Date post: | 05-Aug-2015 |
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Un estudio fitoquímico es …
Aislamiento e identificación del contenido de
metabolitos secundarios en una especie vegetal
Las investigaciones fitoquímicas
son realizadas con diferentes
objetivos, tales como la
determinación de los grupos de
sustancias presentes en ellas, el
análisis cuantitativo de los
compuestos activos, así como el
aislamiento de los compuestos de
interés para su posterior
identificación, caracterización
fisicoquímica o análisis estructural.
Adicionalmente, los estudios fitoquímicos son
importantes para otras disciplinas como la
quimiotaxonomía, ya que mediante el aislamiento
y caracterización de metabolitos secundarios se
proporciona información útil para lograr la
diferenciación entre las especies.
Se estima que en México actualmente existen más de
3,350 especies de plantas vasculares consideradas
medicinales. Sin embargo, sólo un pequeño porcentaje
de las plantas medicinales ha sido investigado desde
el punto de vista fitoquímico y farmacológico.
México cuenta con
una gran biodiversidad
y con una importante
tradición en el uso de
especies vegetales
para tratar diversos
padecimientos.
M. citrifolia M. panamensis
Entre las especies utilizadas como
planta medicinal por la población en
Yucatán se encuentra Morinda
panamensis, sin embargo esto se
debe a su similitud morfológica con
la especie Morinda citrifolia (noni).
Objetivos en un estudio fitoquímico
Objetivo General
Contribuir, mediante el estudio fitoquímico de
diferentes extractos orgánicos, al conocimiento
químico de las hojas de Morinda panamensis Seem.
Objetivos Específicos
Realizar el aislamiento y purificación, por diversos
métodos cromatográficos, de los metabolitos
secundarios presentes en los extractos de
diclorometano, acetato de etilo y metanol de las hojas
de M. panamensis Seem.
Determinar la estructura química de los metabolitos
aislados, mediante técnicas espectroscópicas y
espectrométricas.
Material y equipo
cromatográfico
Cromatografía en
columna
Equipo
espectroscópico y
espectrométrico
RMN
Cromatografía en
capa delgada CG-EM
CLAE
Cromatografía de
permeación en
gel
Cromatografía en
fase reversa
EMAR
CLAE
Para llevar a cabo un estudio fitoquímico se
requieren diversos materiales y equipos:
Equipo espectroscópico y espectrométrico
Es muy importante la obtención del material vegetal
y los extractos. Por ejemplo:
737 g
Muestra de espécimen en el Herbario
“Alfredo Barrera Marín”
Desecación
Molienda
Identificada por el Dr. Salvador
Flores Guido
Maceración
exhaustiva
con CH2Cl2.
CC SiO2
Hx-AcOEt
68.5 g Fracciones
R1a
CCDP
CH2Cl2-An 90:10
R
R6
R1 R2 R3
R3a R3b
CCDP
CH2Cl2-An 65:35
R6.5
R6.5a
CCDP
CH2Cl2-An 60:40
CC SiO2
CH2Cl2-An
CC SiO2
CH2Cl2-An
R5
CC SiO2
CH2Cl2-AcOEt
R5.5
R5.5a
CCDP
CH2Cl2-AcOEt 65:35
R5.4
CCDP
CH2Cl2-AcOEt 65:35
R5.4c
Las metodologías que se siguen son del estilo…
Otro ejemplo:
CCDP
Hx-An 70:30
P7 (25 mg)
Compuesto IV (5 mg)
CC SiO2
CH2Cl2-An
CCDP CHCl3-An 80:20
Fracción P (1.43 g)
CC con Sephadex lipofílico
P1, P2 P6 (59 mg)
Compuesto I
Compuesto II (4 mg)
Compuesto III (2.6 mg)
CC SiO2
CH2Cl2-An
CCDP
CH2Cl2-
AcOEt 1:1
P4 (28.4 mg) P3 (209 mg)
P6.4 (12 mg)
P8 (21 mg)
Compuesto V (5 mg)
Compuesto I
CCDP Hx- AcOEt 70:30
6 .0 0 8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0 1 4 .0 0 1 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0 3 0 .0 0
1 0 0 0 0 0 0
2 0 0 0 0 0 0
3 0 0 0 0 0 0
4 0 0 0 0 0 0
5 0 0 0 0 0 0
6 0 0 0 0 0 0
7 0 0 0 0 0 0
8 0 0 0 0 0 0
T im e -->
A b u n d a n c e
T IC : L E V -F 2 .D
Cromatografía de Gases
Cromatograma de la fracción F2
Se obtienen resultados del tipo..
Espectrometría de masas:
Fracciones A - D
Se obtienen resultados del tipo..
5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 0 6 0 00
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
m / z - - >
A b u n d a n c e
S c a n 9 5 4 ( 1 6 . 0 9 5 m i n ) : l e v - a l o r e n a . D ( - 9 1 2 ) ( - )6 9
4 1
9 51 3 7
1 7 5 2 0 3 3 4 12 3 1 3 6 7 4 1 02 7 3 2 9 9 4 3 6 4 6 2 4 8 9 5 2 1 5 5 0 5 8 7
5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 0 6 0 00
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
m / z - - >
A b u n d a n c e
# 1 5 8 5 0 4 : S q u a l e n e6 9
4 1
9 51 3 7
1 6 3 1 9 1 3 4 1 4 1 02 1 7 2 7 3 3 6 72 9 9
5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 0 6 0 00
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
m / z - - >
A b u n d a n c e
S c a n 9 5 4 ( 1 6 . 0 9 5 m i n ) : l e v - a l o r e n a . D ( - 9 1 2 ) ( - )6 9
4 1
9 51 3 7
1 7 5 2 0 3 3 4 12 3 1 3 6 7 4 1 02 7 3 2 9 9 4 3 6 4 6 2 4 8 9 5 2 1 5 5 0 5 8 7
5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 0 6 0 00
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
m / z - - >
A b u n d a n c e
# 1 5 8 5 0 4 : S q u a l e n e6 9
4 1
9 51 3 7
1 6 3 1 9 1 3 4 1 4 1 02 1 7 2 7 3 3 6 72 9 9
ppm (t1)1.001.502.002.503.003.504.004.505.00
ppm (t1)0.800.901.001.10
Espectro de RMN-1H del compuesto R3a en CDCl3
Espectros de RMN-1H
Se obtienen resultados del tipo..
Espectro de RMN-1H del compuesto R3b en CDCl3
ppm (t1)1.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00
1.0
0
4.2
6
3.0
8
1.0
0
1.0
0
3.9
6
3.0
4
1.2
2
ppm (t1)
6.506.606.706.806.90
Análisis de las señales del espectro RMN-1H
para la identificación de la molécula
R3b
-CH3
-HC=CH-
-CH2 -
ppm (t1)
2030405060708090100110120130140150160170180190
Espectro de RMN-13C de R3b en CDCl3.
R3b
-CH3
-CO- -C–O-
-C=C -
-CH2-
Análisis de las señales del espectro RMN-13C para la
identificación de la molécula
ppm (t2)1.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.50
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
ppm (t1)
Espectro de COSY de R3b.
R3b
Análisis de los experimentos bidimensionales, como el
COSY para determinar la conectividad en la molécula
ppm (t2)1.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00
25
50
75
100
125
150
175
ppm (t1)
Espectro de HMBC de R3b.
R3b
Análisis de otro experimento para determinar la conectividad,
el HMBC, un experimento bidimensionales heteronuclear.
deshidrovomifoliol
Con los experimentos anteriores, y utilizando el experimento
HSQC podemos llegar a establecer la conectividad y
desplazamientos de la molécula, logrando su identificación.
R3b
C 13C (ppm) 1H (ppm)
1 41.4 --
2 49.5 2.32 (1H, d, J = 17.2);
2.50 (1H, d, J = 17.4)
3 196.9 --
4 127.7 5.95 (1H, sa)
5 160.3 --
6 79.2 --
7 144.9 6.83 (1H, d, J = 15.7)
8 130.3 6.46 (1H, d, J = 15.7)
9 197.4 --
10 28.4 2.30 (3H, sa)
11 22.9 1.10 (3H, sa)
12 24.3 1.01 (3H, sa)
13 18.6 1.88 (3H, sa)
…Y así se logra el aislamiento e identificación de los
metabolitos presentes en los diferentes extractos de
alguna porción (como las hojas) de una especie
vegetal.
Ácido ursólico
blumenol A
Ácido rotungénico
deshidrovomifoliol
Hojas de Morinda panamensis:
fuente de metabolitos
secundarios de interés, con
estructuras químicas novedosas.
metabolitos con potencial
actividad biológica contra diversos
padecimientos.