTICA Metodo: dacie Muestra: sangre heparinizada (dos tubos, con 2 ml cada uno) Filtro: verde (540 nm) Materiales: 26 Tubos de ensayo limpios y secos Pipetas de 10 ml Pipetas de 1 ml (o micropipetas de los volúmenes necesarios) Reactivos: Agua destilada
Solución Stock de NaCl al 10% (pH 7.4)
Na 2 HPO 4 : 13,65 gr
NaH2 PO4 : 2, 43 gr
Na Cl : 90 gr
Agua destilada csp 1000 ml
Solución de trabajo de NaCl (1%):
Solución Stock: 10
Agua destilada csp l00 ml
TECNICA:
1.- A partir de la solución estándar, prepare las siguientes soluciones:
TUBO Concentración
de NaCl (%)
Solución de
trabajo (ml)
Agua
destilada
(ml)
1 0.90 9.0 1.0
2 0.85 8..0 1.5
3 0.75 7.5 2.5
4 0.65 6.5 3.5
5 0.60 6.0 4.0
6 0.55 5.5 4.5
7 0.50 5.0 5.0
8 0.45 4.5 5.5
18
9 0.40 4.0 6.0
10 0.35 3.5 6.5
11 0.30 3.0 7.0
12 0.20 2.0 8.0
13 0.10 1.0 9.0
2.- Tape con parafilm y mezcle por inversión varias veces.
3.- Agregue a cada tubo 0.1 ml de sangre (previamente mezclada).
4.- Mezcle suavemente, tape y deje los tubos a temperatura ambiente por 30
minutos
5.- Mezcle, nuevamente en forma suave los tubos y centrifugue por 5 minutos a
2000 rpm.
6.- Lea la absorbancia del sobrenadante de los tubos, tomando como blanco el
tubo de 0.85% o 0.90% de NaCl, y el tubo de 0.10 % de NaCl como 100% de
hemólisis.
7.- Repita la prueba luego de incubar la muestra a 37 ºC durante 24 horas.
8.- Calcule el porcentaje de hemólisis según la absorbancia del 100 % de lisis,
mediante la siguiente fórmula:
% de hemólisis = Abs. Tubo problema X 100
Abs. Tubo 12 o 13
9.- Dibuje la curva de fragilidad con los valores normales a las 0 y 24 horas:
0 horas:
% de NaCl % de
hemolisis
0.30 97 - 100
0.35 90 - 99
0.40 50 - 90
0.45 5 - 50
0.50 0 - 5
0.55 0%
24 horas:
% NaCl % de
hemólisis
0.20 100
0.30 80 - 100
0.35 72 - 100
0.40 65 - 100
0.45 54 - 96
0.50 36 - 88
0.55 5 - 70
19
RESULTADOS:
Interpole los resultados de los porcentajes de hemólisis a las 0 y 24 horas en las
curvas correspondientes.
Indique. 1º: Lisis inicial o resistencia mínima
2º: Lisis final o resistencia máxima.
VALORES DE REFERENCIA:
1.- Resistencia Globular osmótica a las 0 horas:
Hemólisis inicial: 0.5 - 0.55 % de NaCl
Hemólisis final : 0.3 - 0.40 % de NaCl
2.- Resistencia Globular osmótica a las 24 horas:
Hemólisis inicial: 0.6 - 0.75 % de NaCl
Hemólisis final : 0.2 - 0,40 % de NaCl
0.60 0 - 40
0.65 0 - 19
0.70 0 - 9
0.75 0 - 2
0.85 0
20
LEUCOCITOS
Leucocitos: Constituyen un conjunto de células con función diversa, aunque
relacionada con la defensa del organismo frente a sustancias o agentes
patógenas. (Fagocitosis e inmunidad).
Leucocitos: Granulocitos
Agranulocitos
Granulocitos:
a) Se forman, maduran, almacenan y liberan en la medula osea
b) Sólo permanecen brevemente en la sangre periférica
c) Pasan a los tejidos y no vuelven a la sangre
Los granulocitos de cada compartimiento pueden pasar de uno a otro libremente.
Cinéticamente se comportan como un caudal o reserva única que ala ser
estimulado (adrenalina, ejercicio, susto), se produce un paso de células del
marginal al circulante.
Leucocitosis transitoria.
Producción transitoria.
Producción y almacenamiento en la M.O:
a) Proliferante: Mieloblasto, promielocito, mielocito.
b) No proliferante: Juvenil , baciliforme , segmentado
Reserva: se calcula que entre 25 a 30 Juveniles, Baciliformes y Segmentados
permanecen en M.O Por cada granulocito de la periferia, esto explica la
leucocitosis y desviación izquierda que se produce ala inicio de una apendicitis.
Reserva medular: libera células por 9 a 10 días sin agotarse.
Función: Englobar y eliminar microorganismos.
Agranulocitos:
a) Monocitos.
b) Linfocitos:
Tejido linfoide en el hombre:
-Fuente medular célula inmunopotencial primitiva
- Tejido linfoide central asociado al epitelio intestinal
- Tejido linfoide periferico:ganglios linfáticos y bazo
Existen valores: Absolutos por mm3
Relativos %
Recuento Absoluto de Neutrófilos (RAN)
RAN: Bc. + Seg
51 - 100
x- 4000
x- 2040
<2000 = Neutropenia Absoluta
70 – 100
X - 10.000
X = 7.000
>7.000 Neutrofilia absoluta
21
I. Ejemplos.
Leucocitos = 1.200 mm³
Bs Eos S L M
0 1 20 71 8
20 seg. – 100 Leucocitos
X seg – 1.200 Leucocitos
X= 240 granulocitos
Neutropenia relativa (%) y absoluta
Linfocitos
71 Linfoc – 100
X linfoc - 1200
X = 852 linf.
Linfocitosis sólo relativa (%)
Leucocitos 15.200
Bs Go Bc S L M
0 2 8 32 46 12
Neutrófilo
40 Neutrófilos – 100
X Neutrofilos - 15.200
= 6.080 neutrófilos
Linfocitos
46 Linfocitos – 100
X – 15.200
X = 6992
Neutropenia relativa (%) Linfocitosis absoluta
ALTERACIONES BENIGNAS SERIE BLANCA:
El recuento leucocitario normal oscila entre 5.000 y 10.000 células x mm³
Se habla de:
a) Leucocitos cuando hay valores a 10.000 leucocitos/mm³
b) Leucopenia cuando hay valores inferiores a 4.000 leucocitos/mm³
LEUCOPENIA:
Infecciones:
a) Bacterianas: tifoidea, paratifoidea, brucelosis
b) Virales: gripe, sarampión, rubéola, hepatitis
Drogas:
a) Antimitoticos: agentes alquilantes, antimetabólicos.
22
b) Aminopirinas: antitiroídes, enticonvulsivantes, sulfamidas, antihiataminas,
antibióticos; cursan con agranulocitosis.
Leucopenia con desviación izquierda:
En ella se observa una disminución del número de leucocitos por mm a menos de
5.000, pero con aparición de elementos jóvenes como son los baciliformes y en
ocasiones uno que otro mielocito juvenil, ejemplo gripe, tifoidea y paratifoidea,
sepsis grave, xantoma viral.
LEUCOCITOSIS:
Es el aumento por el número total de leucocitos, aunque tal aumento puede
deberse a preponderancia de cualquiera de los elementos.
Leucocitosis fisiológica:
Es aquella que se produce sin infección asociada u otra lesión patológica
demostrable como consecuencia de un Stress.
Causas:
Ejercicio intenso (30.000xmm³)
Emoción
Inyección de adrenalina
Embarazo – parto.
Leucotosis neutrófila:
a) Infecciones: piógenas, difteria, escarlatina, endocarditis, sepsis, infección
urinaria, salmonelosis.
b) Intoxicaciones:
1. Metabólicas: uremia, acidosis diabética, eclampsia, ataques de gota, como
hepático.
2. Otros como productos químicos, drogas, venenos de insectos.
c) Otros: quemaduras, deshidratación aguda, hemorragia aguda,
postoperatorio, hemólisis violenta, artritis reumatoide.
Eosinofilia moderada:
10 – 40 % eosinófilos y cifras absolutas de 1.000 a 5.000 por mm³.
Causas
a) Infecciones parasitarias:
1. Helmintos: triquinosis, áscaris, quiste hidatíco
2. Ácaros: sarna
3. Otros: amebiasis sistemática, distomatosis
b) Enfermedades alérgicas: asma, urticarias, eczemas, fiebre de heno.
c) Infecciones bacterianas: escarlatina, estreptococias, fiebre reumática.
d) Drogas: penicilinas, ampicilina, cefalosporinas, furadantina,
difenilhidantoína, clorpromacina, etc.
Eosinofilia exagerada
50 – 90 % de eosinófilos con recuento leucocitario entre 30.000 a 100.000 por
mm³.
Causas:
Leucemia Mieloide Crónica a eosinófilos
Larva migrans visceral
Linfocitosis:
23
a) Absoluta:
1. Coqueluche
2. MNI
3. Linfocitos infecciosa aguda
b) Relativa:
1. Infecciones virales: sarampión, rubéola, varicela, parotiditis infecciosa,
hepatitis infecciosa.
2. Infecciones crónicas: TBC, sífilis, brucelosis.
3. Convalecencia.
4. Raquitismo.
5.
Aumento de los plasmazellen
Rubéola, escarlatina, sarampión, varicela, meningitis, linfocitaria benigna, NNI.
Monocitosis
a) Infecciones bacterianas: TBC, EBSA brucelosis
b) Remisión de enfermedades agudas
c) Recuperación de agranulocitosis
d) Intoxicaciones por tetracloroetano
.
Aumento de basófilos:
a) Varicela
b) Colitis ulcerosa
Reacción leucemoide:
Se denomina así a una cifra de leucocitos mayor de 50.000 x mm³ con presencia
de células inmadura.
Causas:
Infecciones piógenas, sepsis
Hemorragias severas
Crisis hemolítica
Colitis ulcerosa
TBC miliar
LEUCEMIAS CRÓNICAS:
Granulociticas
Linfocítica
Plasmocítica
Células peludas
Prolinfocítica
LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA (LMCr):
Enfermedad clonal adquirida del compartimiento hematopoyético de Stem Cell, en
la que el clon celular mutado en la médula ósea aumenta su proliferación 5 a 10
veces más que lo normal.
Ocurre además una granulopoyesis extra medular en hígado y sinusoides de los
ganglios linfáticos.
La L.M.Cr. constituye el 10 – 20% de todas las leucemias, con una mortalidad de
1.5 cada 100.000 habitantes.
Mayor incidencia entre los 40 - 60 años 10% de los casos entre los 5 y 20 años.
24
En el 95% de los casos es posible demostrar una alteración citogenética en el
cariograma de la médula ósea denominada cromosoma Philadelphia (CrPh) se
trata de una translocación recíproca de la porción distal del Cr 22 al brazo largo
del Cr.9. Se forma el gen de fusión BCR/ABL. Con actividad tirosin quinasa. Esta
condición no es heredada, se encuentra en los granulocitos, eritroblastos,
megacariocitos y ocasionalmente en linfocitos B.
Aunque el Cr. Ph es considerado el marcador diagnóstico de la LMCr. no es
exclusivo de ella, ya que se ha detectado su presencia en un 20 % de los adultos y
en una 5% de los niños portadores L.L.A., así como también en el 2% de los
pacientes con L.M.A.
Cuadro Clínico:
Fase crónica
Fase acelerada o de transformación
Fase aguda o crisis blástica
Fase crónica
Se caracteriza por una superproducción de leucocitos. El 20% de los pacientes
son asintomáticos en el momento del diagnóstico.
Fase acelerada
Aumento de Blastos.
Fase aguda:
En el 10% de los pacientes la aparición de la crisis blástica es fulminante en días o
semanas.
LEUCEMIA LINFOIDE CRÓNICA:
La L.L.C. ha sido definida como una anormalidad proliferativa, generalizada
progresiva y autoperpetuante de los tejidos linfoides que afecta particularmente a
los linfocitos pequeños.
Este clon expansivo es bloqueado en un estadio relativamente uniforme de
diferenciación, dando lugar a una gradual y progresiva aglomeración de linfocitos
circulantes, adenopatías, infiltración de la médula ósea y ocasionalmente de otros
órganos.
Es más frecuente en pacientes mayores de 60 años.
Hemograma: Anemia moderada Normocítica. Normocroma(NN), por infiltración
medular.
Leucocitos: Oscila entre 15 x 10/L a 200 x 10/L con 70 a 95% de linfocitos.
Los linfocitos son pequeños de núcleo redondo, cromatina nuclear densa, sin
nucléolos visibles y escaso citoplasma, presencia en el frotis de restos nucleares o
sombras de Gumprecht que son restos de núcleos de linfocitos que se rompen al
realizar el frotis.
La hiperleucocitosis con linfocitosis absoluta, acompañada de neutropenia relativa
y trombocitopenia inmune por anticuerpos antiplaquetarios aparecen en fases
tardías, como también la anemia N.N. puede complicarse en una anemia
hemolítica autoinmune por anticuerpos IgG en el 8% de los casos; tiene un alto
recuento de reticulocitos y un Test de Coombs Directo positivo.
Mielograma: Infiltrado por linfocitos pequeños sobre un 40 a 50 %.
En los caso de anemia hemolítica autoinmune se puede observar hiperplasia con
algunos cambios megablásticos.
25
La trombocitopenia inmune periférica se acompaña con un aumento de
megacariocitos en médula ósea.
TRICOLEUCEMIA – HAIRY CELL LEUDEMIA
Habitualmente presenta esplenomegalia y pancitopenia con células linfoides
atípicas. Estas células velludas presentan prolongación, filamento citoplasmáticos.
Citoplasma es moderadamente abundante y cromatina nuclear homogénea.
PAS
Fosf. Ácidas +++
Fósf. Ácidos tartrato resistente.
LEUCEMIAS AGUDAS
Clasificación F.A.B.:
La más usada corresponde a la clasificación del grupo cooperativa FAB; que
considera tres grupos morfológicos de leucemias linfoblásticas.
L.L.A. L.1:
Infiltración medular por leucoblastos de talla relativamente pequeña, cromatina
variable pero homogénea, dentro de cada caso, nucléolo no visible o poco claro,
contorno nuclear regular y citoplasma escaso, sin granulación ni visualización.
L.L.A.L.2:
Leucoblasto de mayor talla, cromatina variable, pero heterogénea, dentro de un
mismo caso, con nucléolos prominentes, contorno nuclear irregular y citoplasma
relativamente abundante que puede presentar granulación azurófila (peroxidasa
negativa).
L.L.A.3:
Talla celular relativamente grande pero homogéneo, cromatina fina, nucléolos
prominentes, contorno nuclear regular, citoplasma escaso con marcada basofilia y
visualización (célula tipo Bur Kit).
Laboratorio:
Sangre periférica: anemia normocitica, arregenerativa.
Leucocitos: en cantidad variable, con paso de formas inmaduras a la sangre.
Plaquetas: habitualmente disminuidas +++
L.L. Aguda: reacciones citoquímicas, clasificación FAB
L1 L2 L3
Mieloperoxidasas
(Negro Sudán)
- - -
PAS (Glucógeno) -/- -/- -
A Naftil esterasas
(FL Na Sensible)
- - -
L.L. Aguda: Marcadores fenotípicos
SIg E CALLa % incidencia
Nula - - - 10-15
Común - - + 70-85
T - + +/- 12-25
B - - - 2-4
Sig : Inmunoglobulinas de superficie
E : Receptor para hematíes de cordero (rosetas)
26
CALLa: Antígeno común de la leucemia linfoblásticas (suero de conejo inmunizado
con células LLA no B no T)
L.L.A. Anomalías cromosómicas más frecuentes
Común – Nula Anomalía chr 6
t (1;19); t (9;22);t (4;11)
Tipo T Anomalía chr 6
t (1;14)
Tipo B Anomalía chr 6
t (8;14); t (8;22);6 (2;8)
CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA LLA
Clasificación de las leucemias agudas linfoblásticas de línea B
FENOTIPO CD 19 CD 22c CD 10 clg-u slg TdT
B PRECOZ (PRO-B)
+ + - - - +
B COMÚN + + + - - +
PRE-B + + + + - +
B + + +/- - + +/-
Citogenética de las leucemias agudas linfoblásticas de la línea B:
t(9:22)
t(1:19)
t(4:11)
t(12:21)
Nota: en la citogenética el cromosoma Phyladelphia puede ser positivo si la
proteína afectada ES LA 190
Clasificación inmunológica de las leucemias linfoblásticas de línea T
FENOTIPO TDT CD7 CD3c CD2 CD3s CD1 CD4 CD8
PRE T + - + - - - - -
TIMOCITOS:
PRECOZ + + + + - - - -
CORTICAL + + + + - + + +
MEDULAR + + + + + - +/- 0+/-
Citogenética de las leucemias agudas linfoblásticas de línea T
t(11:14)
t(1:14)
t(10:14)
TAL 1 del
Nota: en la citogenética de la lgc el cromosoma Phyladelphia es positivo si la
proteína alterada es la 210.
27
LEUCEMIAS MIELOIDES AGUDAS: CLASIFICACIÓN FAB
Denominación Hallazgos en
médula
Ósea
Identificación Caracteres
Clínicos
M 0 Sin diferenciación
M1
L. Mieloblástica
Sin maduración
>del 90% de los
blastos sin células
maduras.
Bastones de Auer.
Peroxidasas <3%
Esterasas (-)
Ac.Mo.
L. Granuloicíticas++
M2
L. Mieloblástica
Con maduración
30 – 90% blastos.
Cél.
Monoc. <20%
Cel. Madura >10$
Bastones de Auer
Peroxidasas ++Ac.
Mo.
L. Granulocíticas++
M3
L. Promielocítica
Infiltración
Promielocitos
atípicos.
B. Auer Múltiples.
Variente
mirogranular
Peroxidasas+++
Ac. Mo.
L. Granulocíticas++
Cursan C/CID
M4
L.Mielomonocitica
>30%blastos
30-80%
Línea
Granulocítico
>20%Línea.
Monocíticos
SPeriférica >5x10
Monocitos
Peroxidasas++
Esterasas++
Ac.Mo.
L.Granulocítico+
Ac. Mo.
L.Monocítica+
E.IFNa (-)
M5
L. Monoblásticas
>30% blastos
>80% Línea.
Monocitica
Peroxidasas+
Esterasas +++
E. INFa+
Ac.Mo.
L.Monocítica++
Hipertrofia
Gingival
Infiltración piel
Tubulopatía
renal
M6
Eritroleucemia
>de 50 eritrocitos
Anómalos
(características
megaloblásticas)
>30% blastos
mieloides
Peroxidasas+
Ac.Mo.
Leritrob. - -
M7
Leucemia.
Megacarioblásticas
Fibrosis
medular+++
Megacariocitos
Dismórficos
Blastosis
Peroxidasas
Plaquetarias++
Ac.Mo.
L.Megacarioblásticas
++
Ac.Mo. = Anticuerpos monoclonales
L.M.A. Anomalías cromosómicas más frecuentes
M1 t (9;22)
M2 t (8;21)
M3 t (15;17)
M4 t (Con esofinofilia) inv(16)
M5 t (9;11)
28
M6 Variables
M7 Variables
t=translocaciones
CITOQUÍMICA EN LEUCEMIAS AGUDAS
1. Fosfatasa alcalina
La fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las
fosfomonoesterasas; hidroliza monoésteres del ácido fosfórico, actuando a un pH
del 9,1 a 9,6;
La actividad de la FA granulocítica se manifiesta en forma de un precipitado pardo
negruzco localizado en el citoplasma.
No todos los granulocitos presentan el mismo grado de positividad; en función de
este dato se establece un índice de actividad de FAG.
Se realiza un recuento sobre 100 granulocitos asignando a cada uno un grado; y a
cada grado se la asocia un valor: grado 0=0, grado I=1, grado II=2. Se suman los
valores y el número obtenido es el ínice de FAG, que tiene un valor mínimo de 0 y
máximo de 200. El índice normal oscila entre 20 y 40.
Su máximo interés se centra en el estudio de los síndromes mieloproliferativos,
sobre todo para corroborar el diagnóstico de la leucemia mieloide crónica (LMC)
para la que se designan valores muy bajos o nulos. Su determinación es muy útil
para establecer el diagnóstico diferencial entre LMC y reacciones neutrofílicas
secuendarias que cursan con valores elevadísimos.
2. P.A.S. ác Peryódico de Schiff
La reacción de PAS o del ácido periódico de Schiff se basa en la rotura de los
enlaces –C-C- presentes en los carbohidratos por la acción del ácido periódico,
potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el
reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Tiñe el
glucógeno citoplasmático.
Linfoblastos 80% (+) gránulos o bloques de mayor tamaño.
Mieloblastos (-) rara vez positivo débil, granulación fina. Útil (+) en M6
3. Mieloperoxidasa
Mieloperixoidasa oxida la bencidina en presencia de H2 O2.
Mieloblastos (++) 75% gránulos finos o gruesos color amarillo o verde intenso.
Linfoblastos, eritoblastos, megacariocitos (-)
4. Sudan negro
Tiñe los lípidos citoplasmáticos de color negro.
Mieloblastos (++) débil, linfoblastos y eritoblastos (-)
5. Esterasas Hidrolizan los esteres en sus componentes acidos y alcohol.
Se utilizan 4 substratos: naftol – AS-C- cloroacetato, naftol – AS-D- acetato, alfa-
naftil-acetato, alfa-naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una
sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la reacción.
Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una
esterasa que es específica de la granulopoyesis neutrófila. Su aparición es
más tardía que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a ésta en espcecificidad.
Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa
positividad en la serie monocítica que, a diferencia de las restantes células
hematopoyéticas, es fluoruro sensible. Dada su positividad más restrictiva es
preferente usar el substrato alta-naftil acetato o alfa-naftil-butirato para marcar la
serie monocítica y sus precursores, cuya positividad es intensa y se manifiesta en
forma de un precipitado por todo el citoplasma.
6. Fosfatasas ácidas son enzimas hidroliticas del subgrupo de las
fosfomonoesterasas su acción es sobre los esteres del ácido fosfórico a Ph
ácido 4.7 – 5.5.
Linfoblastos (++) especialmente LcT 80% LcB (-) o (-+)
29
(+) Difuso en los gránulos primarios de los granulocitos.
Se forma un pp. Granular de color rojo anaranjado en el citoplasma celular.
Hairy Cells (++) de tipo granular difuso. Son tartrato ácido resistente.
UTILIDAD
1. Las reacciones de esterasas sirven para diferenciar la leucemia monocítica
aguda de la mielomonocítica.
2. La reacción de PAS resulta útil para diferenciar las enfermedades
linfoproliferaticas benignas y malignas; para identificar las células eritroides
anormales de la eritroleucemia; para identificar la célula de Sésary
(Leucemia prolinfocítica T, células con núcleo cerebriforme).
3. El índice de fosfatasa alcalina sirve para discernir las reacciones
leucemoides granulocíticas de la leucemia granulocítica crónica.
4. Diferencian los bastones de Auer de otras inclusiones cristalinas (son
esterasa positivos, LMA).
5. Las reacciones de fosfatas ácida sirven como marcadores para las células
vellosas de la reticuloendoteliosis leucémica.
INMUNOFENOTIPO:
La mayoría de los estudios de marcadores celulares se realizan en suspensiones
de células de médula ósea o sangre periférica. Las células se separan por
gradientes de densidad.
El método más usado es la técnica de inmunofluorecencia directa o indirecta en
Ac. Mo, conjugados con fluorescencia y leídos en un microscopio de fluorescencia
o citómetro de flujo.
30
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Guía de Técnicas de reconocimiento morfológico en Hematología
Facultad de medicina U. Chile
T.M Marianela Cuneo. (2011)
Manual de técnicas de laboratorio en Hematología
Joan l.Vives Corrons. Tercera edición 2006
Guía de laboratorio de hematología, T.M. Mg Sp Eduardo Retamales Castelletto;
T.M. Mg Cs Andrés Aburto Almonacid.
31
32