Evaluación de la actividad antagónica de diferentes cepas de bacterias contra Clavibacter michiganensis in vitro
Sánchez-Sánchez-J.B* , Rosales-Colunga-L.M
Área Agroindustrial. Facultad de Ingeniería
Universidad Autónoma de San Luis Potosí
Solanum lycopersicum
•Origen
•Especie hortícola más importante para el consumo
humano
• Generador de empleos• Forma parte de la dieta del ser humano
(Secretaría de Agricultura, 2016)
LA HORTALIZA CON LA MAYOR SUPERFICIE SEMBRADA EN TODO EL MUNDO
(SECRETARÍA DE AGRICULTURA, 2016)
PRODUCCIÓN DE TOMATE EN MÉXICO
Principales productores de tomate:
•Sinaloa
•San Luis Potosí
•Baja California
•Zacatecas
•Michoacán
Fuente: SAGARPA, 2017
(Hausbeck MK et al., 2000)
Clavibacter michiganensis subespecie
michiganensis , principal patógeno del
jitomate
No hay tratamiento efectivo, es necesario encontrar un
control biológico con cepas antagonistas .
Algunas cepas de Bacillus son antagonistas de Cmm
(Boudyach et al 2001)
(Jung et al 2014)
HIPÓTESIS
Evaluación del antagonismo de cepas morfológicamente similares a Bacillus, aisladas del efluente de una planta tratadora de aguas contra Cmm.
Las cepas morfológicamente similares a Bacillus presentaran actividad inhibitoria contra Cmm.
OBJETIVO
METODOLOGÍA
Aislamiento Bacteriano
Análisis antagónico en medio solido
Análisis antagónico en medio liquido
Identificación de Cmm
AISLAMIENTO BACTERIANO
Aislamiento bacteriano
Bacterias morfológicamente similares a Bacillus
Efluente de planta tratadora de
agua, industria papelera
CmmTallo enfermo de
cáncer bacteriano
AISLAMIENTO BACTERIANO
ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO SÓLIDO
Siembra de Cmmen medio líquido
Preparación de medio sólido LB en
cajas de Petri
Agregar 250 μl de Cmm a cajas de
petri
Tomar 4 trozos de papel filtro
Empapar los papeles filtro con las
bacterias sembradas
anteriormente
Colocarlos en las cajas con Cmm
sembrado
ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO SOLIDO
Cepa Halo de
inhibición (Diámetro)
Crecimiento
Bacteriano (Diámetro)
Cepa A 1.60 cm 0.90 cm de la bacteria A.
Cepa B No se presenta
1.25 cm de bacteria B.
Cepa C 1.22 cm 1.22 cm de bacteria C.
Tabla 1. Evaluación de inhibición de Cmm por diferentes cepas
aisladas
Cepa D 1.8 cm de
D.
1.07 cm de
bacteria D.
Cepa E No presenta
0.62 cm de bacteria E.
Cepa F 1.7cm de D 0.65 cm de bacteria F.
Cepa G 5.5 cm de D
1.35 cm de bacteria G.
ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO LÍQUIDO
Se cultivan bacterias en
medio líquido LB
Densidad óptica cada 24
hrsCentrifugación
Preparación de suspensiones
Densidad óptica cada 24
hrs
Elaboración de curva de
crecimiento
ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO LIQUIDO
Grafico 1. Densidad Óptica de las diversas cepas de bacterias a
190 hrs
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
OD
600 n
m
Cepas
Bacteria A
Bacteria B
Bacteria C
Bacteria D
Bacteria E
Bacteria F
Bacteria G
CONTROL
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
0 25 50 75 100 125 150 175 200
OD
60
0 n
m
Tiempo (h)
Bacteria A Bacteria B Bacteria C Bacteria D
Bacteria E Bacteria F Bacteraia G CONTROL
Identificación de Cmm
Preparación de medio sólido LB
Siembra de bacterias en
medio solido LB
Incubación Identificación de
las bacterias morfológicamente
Identificación de Cmm
CONCLUSIÓN
➢ De las cepas evaluadas en medio sólido LB, 5 presentan halos de inhibición del crecimiento
del patógeno.
➢ En los ensayos de inhibición en medio liquido 2 cepas inhibieron fuertemente el crecimiento
del patógeno.
➢ La cepa que mostró resultados positivos en ambos ensayos fue la cepa C.
➢ Al identificar la bacterias en medio sólido, se pudo apreciar que la bacteria que estaba
presente efectivamente es Clavibacter michiganensis
REFERENCIAS
• Secretaría de Agricultura, G. D. (12 de Noviembre de 2016). ¿Tomate o jitomate? Recuperado el 15 de Noviembre de 2017, de Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación: https://www.gob.mx/sagarpa/articulos/tomate-o-jitomate?idiom=es
• E. H. Boudyach , M. Fatmi , O. Akhayat , E. Benizri & A. Ait Ben Aoumar Selection of Antagonistic Bacteria of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis and Evaluation of Their Efficiency Against Bacterial Canker of Tomato, Biocontrol Science and Technology.(2001).
• W.J. Jung , F. Mabood , A. Souleimanov , L.G. Whyte, T.D. Niederberger , D.L. Smith. Antibacterial activity of antagonistic bacterium Bacillus subtilis DJM-51 against phytopathogenic Clavibactermichiganense subsp. Michiganense ATCC 7429 in vitro (2014).
• Hausbeck MK, Bell J, Medina-Mora C, Podolsky R, Fulbright DW. Effect of bactericides on population sizes and spread of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis on tomatoes in the greenhouse and on disease devel- opment and crop yield in the field. (2014)