Obtención de muestras y
transportes de
materiales para estudios
microbiológicos
Que espera el medico del Laboratorio?
Resultados confiables
Información oportuna
Personal calificado
Técnicas adecuadas y modernas
Normas generales para la recogida de muestras
La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso evitando contaminantes
Debe ser recogida una cantidad adecuada de muestra para asegurar un examen apropiado
Debe ser tomada con dispositivos estériles y recogida en recipientes estériles y herméticos para su transporte al laboratorio
Transportada lo antes posible al laboratorio
En microbiología se analiza una muestra
clínica, que representa una porción de
material humano, con el fin de determinar la
presencia o ausencia de determinados mos.
Laboratorio de Microbiología
El conocimiento del microorganismo causal de la enfermedad infecciosa es fundamental para su:
Terapéutica
Pronóstico
Epidemiología
Laboratorio de Microbiología
Factores que dificultan el diagnóstico :
Tratamiento previo antimicrobiano
Problemas asociados con el aislamiento
del agente etiológico, a partir de
muestras contaminadas por la flora
microbiana habitual
Laboratorio de Microbiología
Las muestras recogidas de forma inadecuada, sin evitar las contaminaciones, representan el problema más frecuente para el Laboratorio de Microbiología.
Educación del personal medico y de enfermería en la utilización de técnicas correctas en la recogida de las muestras
Personal medico y enfermería: papel muy
importante en la fase preanalítica
Un buen resultado está condicionado por la correcta toma e identificación de muestras
La persona que recoge la muestra es puente de unión entre paciente y laboratorio, y puede informar sobre las distintas variables que pudieran influir en el resultado del análisis
“La extracción, manejo y transporte de las
muestras son factores claves que condicionan la
exactitud de los análisis clínicos de laboratorio y,
por tanto, la calidad de atención al paciente”
Toda muestra recolectada o conservada en forma incorrecta
puede llevar a resultados confusos ya que no permitirá recuperar
a los agentes de un proceso infeccioso, y a su vez, un diagnóstico
equivocado puede conducir al empleo erróneo y/o innecesario de
agentes antimicrobianos.
Los involucrados en la toma de muestra, deben conocer las pautas establecidas por el Laboratorio de Microbiología, cuyo rol es dar información para diagnóstico y toma de conducta terapéutica.
MédicoMicrobiólogo
Paciente
Muestras incorrectas
Transporte inadecuado
Contenedor inadecuadoMuestras no remitidas
Muestras no/mal identificadas
Muestra insuficiente
En el horario de funcionamiento del Laboratorio, las
muestras SE REMITIRAN INMEDIATAMENTE
O no se puede asegurar la viabilidad de los organismos fastidiosos ni prevenir el sobredesarollo de las bacterias acompañantes, y dejará de ser representativa del proceso que
ocurre en el foco estudiado.
En caso de no poder cumplir
con este requisito, se tendrán
en cuenta las PAUTAS DECONSERVACION.
CONSERVACION DE MUESTRASA TEMPERATURA
AMBIENTE:
EN HELADERA (4°C): EN ESTUFA (35°C) *:
- Muestras en medio de transporte
stuart.
- Líquidos de punción.
- Sangre para Lisis –
Centrifugación:
(en tubos especiales)
- Sangre
- Orinas (al acecho, chorro
medio, punción suprapúbica)
- Catéteres
- Coprocultivos en medio de
transporte , sí el lapso de
conservación es mayor de 6 hs.
-Muestras para estudio de
Micobacterias
-Esputos, BAL, S traqueales
- Muestras para estudios
Virológicos
- Muestras en medio liquido de
transporte ( tioglicolato)
*De no ser posible esta forma de
conservación, dejarlas a
temperatura ambiente.
Las muestras deben recolectarse ANTES DE LA
ADMINISTRACION DE ANTIMICROBIANOS.
De no ser
posible lo
anterior,
hay que
tener en
cuenta :
• Con, por lo menos, 48 hs de suspendido o
terminado el mismo. (excepto en el caso de
orinas: NO menos de 5 días)
• Si tuvieran vida media prolongada: esperar más
de 48 hs.
• Si no se pueden suspender: tomar la muestra
justo antes de la siguiente dosis, es decir, en el
valle de la posología.
Todos los materiales se consideran potencialmente infecciosos y deben ser
remitidos ajustándose a las normas de Bioseguridad vigentes.
Por todo lo anteriormente expuesto, SE RECHAZARAN MUESTRAS,
ENTRE OTRAS:
Criterio de
rechazo de
muestras por
el laboratorio:
• Sin rotular, o rotuladas inapropiadamente
o con datos discordantes.
• Derramadas.
• Enviadas sin el medio de transporte
correspondiente o incorrectamente
conservadas.
• Duplicadas en el transcurso de 24hs., sin la
aclaración del médico solicitante que la
justifique. Se exceptúan los Hemocultivos.
• Con agujas o cualquier otro
cortopunzante.
COMPLETAR EL PROTOCOLO DE PEDIDO con la
información específica para poder procesar adecuadamente el
material enviado.
ROTULAR adecuadamente los recipientes
Pedidos laboratoriales (PROTOCOLO DE PEDIDO) Es importante que el médico haga un pedido de análisis de manera correcta de
modo que pueda ayudar al bioquímico a la recuperación rápida de ciertos
microorganismos.
El pedido
laboratorial
debe contar con
los siguientes
datos:
• Nombre, Apellido, edad y sexo del paciente
• Fecha de la toma de muestra.
• Origen y tipo exacto de material
• Estudios solicitados
• Diagnóstico presuntivo
• Tratamiento antibiótico, desde hace cuánto
tiempo
• Nombre y firma del médico responsable.
FRASCOS
VASOS
TUBOSHISOPOSJERINGAS
PLACAS
LIMAS
ASAS
CORTAUÑAS
Utensilios Toma Muestras
BISTURÍS
Vasos
Orinas
Heces
Esputos
Tejidos
Catéteres
Cuerpos extraños
Tejidos
Biopsia
Tubos
Líquidos
Humores
Exudados
Pus
Aspirados
Hisopos
Faríngeos
Nasales
Vulvovaginales
Uretrales
Jeringas
Punción suprapúbica
Abscesos
Humores oculares
Úlceras
Placas (cajas) Uñas
Pelos
Escamas
• Lavado de manos.
• Guantes estériles.
• Limpieza de la piel con alcohol 70º.
• Desinfección con yodopovidona.
Las muestras se pueden recoger
por diversos métodos
empleando una técnica
aséptica. Son los procedimientos que se
emplean para evitar que
microorganismos no deseados
contaminen la muestra clínica
UROCULTIVOS:
• La muestra de elección es la primera orina de la mañana, pero si la urgencia del caso o la situación particular lo justificara, se puede realizar la recolección con una retención mínima de 3 hs.
• En todos los casos: utilizar para la higiene agua hervida enfriada y jabón nuevo.
• Las muestras obtenidas se colocarán siempre en frasco estéril.
•Volumen: no menos de 10 ml para una correcta interpretación del estudio.
•En caso de sospechar infección por anaerobios:
la única muestra válida es por punción
suprapúbica.
•Siempre indicar el método de obtención. Esto
es indispensable para el procesamiento y
evaluación de los resultados.
Remitir las muestra INMEDIATAMENTE al
Laboratorio.
FUERA DEL HORARIO DE RECEPCION:
Conservar muestras en heladera (4°C), como
máximo 24 hs. Para el traslado: colocar el frasco
en un recipiente con hielo. (Especialmente los
días cálidos).
Urocultivo
PROCEDIMIENTO
a) Pacientes que controlan esfínteres:
1)Chorro medio:
1.1 Sexo femenino:
Higienizar los genitales externos, con agua y jabón,
separando los labios mayores.
Enjuagar bien y no secar.
• En el caso de tratarse de pacientes adultas: colocar
tampón vaginal.
Lavarse las manos y abrir el frasco. Comenzar a orinar,
manteniendo separados los labios para evitar que el
chorro medio contacte con el periné, descartando la
primera parte de a micción.
Recolectar el chorro medio directamente en el frasco.
Descartar la última parte de la micción.
1)Chorro medio:
1.2 Sexo masculino: Higienizar los genitales con agua
y jabón, retrayendo el prepucio.
Enjuagar bien y no secar.
Lavarse las manos y abrir el frasco.
Comenzar a orinar, manteniendo retraído el prepucio, descartando la primera parte de la micción.
Recolectar el chorro medio, directamente en el frasco.
Descartar la última parte de la micción.
c) Pacientes sondados
c.1-Sondados intermitentes
• Utilizar sonda nueva estéril.
• Recoger frasco estéril.
c.2-Sondados permanentes
• De ser posible, cambiar la sonda por una nueva.
• Clampear (pinzar) la sonda 2-3 hs.
• Desinfectar con yodopovidona o alcohol iodado.
• Punzar con aguja mosquito y jeringa estéril a 10 cm del meato
urinario .
• Colocar el material obtenido en el frasco.NUNCA tomar material de la bolsa de drenaje.
MUESTRAS GENITALES:
Como se trata de muestras que provienen de sitios
que tienen gran cantidad y variedad de flora
comensal, la selección de la misma y el método de
recolección son críticos.
a) Secreción vaginal:
• Colocar el espéculo. NO usar lubricante.
• Utilizar dos hisopos diferentes:
1º Hisopo: recoger secreciones del fondo de saco vaginal. (Se utilizará para
investigar la presencia de Trichomonas, Candida spp., vaginosis por
complejo GAM, determinación del pH y del test de aminas)
2º Hisopo: limpiar el cuello de útero (endocérvix) para que quede libre de
secreciones y mucus vaginales, insertar el hisopo algunos milímetros dentro
del canal cervical y obtener el exudado.(Se utilizará para investigar la
presencia de gonococos, Mycoplasmas, etc)
• Colocarlos en los medios de transporte adecuados.
• Remitir al Laboratorio o conservar a Temperatura ambiente.
• NO refrigerar.
LOCALIZACION PATOGENOS
Vaginal
(epitelio estratificado)
- Candida spp.
- Trichomonas vaginalis
- Complejo GAMM (Gardnerella vaginalis, Anaerobios,
Mobiluncus spp, Mycoplasma spp.: Vaginosis Bacteriana)
- Streptococcus agalactiae
Endocervical
(epitelio columnar)
- Neisseria gonorrhoeae
- Chlamydia trachomatis
- Mycoplasma spp.
- Ureaplasma spp.
- Listeria monocytogenes
c) Muestras uretrales:
De elección para el estudio de las I.T.S. en el hombre.
• Remover la flora externa, retrayendo el prepucio y lavando la
zona con agua hervida enfriada y jabón.
• Recoger el exudado de la uretra con hisopo y colocarlo en
medio de transporte adecuado.
• Con otro hisopo, recolectar más exudado para realizar un
extendido haciéndolo rodar 2 o 3 veces sobre un portaobjeto.
• Si no hubiera secreción, insertar un hisopo 2-3 cm. en la
uretra y repetir la operación.
• Remitirlo INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
FUERA DEL HORARIO DE RECEPCIÓN:
Dejarlo a Temperatura ambiente. NUNCA REFRIGERAR.
VIAS RESPIRATORIAS ALTAS:
1) Oído:No se recomienda el hisopado del canal auditivo para el
diagnóstico de infección del oído medio.
El espécimen de elección es el aspirado por punción
timpánica ya que este material es representativo del proceso
infeccioso. Pero, este procedimiento está indicado solo en
pacientes con otitis media crónica que no hayan respondido
al tratamiento con antibióticos.
Procedimiento:
Recolección, transporte y conservación según
Líquidos de Punción.
MUESTRAS ÓTICAS
OÍDO EXTERNO
MATERIAL NECESARIO: torundas con
medio de transporte,
TÉCNICA: Limpiar con antiséptico el oído
externo, tomar la muestra con torunda o por aspiración del fluido en caso de
abscesos
Nº de muestras: una de cada oído
2) Secreción Nasal:
Esta muestra NO es de utilidad para
estudio de patología del tracto
respiratorio superior.
Puede ser utilizado para estudio de
portación de Staphylococcus aureus y
de Streptococcus B hemolítico (SOLO
en caso de brotes).Procedimiento:
Insertar el hisopo 1 cm en las narinas. Rotarlo
firmemente sobre las membranas y dejarlo 10 – 15
segundos. Colocarlo en medio de transporte semisólido
3) Exudado de Fauces
• En caso de sospecha de Streptococcus
ß hemolíticos
• Observar la zona para localizar áreas de inflamación
con exudados, membranas
o úlceras. En su defecto realizar un hisopado
enérgico de amígdalas, área tonsilar y faringe
posterior.
•Si se desea realizar estudios de portación de S.
aureus y de gérmenes oportunistas en neutropénicos
(por ejemplo por aparición de brotes en Unidades de
internación). Eventualmente, enviar a su vez cultivo
de fosas nasales.
EXUDADO FARINGO-AMIGDALINO
S. pyogenes
Para la evaluación de la muestra es importante saber si:
La neumonía es intra o extrahospitalaria
El paciente está sometido o no a Asistencia Respiratoria Mecánica (ARM)
Es inmunosuprimido
Está recibiendo antibióticos y cuáles son
El proceso pulmonar es crónico. En este caso debería realizarse de rutina la búsqueda de otros microorganismos (micoplasmas, hongos)
VIAS RESPIRATORIAS BAJAS:
VIAS RESPIRATORIAS BAJAS:
El tracto respiratorio superior es la fuente más importante de contaminación para muestras de esputo, secreción traqueal, aspirado nasofaríngeo y lavado bronquial.
El árbol traqueobronquial en personas sanas normalmente es estéril o con muy baja concentración de bacterias
Tanto la cantidad como la frecuencia de colonización se incrementan en pacientes con enfermedad pulmonar crónica, traqueostomía o intubación
El aspirado traqueal: puede utilizarse para la
obtención de muestras en pacientes en Asistencia
Respiratoria Mecánica (ARM).
Las más útiles para diagnósticos de
patógenos del tracto respiratorio inferior,
tanto aerobios como anaerobios son
aquellas obtenidas por punción
(transtraqueal, pulmonar) o por
fibrobroncoscopía con cepillo protegido.
La de mayor sensibilidad y especificidad es la biopsia de
pulmón a cielo abierto, pero por tratarse de un método tan
invasivo se reserva para situaciones especiales.
1-) Esputo
• Enjuagarse la boca al levantarse con solución de bicarbonato, a fin
de disminuir la flora de la boca.
•Recolectar el esputo producto de una espectoración profunda en
envase de plástico estéril, de boca ancha, con cierre hermético.
Remitir INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
FUERA DEL HORARIO DE RECEPCION: Conservar en la
heladera NO más de 24 hs. El frío por períodos prolongados atenta
contra la viabilidad de algunos microorganismos y la temperatura
ambiente es perjudicial por el sobrecrecimiento bacteriano.
Se aspira la vía aérea con técnica aséptica
y cánula estéril.
2) Aspirado traqueal:
•Problema: falsos positivos
20%
•Valor limitado
Lavado broncoalveolar (BAL):
• Se lava un segmento pulmonar con líquido estéril. Habitualmente se realiza con SF: 100ml para adultos
• Se aspira la vía aérea con técnica aséptica y cánula estéril.
• Se introduce el endoscopio a través del tubo endotraqueal sin aspirar para evitar contaminación hasta enclavar el extremo en el segmento elegido.
• Se instilan las alícuotas con técnica aséptica y se aspira repitiendo el procedimiento por cinco veces.
• Cada muestra se debe colocar en distintos frascos.
Técnicas cuantitativas con un punto
de corte mayor a 10.000 UCF/ml.
No debe dejarse a temperatura
ambiente, pues el recuento de
colonias no tendría valor.
COLOCAR DE INMEDIATO EN
HELADERA (4-8 ºC), donde puede
permanecer hasta 24
Lavado broncoalveolar (BAL):
Cribaje de Tuberculosis:
Los 3 esputos.
Esputos de 3 ds sucesivos.
(por la intermitencia en
la eliminación bacilar).
Mejor el primer esputo de la
mañana. Enviar rápidamente
o conservar a 4º C.
LIQUIDOS DE PUNCION:• Desinfección de la zona a punzar.
• Extraer las muestras con jeringa
• Los tubos estériles o frascos utilizados para el
transporte de las muestras deberán; en lo
posible; poseer tapa de rosca para evitar el
derramamiento, volcado ó pérdida de las
mismas.
• En la mayoría de los casos se aconseja
acompañar las mismas con 2 muestras de
sangre para hemocultivo.
A) LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO:
PROCEDIMIENTO
Recolectar el material
(según las pautas ya establecidas)
en por lo menos 2 (dos) tubos secos estériles :
a) para estudio microbiológico
b) para estudio citoquímico
Remitir en forma inmediata al Laboratorio.
Fuera del horario de recepción, dejar los tubos a T
ambiente. NUNCA refrigerar (excepto para
estudio virológico).
B) OTROS LÍQUIDOS DE
PUNCIÓN:
PLEURAL – PERITONEAL -
OTICO – ASCÍTICO –
PERICÁRDICO -
AMNIÓTICO
Se aconseja enviar el mayor
volumen posible de muestra ya
que pueden ser infecciones de
bajo inóculo.
HEMOCULTIVOS:
• Recolectar 2-3 muestras en el lapso de 24hs.
Intervalos dependen de la urgencia de la situación
clínica, 20–30 minutos entre cada una de ellas,
siempre de distintos puntos de punción.
• Ideal: recoger muestra lapso de 1h antes del pico febril,
si este pudiera predecirse. De no ser posible, hacerlo
cuando comienza.
• Realizar extracciones antes de administración de ATB.
Si no puede evitarse, hacerlo antes de la siguiente
dosis.
Procedimiento para Hemocultivos.
Extracción de sangre se debe
realizar cumpliendo las
máximas precauciones de
asepsia.
1. Lavado las manos.
2. Colocar ligadura y campo
estéril.
3. Palpar la vena a puncionar.
4. Antisepsia con alcohol 70% en
zona de piel de 10 cm de diámetro
alrededor del sitio de punción. Se
comenzará por el centro, haciendo
círculos concéntricos hacia el
exterior.
5. Repetir procedimiento utilizando
Yodo povidona al 10%.
6. Dejar actuar 1-2 min, hasta que
seque el antiséptico sobre la piel.
7. Desinfectar tapón de goma del
frasco de hemocultivo con alcohol
70%.
8. Colocarse guantes estériles.
9. Extraer sangre sin tocar en ningún
momento el campo desinfectado.
10. Inyectar directamente la sangre en
frasco. No es necesario cambiar de
aguja.
11. Mover los frascos para que la sangre
y el medio de cultivo se mezclen.
12. Para frascos de Sistemas
Automatizados, en ningún caso se
rotulará o pegará ningún tipo de
etiqueta adhesiva sobre los
códigos de barras de las botellas.
En todos los casos, el volumen a inocular debe
mantener una relación 1/10 con respecto al volumen
de caldo del frasco a utilizar.
Elegir el tipo de frasco (aeróbico, anaerobio, hongos, micobacterias,etc.)
según la situación clínica:
• Enviar las muestras
INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
FUERA DEL HORARIO DE RECEPCIÓN: colocar a temperatura ambiente.
NUNCA COLOCAR EN LA HELADERA.
CATETERES:CATETERES REMOVIBLES:
• Previo a la remoción, extraer 1 (una)
muestra de Hemocultivo de vena
diferente a la del catéter. De no
cumplirse con este requisito, la
muestra será RECHAZADA.
• Si se sospecha infección asociada a la
conexión o a la infusión, enviar para
cultivo la infusión y la tubuladura en
bolsa sellada y rotulada.
1. Lavado de manos.
2. Guantes estériles.
3. Desinfección de zona pericatéter. Dejar secar 60".
4. Retirar el catéter, cuidando que no roce piel.
5. En forma aséptica, cortar 5 cm de la porción
distal (punta) y colocar en tubo seco estéril con tapa
de rosca. Catéteres de mayor longitud serán
rechazadas.
6. Remitir INMEDIATAMENTE al Laboratorio en
frasco estéril o conservar en la heladera 4ºC hasta
12 hs.
Métodos Utilizados en el Lab: Maki y B-B
Procedimiento para CATETERES
REMOVIBLES:
CATETERES NO REMOVIBLES:
• La evaluación de estos catéteres debe realizarse en
forma cuantitativa
• Se debe extraer una muestra de sangre de una vena
periférica diferente de la de inserción del catéter
(HEMOCULTIVO PERIFERICO) y otra de igual
volumen a través del mismo (RETROCULTIVO)
COPROCULTIVO:
Para investigación de patógenos entéricos, remitir
muestra de materia fecal recién emitida
o en medio de transporte adecuado.
•Debe tratarse de heces diarreicas.
(EXCEPTO: para estudio de portación)
• Nunca se recolectará muestra del inodoro y no se debe permitir la
contaminación de la misma con orina.
• Se aceptarán hisopados rectales solo si estos presentan materia fecal y de
pacientes muy comprometidos.
• NUNCA se utilizarán para detección de toxina de Clostridium difficile.
• NO se aceptarán hisopados anales para el estudio de diarreas
Procedimiento
1. Recoger una porción de materia fecal, preferentemente
material mucoso, purulento, sanguinolento.
2. Colocar en frasco estéril.
3. Enviar INMEDIATAMENTE al Laboratorio.
FUERA DEL HORARIO DE RECEPCIÓN:
1.Conservar a Temperatura Ambiente.
2.Si el lapso es mayor de 1-2 hs, refrigerar o colocar en un
medio de transporte. El frío puede afectar la viabilidad de
Shigella spp.
4. Para el estudio de toxinas de Clostridium difficile la
muestra se puede mantener hasta 2 horas refrigerada a
temperatura ambiente
MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS:
Heridas quirúrgicas - Heridas abiertas - Lesiones
de piel – Abscesos (abiertos
y cerrados) - Quemaduras.
•En estas muestras es crítica la correcta
decontaminación de la piel.
•Siempre indicar si la muestra proviene
de una cavidad abierta o cerrada.
•Describir el sitio anatómico del cual se obtiene.
•De tratarse de heridas, diferenciar entre muestras superficiales y
profundas, siendo estas últimas útiles para cultivo de anaerobios,
si son recolectadas en forma adecuada.
MUESTRAS DE PIEL Y TEJIDOS
BLANDOS:
Recordar que las muestras obtenidas por
punción-aspiración (PAS) deben ser
transportadas y conservadas a temperatura
ambiente.
La jeringa no debe contener aire y la aguja
debe ser obturada con tapón de goma, en
especial ante la probabilidad de infecciones
anaeróbicas.
MUESTRAS OCULARES
Conjuntivitis alérgica
Conjuntivitis viral: adenovirus, enterovirus…
Conjuntivitis bacteriana: Neumococo, H. influenzae, S. aureus, S.
grupo A. Gonococo, Chlamydia tracomatis (hisopo seco)
MUESTRAS OCULARES
MATERIAL: Torundas con medio de transporte o suero salino
TÉCNICA:
Obtener la muestra antes de instilar analgésicos locales, colirios o antibióticos
Con una torunda mojada en suero salino frotar sobre la conjuntiva inferior y especialmente sobre el ángulo interno
Nº DE MUESTRAS: Una para cada ojo
TRANSPORTE: Envío inmediato al laboratorio y conservación a Tª ambiente