IMPACTO DE LOS AGENTES DE BIOCONTROL SOBRE LAS
COMUNIDADES MICROBIANAS
Laura Gasoni
Kazunari Yokoyama Nancy Kahn
Guido ChiessaViviana Barrera
Kiroku Kobayashi
CONTROL BIOLOGICOCONTROL BIOLOGICODE FITOPATÓGENOS DE SUELODE FITOPATÓGENOS DE SUELO
SELECCIÓN DE SELECCIÓN DE ANTAGONISTASANTAGONISTAS
REDUCCIÓN DE LAREDUCCIÓN DE LA ACTIVIDAD PATOGÉNICAACTIVIDAD PATOGÉNICA
INSTALACION EN EL SUELOINSTALACION EN EL SUELO
FORMULACIONESFORMULACIONES
IMPACTO SOBRE LASIMPACTO SOBRE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS ORIGINALESCOMUNIDADES MICROBIANAS ORIGINALES
El Análisis tradicional de comunidades microbianas contempla:
2) 2) Caracterización y/o identificación
3) 3) Descripción de la comunidad basada en la diversidad de los aislamientos.
1) 1) Aislamiento de los microorganismos
OTROS METODOS
Inoculación directa de muestras de suelo en microplacas con 96 fuentes de Carbono.
Obtención de perfiles multivariados de degradación, que se conocen como Community level Physiological Profile (CLPP), por la reacción colorimétrica que resulta de la utilización de las diferentes fuentes de carbono.
Indicadores de la dinámica temporal, que permiten relacionar la fracción de la comunidad analizada con la comunidad total.
Cell Suspension
Consiste en el aislamiento de los organismos del
suelo, su multiplicación e inoculación en microplacas.
Consiste en la inoculación directa de una suspensión de suelo..
ANÁLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS
Soil Suspension
COOPERACION
ENTRE AMBOS GOBIERNOS
Suspensión deSuspensión desuelosuelo
Suspensión deSuspensión decélulascélulas
CLPPCLPP
¿COMO SE VISUALIZA LA ACTIVIDAD?
El indicador ubicado en el fondo de cada celda reacciona con el NADH producto de la respiración, se reduce y se observa el color violaceo (placas GN/GP) o rosado (FF).
Placa FF
Placa GN/GP
FUENTES DE CARBONO AGRUPADAS EN MICROPLACAS GN , GP y FF
CARBOHIDRATOS
ESTERESESTERES
POLIMEROS
ACIDOS CARBOXILICOS
ALCOHOLES
AMIDAS
AMINAS
COMPUESTOS AROMATICOS
COMPUESTOS CONBROMO
COMPUESTOS FOSFORILADOS
AMINOACIDOS
•Antagonísmo entre organismos (tambien existe en el suelo).
Fuerzas de selección dentro de la placa
•Acción cooperativa entre microorganismos (tambien existe en el suelo).
• Incapacidad de ciertos microorganismos de crecer en un medio sólido pero si en medio liquido.
Diferentes a las del suelo
•Toxicidad causada por el colorante reductor (poco probable).
INTERPRETACION DE LAS LECTURAS
Lectura Positiva (+ / 1)Lectura Positiva (+ / 1)
Borderline (b / 0.5) Borderline (b / 0.5) Reacción lenta, inferior al Reacción lenta, inferior al umbral.umbral.
Lectura Negativa (- / 0)Lectura Negativa (- / 0)
• Esto depende de la Esto depende de la absorbanciaabsorbancia de cada celda y del de cada celda y del
umbral de corrección automáticoumbral de corrección automático del sistema (estrecha del sistema (estrecha
relación con la intensidad de color de las celdas).relación con la intensidad de color de las celdas).
A simple vista muchas reacciones son imposibles de A simple vista muchas reacciones son imposibles de visualizarvisualizar
Riqueza Riqueza funcionalfuncional
Diversidad Diversidad funcionalfuncional
Numero de celdas positivasNumero de celdas positivas al al momento de la lecturamomento de la lectura
No solo considera las No solo considera las lecturas positivaslecturas positivas, sino , sino también su también su distribución (Patron).distribución (Patron). Dos placas con el mismo numero de reacciones Dos placas con el mismo numero de reacciones positivas positivas (similar riqueza)(similar riqueza) pueden tener pueden tener diferente diferente diversidaddiversidad funcional en funcion de las fuentes funcional en funcion de las fuentes degradadas.degradadas.
Fusariosis
en TABACO
(Fusarium Wilt)
MONOCULTIVO
El El monocultivomonocultivo
puede favorecer la puede favorecer la
dominancia dominancia de una de una
población población
patogénicapatogénica..
Inmersión de raíces de plántulas de tabaco al momento del transplante (formulados líquidos)
Tratamientos:
•Trichoderma sp. (aislamiento R3P2)
• Control
Análisis de resultados
ENSAYO SOBRE PARCELAS CON MONOCULTIVO DE TABACO
RESULTADOS OBTENIDOS
Análisis de conglomerados
Índice de Biodiversidad
DI= ( i=1 n di) 2 / n
Análisis de Componentes Principales (ACP)
Reduce la
dimensionalidad (R96 a Rn<96)
BIPLOTSBIPLOTS
Agrupa por similitudes
BIPLOTBIPLOT
-905,42 -610,73 -316,05 -21,36 273,32 CP1
-445,44
-196,49
52,46
301,41
550,36
CP2
Aminas
Carbohidratos
Esteres
Polímeros
Ac.Carboxílilicos
Alcoholes Amidas
Compuestos fosforilados
Aminoácidos
Aromáticos
Compuestos c/ Bromo
Aminas
Dispersión de microorganismos del suelo luego del tratamiento con y sin el biocontrolador Trichoderma sp.
Trichoderma + ControlTrichoderma + Control
TrichodermaTrichoderma
TrichodermaTrichoderma
Variabilidad explicada: 84% (59% + 25%)Variabilidad explicada: 84% (59% + 25%)
• En el suelo tratado con Trichoderma sp. se ve mayor
dispersión (distancia) entre los puntos generados por
los microorganismos que consumen preferentemente
Compuestos Fosforilados.
• Esto podría estar asociado al estimulo de una flora
bacteriana diferente (antagonistas de Fusarium
sp??).
• Los cambios en la comunidad se ponen de
manifiesto con un aumento del índice de
biodiversidad (56865 vs 67608).
Trichoderma + ControlTrichoderma + Control
TrichodermaTrichoderma
TrichodermaTrichoderma
• La comunidad original se compone de microorganismos que degradan preferentemente Carbohidratos, Ac. Carboxílicos, Aminas, Amidas, Esteres y Polímeros.
• Luego del tratamiento con Trichoderma sp (círculos rojos) se estimulo la actividad de una microfloras que degrada compuestos fosforilados.
Los sustratos presentes en las placas se han
seleccionados por su capacidad discriminante
para establecer diferencias entre
microorganismos y no porque sean los que
usualmente se encuentran presentes en los
ecosistemas.
Es importante considerar que la observación
indirecta de la comunidad puede ser tan útil
como la directa para detectar cambios relativos.
MUCHAS GRACIAS