ANÁLISIS DE INTERACCIÓN DEL PÉPTIDO IT9302 CON EL RECEPTOR DE INTERLEUQUINA 10 HUMANA

T.M. Antonio Serrano

Inmunoterapia

• Inmunoterapia del Cáncer• Patología Autoinmune• Alergias• Trasplantes

• Terapia celular• Anticuerpos• Citoquinas

Interleuquina 10

• Citoquina inmunosupresora

• 160 aa

• Receptor IL-10• R1 y R2

IT9302

• Nonapéptido homólogo al Dominio C terminal de hIL-10

• Conserva varias propiedades funcionales de IL-10 in vitro

Hipótesis

• IT9302 homólogo al dominio funcional de la interleuquina 10 humana interacciona con el receptor soluble IL-10R1 directamente en forma similar tal como lo realiza la porción C terminal de la citoquina nativa permitiendo el diseño de modificaciones químicas que mejoren la interacción.

Objetivo General

• Determinar interacción molecular entre el receptor soluble de interleuquina 10 de tipo 1 con el nonapéptido IT9302 homólogo al dominio funcional de la IL.10

Objetivos Específicos

Biosíntesis sIL-10R1

1

NMR IT9302

2

Cristalografía Rayos x IL10R/IT9302

3

Diseño y Síntesis Péptidos

4

Anisotropía IL-10R/Péptidos

5

Ensayos Resistencia

6

1.- Expresar y purificar la proteína soluble receptor de Interlequina 10 humana de tipo 1 en forma

recombinante

• Fracción Soluble de IL-10R

• Células de Mieloma

• Purificación• Ensayo

competencia

2.- Analizar la configuración espacial de IT9302 mediante resonancia magnética nuclear

• Síntesis química en fase sólida de IT9302

• NOE de IT9302

• Análisis computacional de estructura 3D

3.- Estudiar mediante cristalografía de rayos X la configuración espacial de interacción entre IT9302 y

sIL-10R1:

• Cristalización de IT9302/sIL-10R1

• Análisis de rayos x en Sincrotron

• Modelamiento 3D con softwares

4.- Diseñar y sintetizar modificaciones aminoacídicas no naturales de IT9302 que mejoren su afinidad y actividad específica que emulen las propiedades de IL-10 nativa

• Conocimiento de interaccion IL-10/IL-10r• Conocimiento de interracción IT9302/sIL10R1

• Modelamiento • Síntesis

5.- Evaluar afinidad del los diferentes péptidos con aminoácidos no naturales por IL-10R1, en comparación

con IT9302, por de anisotropía de fluorescencia

• Marcación con Alexa Fluor © de sIL10R1

• Incubaciones de Péptidos modificados con el receptor

• Medir anisotropía de fluorescencia

6.- Evaluar resistencia a proteasas de péptidos con aminoácidos no naturales en comparación con IT9302:

• Ensayo Funcional• Resistencia a

Proteasas del suero

Proyecciones

• Pruebas in vitro de funcionalidad de peptidos modificados con aa no naturales

• Ensayos in vivo de mejoramiento de efecto de péptidos modificados

• Ensayos Fase I.