Date post: | 03-Feb-2016 |
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TEMA 3. DIVISIÓN CELULAR Y CRECIMIENO
MIDIENDO EL CRECIMIENTO MICROBIANO
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Tomado de Luis Ramiro Caso Vargas en http://es.scribd.com/doc/2182004/Midiendo-el-crecimiento-microbiano
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Métodos para medir el crecimiento microbiano
CUANTIFICACIÓN DE LA MASA MICROBIANA
Balance de materia
Cuantificación de componentes celulares: Proteínas ADN ARN
Fte de C + Fte de N + Pi + O2 = Masa Celular + CO2 + H2O + Productos + Energía
Métodos Indirectos
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Determinación del consumo de nutrientes
Se selecciona un nutriente que no se parezca a ningún metabolito sintetizado como:
Fuente de Carbono Oxígeno Fosfato, Sulfato, Magnesio
Determinación de los Productos Formados
Esto depende del tipo de fermentación o producción de metabolitos:
CO2 Etanol Ácido Láctico Ácidos Orgánicos Colorantes Enzimas
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Volumen de células Los microorganismos del mismo tipo tienen tamaño similar bajo las mismas
condiciones de crecimiento.
Se centrifuga bajo condiciones Standard de velocidad y tiempo, utilizando tubos graduados en los que se ve el volumen por las células.
Viscosidad del cultivo No es un método muy utilizado.
Determinación de ATP El contenido de ATP es 1 mg. de ATP/gr. de células secas. Se determina por una
reacción catalizada por la enzima luciferasa, se genera un fotón. Se mide la emisión de luz en presencia de luciferina y O2, se puede determinar 10-12 gr. de ATP/lt.
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
CUANTIFICACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS
Recuento microscópico de microorganismos totales. Recuento en placa de microorganismos viables. Recuento microscópico de microcolonias. Contador electrónico de microorganismos totales.
CUANTIFICACIÓN DE LA MASA CELULAR
Peso seco. Turbidimetría.
Métodos Directos
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Cuenta en placa
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Muestra
1 ml
10-1
10-2
10-3
1 ml
1 ml
1 ml
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
Realizar diluciones
10-3
10-2
10-1
Método del Número más probable
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Tub
os
Dilución
10-1 10-2 10-3
1
2
3
4
5
3
12
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Análisis de resultados
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Cuenta directa al microscopio
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Turbidez
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Cantidad de metabolitos producidos. En la industria se utilizael azul de metileno paradistinguir almicroscopio de entrelevaduras vivas ymuertas.
Actividad metabólica
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Filtro de membrana
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
BIOLOGÍA DE PROCARIOTAS
Enzimas de restricción, esta describe las endonucleasas de restricción y cómo actúa cortando el ADN.
Se diagnostica en 4 pacientes la existencia o no de anemia falciforme mediante la presencia o ausencia en su ADN del gen codificador de la hemoglobina.
Típico caso de medicina legal o forense, en la que se han encontrado células sobre la victima que permite identificar al sospechoso.
Típico caso de investigación epidemiológica buscando poder comprobar el origen común o la relación de unas cepas de bacterias.
1.A. Análisis del polimorfismo
2.-Diagnóstico de laboratorio en medicina legal
3.-Diagnóstico de laboratorio de una enfermedad genética
4.Investigación epidemiológica comprueba el origen común o la relación de unas cepas de bacterias
Métodos moleculares
Métodos moleculares
Microorganismos aislados del suelo en los que se quiere determinar el género al que pertenecen.
7 identificación de m.o De muestras de agua.
similar al de muestras ambiéntales pero con dos bacterias desconocidas diferentes
8 identificación de secuenciación del ADN
Se trata de secuenciar un fragmento de ADN mediante secuenciación automática e ir a consultar a las bases de datos de genes a que m.o correspondiente.
6. Identificación de microorganismos de muestras ambientales
Métodos moleculares
9. Identificación mediante pcr
11. detección en aguas de bebida de patógeno“cryptosporidium parvum”
Aquí se utiliza el método del pcr para la detección, que es responsable del 30% de los brotes gastroenteritis.
12. Deteccion de virus entericos en mustras de agua
Se utiliza la tecnica de pcr para la deteccion en aguas de bebida de virus entericas
Esta técnica se utiliza diversos primers y la comprueban mediante la electroforesis con agarosa tamaño molecular.
Tecnología
genomica
Es el método en donde se determina únicamente ADN como análisis de estudio.“ por medio de electroforesis”
Western blot
Es un método especializado que determina proteínas.“Ejemplo la detección de VIH en la sangre.”
Dot blot y slot blot
método que determina únicamente ADN pero con la diferencia que no se somete en electroforesis. Este tipo de prueba es muy útil cuando se quieren estudiar gran número de muestras, pero tienen la limitante de no ofrecer información sobre el tamaño de las bandas del ARN hibridado.
Hibridación de colonias bacterianas
Es un método empleado para identificar colonias bacterianas que contengan determinada secuencia de ácidos nucleicos de interés.
Northern blot