PO-24
La inhibición de la autofagia previene la
replicación del VIH, la depleción celular y
la transmisión del virus célula-célula en
tejido linfoide humano cultivado ex vivo
Sònia Pedreño LópezInstitut de Recerca de la Sida IrsiCaixa
GeSIDA 2019
INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
- La autofagia es una vía esencial de defensa del huésped contra infecciones virales, que se encargade la degradación de patógenos, señalización inmune innata e inmunidad adaptativa.
- Aunque sigue habiendo controversia sobre el papel que juega la autofagia durante la infección porVIH, ya que se han descrito diferentes resultados en cuanto a la respuesta autofágica que seproduce durante dicha infección dependiendo del modelo celular utilizado.
- Sin embargo, los mecanismos por los que la autofagia restringe la infección por VIH siguen sinconocerse.
Phagophore
3-METILADENINA
Fleming, A. et al. Nat Chem Biol. 2011.
GeSIDA 2019
HIPOTESIS: El VIH es capaz de alterar el proceso de autofagia, por lo tanto, una modulación deeste proceso celular podría tener un impacto en el ciclo replicativo del virus.
OBJETIVO: Evaluar el potencial terapéutico de la inhibición de la autofagia en la infección por VIHutilizando un modelo ex vivo de tejido linfoide humano.
INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
- La autofagia es una vía esencial de defensa del huésped contra infecciones virales, que se encargade la degradación de patógenos, señalización inmune innata e inmunidad adaptativa.
- Aunque sigue habiendo controversia sobre el papel que juega la autofagia durante la infección porVIH, ya que se han descrito diferentes resultados en cuanto a la respuesta autofágica que seproduce durante dicha infección dependiendo del modelo celular utilizado.
- Sin embargo, los mecanismos por los que la autofagia restringe la infección por VIH siguen sinconocerse.
Fleming, A. et al. Nat Chem Biol. 2011.
GeSIDA 2019
MÉTODOS
Histocultivo
Tejido linfoide disgregado (HLAC)
Fármacos p24 Sobrenadante
Depleción T CD4
p24 Intracelular
10 díasFármacos
DNA Proviral
Cocultivo3 díasDepleción T CD4
p24 Intracelular
GeSIDA 2019
RESULTADOS
0.5 1.0 1.5 2.00
20
40
60
80
100
Bafilomycin
% V
iab
ilit
y
0.5 1.0 1.5 2.00
20
40
60
80
100
Chloroquine
% V
iab
ilit
y
0.0 0.5 1.0 1.50
20
40
60
80
100
3-Methyladenine
% V
iab
ilit
y
Log Concentration (mM) Log Concentration (µM) Log Concentration (nM)
Se escogieron concentraciones notóxicas de cada uno de los fármacospara realizar los distintos ensayos.
- VIABILIDAD CELULARGeSIDA 2019
RESULTADOS
- HISTOCULTIVOS HUMANOS
3 10
0
5.0×104
1.0×105
1.5×105
2.0×105
2.5×105
C +
CQ3-MA
Baf
JM-2987
Su
pe
rna
tan
t p
24
Days Post-infection
C - C + JM-2987 3-MA CQ Baf
0
25
50
75
100
125
% C
D4
+/C
D8
+ R
ati
o
0.0011ns
ns
C - C + JM-2987 3-MA CQ Baf0
25
50
75
100
125
% I
ntr
ac
ellu
lar
p24
0.00030.0095
0.0007
Los inhibidores de autofagia producen:
- Una fuerte inhibición de la replicación viral (72% 3-MA, 52% CQ y 87% Baf).
- Una reducción en la depleción de células T CD4+ (77%, 56% y 60% con 3-MA, CQ y Baf respectivamente), aunque solo 3-MA dio significancia.
- Una disminución en el contenido de p24 intracelular (72% 3-MA, 46% CQ y 43% Baf).
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- CULTIVO DE TEJIDO LINFOIDE HUMANO DISGREGADO (HLAC)
C + JM-2987 3-MA CQ Baf
0
25
50
75
100
% P
rovir
al D
NA
HL
AC
<0.0001
<0.0001
<0.0001
C- C+ JM-2987 3-MA CQ Baf
0
25
50
75
100
% C
D4
+/C
D8
+ R
ati
o C
oc
ult
ure
0.0046
0.0136
0.0011
C - C + JM-2987 3-MA CQ Baf0
25
50
75
100
% I
ntr
ac
ell
ula
r p
24
Co
cu
ltu
re
<0.0001
0.0085
<0.0001
- El bloqueo de la autofagia condujo a una reducción significativa de >90% en los niveles de DNA proviral.
- Utilizando un sistema de cocultivo, la inhibición de la autofagia fue también capaz de disminuir ladepleción celular (23% 3-MA, 22% CQ y 41% Baf) y prevenir la transmisión célula-célula del VIH (72%,44% y 63% con 3-MA, CQ y Baf respectivamente).
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CONCLUSIONES
- En Histocultivos:
• Los inhibidores de autofagia reducen la replicación viral.• El fármaco 3-MA protege contra la depleción de células T CD4.• Disminuyen los niveles de p24 intracelular.
- En células Disgregadas:
• Reducen la infección por VIH a partir de la disminución de los niveles de DNA proviral.• Disminuyen la transferencia del virus entre las células no infectadas y las infectadas.
Nuestros resultados sugieren que modular la vía de la autofagia podría ser un nuevo enfoque terapéutico válido contra el VIH-1
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AGRADECIMIENTOS
Grupo de Virología Tisular
Cecilia CabreraElisabet GarcíaJordi Senserrich
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