Date post: | 22-Jan-2016 |
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BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>a‐Historia MikhailSemenovichTsweH(1872‐1919)trabajóenlaseparacióndefragmentos(clorofilaycarotenoides) En1903publicó“Onanewcategoryofadsorp.onphenomenaandtheirapplica.ontobiochemicalanalysis”
En1906reportóhaberseparadoloscons.tuyentesdelashojaspasándolosporunacolumnadecarbonatodecalcio,aluminaysucrosa.
Acuñolapalabra“Cromatography”depalabrasgriegasindicando“color”y“escritura”
Trabajosolvidados
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>a‐Historia “Forprac.calpurposes,chromatographybeganwiththeBri.shbiochemist,A.J.P.Mar.n,intheearly1940s.ApparentlyMar.nhadmadesomenoteswithafountainpenonapapernapkin.Whensomespilledteawetacornerofthenapkin,itspreadacrossthepaper,someofthecoloreddyesintheinkmovedwithitandMar.ndiscoveredpaperchromatography.Healsorediscoveredcolumnchromatography(apparentlyindependently).Theartiss.llprogressing.”
hHp://www.dyerlabs.com/chemistry/chromatography.html
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>a‐Principios Laideaesqueelanalito“interaccione”condiferentessolventesomatricesyqueexistaunaaHracciónoretencióndiferencial
Sielanalito“interacciona”igual,laseparaciónnoesposible
Analy.calChemistry,GaryD.Chris.an,Wiley
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>aesunatécnicadeSeparación1. Con.ene2solventesinmiscibles,se
agregaelanalitoysemezclan.Enequilibrioelanalitosedistribuyeenlafasedondesedisolvióoretuvomejor.
Extracción
2. Pordistribucióndesuscomponentesendosfases,unaquesemueveyotraqueestáestacionaria(.picamenteunacolumna)
hHp://zyklon1985.blogspot.com/2007_06_01_archive.html Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>aesunatécnicadeSeparación1. Con.ene2solventesinmiscibles,se
agregaelanalitoysemezclan.Enequilibrioelanalitosedistribuyeenlafasedondesedisolvióoretuvomejor.
Extracción
hHp://zyklon1985.blogspot.com/2007_06_01_archive.html Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>ade2fases–EjemploDNA
hHp://zyklon1985.blogspot.com/2007_06_01_archive.html
BT2008Diagnós.coMolecular1
2Fases
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)
“MasA,menospuro”
BT2008Diagnós.coMolecular1
2Fases
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)
“MasPuro,menosA”
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>aesunatécnicadeSeparación1. …
2. Pordistribucióndesuscomponentesendosfases,unaquesemueveyotraqueestáestacionaria(.picamenteunacolumna)
Analy.calChemistry,GaryD.Chris.an,Wiley
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>aesunatécnicadeSeparación1. …
2. Pordistribucióndesuscomponentesendosfases,unaquesemueveyotraqueestáestacionaria(.picamenteunacolumna)
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
(2)
(a)(b) (c) (d)
(e)Cromatograma
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>a–TiempodeRetención Tiempoderetención:.empodesdela
inyecciónhastalaeluciónmáxima
Tiemponulo(void.me):Tiempohastaleprimeraelución
Volumenderetención:volumendefasemóbilnecesarioparahacerqueelanalitoeluya
Anchobase(baselinewidth)w:rangode.empoenelquesedetectaelanalito
Volumennulo:Volumendefasehastalaprimeraelución
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>a‐Resolución Elobje.vodecromatogra>aessepararcomponentesdeunamuestra.
Resoluciónesunamedidacuan.ta.vadelgradoocalidaddelaseparaciónentre2picos
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
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Cromatogra>a–FactordeCapacidad
M‐mobile,S‐Sta.onary
CoeficientedeDistribuciónoPar.ción CapacityFactor
FácilmenteMedible
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
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Cromatogra>a–FactordeSelec.vidad FactordeSelec.vidad:Relacióndelosfactoresdecapacidadde2analitos
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
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Cromatogra>a–EficienciadelaColumna SeccionesCromatográficasTeóricas(Theore.calPlates)esunamedidadelaeficienciadelacolumna.
(aprox)
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
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Cromatogra>a‐Resolución
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)
Incrementoeneficienciadelacolumna
IncrementoenSelec.vidaddelacolumna
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Cromatogra>a–ClasificacióndeTécnicas Absorción,Par.ción,IntercambioIónico,ExclusióndeTamaño,Electroforésis
Modernanaly.calchemistry(HarveyD.)(MGH,2000)Analy.calChemistry,GaryD.Chris.an,Wiley
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>adeAbsorción Elanalito/solutoes“absorbido”enlasuperficie
Separaciónpordiferentescapacidadesdeabsorción
hHp://www.rensselaer.org/dept/chem‐eng/Biotech‐Environ/CHROMO/be_types.htm
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>adePar.ción Elanalito/solutoesretenidoenunsoportesólido–superficiedeunapelículadelgada‐
hHp://www.rensselaer.org/dept/chem‐eng/Biotech‐Environ/CHROMO/be_types.htm
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>a–Par.ción/Absorción(eje.enpapel)
hHp://commons.wikimedia.org/wiki/Category:ChromatographyhHp://liston.50megs.com/unit3.html
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>adeIntercambioIónico Usaunaresina(soportesólido)conca.onesoanionesunidoscovalentemente
Algunossonatrapadosporlascargasmientrasotrosno
hHp://www.rensselaer.org/dept/chem‐eng/Biotech‐Environ/CHROMO/be_types.htm
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>adeExclusióndeTamaños Gelesporosossonusadoscomoelsoportesólido
Grandessolutosnopenetranfácilmentelosporos,lospequeñospasanlibremente
Enelectroforésis,nohayfasemóbilsinoqueseusauncampoeléctricoparaproducirelmovimiento.
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>adeAfinidad Eselmasselec.vo
Usainteracciónespecíficaentredos.posdemoléculas
Elsoportesólidoque.eneunidos(covalentemente)lasmoléculasque“atrapan” P.Ej.An.cuerpos
Unavezatrapados,lasmoleculasatrapadassepuedeneluirusandounasoluciónespecialque“cancela”lainteracción(cambiodepH,iones,etc).
BT2008Diagnós.coMolecular1
(Chem)HandbookofInstrumentalTechniquesforAnaly.calChemistry‐SeHle‐Pren.ceHall
BT2008Diagnós.coMolecular1
(Chem)HandbookofInstrumentalTechniquesforAnaly.calChemistry‐SeHle‐Pren.ceHall
BT2008Diagnós.coMolecular1
Cromatogra>adeLíquidos‐HPLC High‐PerformanceLiquidChromatography
Cromatogra>aengeneralesbasadaenunfenómenodedifusiónelcualesmuylento
Seusaunabombaparainyectarlafásemóvil
Paralograrrapidez: Elempacadodelacolumnadebeserfinoyaltameneesféricoparaqueseadensoyregular
Lafaselíquidaestacionariadebeserunapelículadelgadauniforme
Muchascolumnascomercialescumplenestascarácterís.cas
UnadelasprimerasmasexitosasesZipaxdeDuPontconporosidadcontrolable