Date post: | 06-Jan-2015 |
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Inducción de proteína recombinante
-Lactamasa
Tecnología de DNA recombinante: Herramientas
1 Aislamiento del gen 2. Clonación y expresión
Producción de la proteína
Transcriptasa reversa Enzimas de restricción Célula huésped
DNA polimerasa Ligasa Clones
Sonda de DNA Véctor Medio de cultivo
3
Clonación del DNA
•DNA foráneo (secuencia que se desea clonar)
•Vector de clonación (vehículo)
•Organismo huésped (E. coli)
•Selección de vectores
Vector híbrido o recombinante
Vector de clonación pET-24a(+)
7200 bp
• Un gene siempre tiene que ir flanqueado por una zona promotora y otra terminadora de la transcripción
trangene
Secuencia que codifica para la proteína represora
Secuencia de unión de la proteína represora
• El inductor del operón lac que utilizaremos será el isopropiltiogalactósido (IPTG).
COMPOSICIÓN.
a) Genes estructurales (en tándem).• gen lac z codifica para la β-galactosidasa
• el gen lac y que codifica para la permeasa de galactosido.• el gen lac a, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.
b)Promotor
Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripción.
C) Operador• Se localiza en traslape con el promotor , sirve
como el sitio de unión para una proteína, que se conoce como represor.
d) Gen Regulador.• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que están
siendo regulados. El gen regulador codifica para una proteína específica, un producto denominado REPRESOR.