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CURSO : Microbiología Animal
PROFESOR : TAFUR ZEVALLOS, Lizandro
ALUMNA : BONIFACIO ESPINOZA, Jherson
CICLO : 2014 - I
TINGO MARIA – 2014
I. INTRODUCCION
Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros microorganismos,
razón por la cual es difícil aislarlas. A menudo nuestro interés es caracterizar
una especie bacteriana, para lo cual debemos estar preparados para aislar,
cultivar e identificar a la misma. Si bien el aislamiento es un paso crucial en
este camino, comenzaremos examinando los medios de cultivo, ya que en
estos últimos se basan muchos de los principios del aislamiento.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias
nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. La
diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, por ello, la variedad
de medios de cultivo también lo es, no existiendo un medio de cultivo universal
adecuado para todos ellos.
El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos
es fundamental para seleccionar un medio de cultivo adecuado.
Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a
reproducir el ambiente natural en el que se desarrollan.
OBJETIVOS:
Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los
medios de cultivo.
Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación
del medio de cultivo en la práctica microbiológica.
Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir
de sus componentes individuales.
Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios
de cultivo como de los demás elementos utilizados en el laboratorio de
microbiología.
II. REVISION BIBLIOGRAFICA.
II.1. TIPOS BÁSICOS DE MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS DE CULTIVO: SÓLIDO Y LÍQUIDO
Una forma muy útil de poder aislar, identificar y conservar los
microorganismos es mediante el uso de medios de cultivo,
inicialmente ideados por Pasteur (que como ya sabemos se
considera el padre de la microbiología), quien se dio
cuenta que los microorganismos podían crecer en soluciones que
tuvieran azúcar y una fuente de nitrógeno.
Fue, Robert Koch, médico alemán dedicado al estudio de los
microorganismos y considerado uno de los autores de la “teoría
microbiana”, quien empezó a cultivar y aislar microorganismos. Koch,
buscando mejorar la técnica utilizada hasta ese momento, decidió
solidificar los medios de cultivo añadiéndoles que puedan haber en
una muestra (medio sólido)
MEDIOS SEMISÓLIDOS
Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un
agente solidificante en una proporción menor que para preparar
medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la movilidad
de las bacterias.
Según su utilización:
a) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes
mínimos para que pueda crecimiento de bacterias que no
necesiten requerimientos especiales. El medio más conocido de
agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al
caldo nutritivo. Otros representantes grupo son el agar tripticase
de soja, el agar Columbia, etc.
b) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las
sustancias nutritivas normales, serie de factores indispensables
para el crecimiento de microorganismos exigentes.
c) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el
crecimiento de ciertas bacterias una población polimicrobiana. El
fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente
de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio
selectivo es el caldo selenito, que favorecer el crecimiento de
salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
d) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un
medio selectivo impiden toda una población microbiana, se
denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían considerarse
variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios
inhibidores se consiguen habitualmente de sustancias
antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el
desarrollo de determinada.
e) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia
características diferenciar géneros o especies. La adición de un
azúcar fermentable o un sustrato metabolizable este fin. El medio
MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
gérmenes lactosa de aquellos que no lo hacen.
f) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar
alguna cualidad específica que para reconocer la identidad de un
microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos
asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato
específico que vaya a ser metabolizado que nos muestre el
resultado.
g) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran
cantidad de células a partir de un microorganismo aislado.
Seemplean en la obtención de vacunas, en la investigación y en
la industria. Los medios para la multiplicación suelen ser líquidos.
El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI), es medios.
h) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa
que, por diversas razones mantener. Fundamentalmente se
utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos
elLaboratorio de Microbiología.
II.2. ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN:
Según las sustancias que entren a formar parte en su composición,
los medios de cultivo pueden ser clasificados en:
Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los más
empleados se preparan a partir de tejidos animales, y más raramente
de vegetales. Su composición no es exactamente definida, y por
consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos
inconvenientes en condiciones experimentales, donde la
reproductibilidad no podrá ser exacta. En la práctica corriente estos
medios dan excelentes resultados y son los más empleados.
Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición
exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de
composición perfectamente definida.
Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento
exigidos para ciertos gérmenes hace que la fabricación de un medio
sintético para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara. En
este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un
extracto orgánico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos,
etc.).Ciertos gérmenes no crecen en ningún medio por muy
enriquecido que esté éste, haciéndolo exclusivamente en células
vivas con unas características determinadas. Ejemplos de este tipo
son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.
SEGÚN SU ORIGEN:
NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composición química no se conoce exactamente.
SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición
química definida cuali ycuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.
SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores
de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo,
como por ejemplo extracto de levadura.
II.3. MEDIOS DE CULTIVOS COMUNES.
II.3.1. Agar nutritivo:
El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria. Es muy util porque permanece solido incluso a
relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este
agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias
pequeñas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como
una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El agar
nutritivo contiene normalmente (w/v).
0.5 % Peptona 0.3 % extracto de carne/extracto de levadura 1.5 % agar 0.5% NaCl Agua destilada pH casi neutro (6.8) a 25 °C.
Agar sangre:
• Medio de cultivo sólido
• Medio general enriquecido de aislamiento
• Compuesto por Agar base
• Columbia+Sangre de carnero o caballo
• Se añade la sangre después de esterilizar
-Aislamiento de bacterias exigentes
-Detección de hemólisis Es un medio de aislamiento especialmente
diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes.
-Está adaptado para el cultivo de la mayoría de las especies bacterianas,
con independencia de su metabolismo.
Agar chocolate.
• Medio de cultivo enriquecido
Se añade sangre de carnero o caballo antes de esterilizar
• Aislamiento de bacterias exigentes
Estreptococo alfa-hemolítico en medio Agar sangre
El agar chocolate se usa para cultivo de bacterias respiratorias fastidiosas como por ejemplo Haemophilus influenzae
II.3.2. Agar Selectivo.
AGAR MACCONKEY
• Lleva cristal violeta, lo que hace que sea selectivo y diferencial
• Inhibe el crecimiento de m.o Gram +
• Las colonias sospechosas de Shigella no fermentan a la lactosa
• Son incoloras y transparentes
• Otros microorganismos que fermentan a la lactosa (coliformes) son
colonias rosas o rojizas( Ejem: E.coli).
AGAR HEKTOEN
• Medio sólido
• Medio de aislamiento Selectivo
• Ideal para Salmonella y Shigella
Colonias verde-azuladas con o sin punto negro Salmonella
AGAR SABOURAUD
• Aislamiento selectivo de levaduras y hongos
• El pH del agar es ligeramente ácido, lo que favorece el crecimiento
fúngico más que el crecimiento bacteriano.
AGAR UREA CHRISTENSEN
• Es un medio sólido, diferencial y de identificación
• Se utiliza para diferenciar bacterias que hidrolizan o no la urea
Resultados:
-Positivo: de color rosa contienen la enzima ureasa.
-Negativo: de color amarillo no contienen la enzima ureasa.
AGAR KIA
• Medio sólido diferencial
• Se utiliza para diferenciar bacterias gram – especialmente
enterobacterias
• En base a la fermentación de glucosa y lactosa
• Posee un color anaranjado.
• Utiliza como indicador de pH el rojo fenol .
RESULTADOS
• 1-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azúcares.2-Pico ácido/fondo
ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, y lactosa.
• 2-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa.3-4,4A-La presencia de
burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo
produce gas.5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Agar Salmonella Shigella
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial
Es utilizado para el aislamiento de especies de Salmonella y Shigella a
partir de muestras clínicas y de alimentos
El color del medio preparado es rojo-naranja
AGAR MANITOL SAL
Medio sólido
Medio de cultivo selectivo y diferencial
Aislamiento selectivo de estafilococos
. En este medio las colonias de otros microorganismos que fermentan la lactosa son colonias rojizas y mucosas
El color del medio preparado es rojo-naranjaLas colonias son transparentes translúcidas u opacas y suelen ser lisas
AGAR CETRIMIDA
Medio sólido
Medio de aislamiento Selectivo
Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas
aeruginosa y de otras especies del género Pseudomonas
Los estafilococos que fermentan el manitol se visualizan como colonias amarillas
rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,
rodeadas de una zona del mismo color o púrpura.
Las colonias características presentan una
pigmentación verde pálido espontánea y
fluorescencia verde bajo luz ultravioleta
III. MATERIALES Y METODOS
III.1. Lugar y fecha de la práctica
La presente práctica se realizó laboratorio de Sanidad Animal de la
Facultad de Zootecnia en la Universidad Nacional Agraria de la Selva
(UNAS) - Tingo María, Perú. Geográficamente, esta zona se
encuentra situada entre las cordilleras Central y Oriental. Esta
considerada como Bosque Tropical Húmedo Pre - montañoso,
ubicado en una latitud Sur 9° 17´ 58” y longitud Oeste 76° 01´ 07” a
665 m.s.n.m. El clima que presenta es tropical húmedo, la
temperatura media anual es de 24 °C.
III.2. Materiales
Placas petri
Agar universal
Agar Mac Conkey
Caldo de enriquecimiento
Baño maria
Mechero
III.3. Metodología
La práctica consistió en una breve explicación teórica por parte del
técnico encargado del laboratorio, adelantándonos de como iba a
realizarse la práctica, habiendo participación directa de los alumnos
para hacer la siembra de bacterias.
IV. RESULTADOS
Medio de cultivo
MOOS Importancia MOOS
E.M.B. Agar
Es utilizado para aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias
nutriciales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan
enfermedades. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea
(Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis)
y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre
otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran número de
especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades
respiratorias (Haemophilus influenzae, Klebsiella
pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades
urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae,
Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella
enteritidis, Salmonella typhi). Otros están asociadas a
infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii).
Mac Conkey agar
Se utiliza para el aislamiento de basilos Gram negativos de
fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.
Estafilococo 110 Agar
Para el aislamiento y diferenciación preseuntiva de
estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la fermentación de manitol y la hidrólisis de gelatina, a partir
de alimentos y otras muestras.
Staphylococcus (del griego σταφυλή, staphylē, "racimo de
uvas" y κόκκος, kókkos, "gránula") es un género de bacterias
estafilococáceas de la clase Cocci. Comprende microorganismos que están presentes en la mucosa y en la piel de los humanos y de otros
mamíferos y aves, incluyendo a 35 especies y 17 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los
humanos. Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedades en humanos son
Staphylococcus aureus (el miembro más virulento y conocido
del género), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus
saprophyticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus
haemolyticus
Sal y manitol agar
Medio de cultivo selectivo y diferencia, utilizado para el
aislamiento y diferenciación de estafilococos.
Caldo tetranionato
Utilizado para el enriquecimiento selectivo de
salmonella spp. A partir de heces, orina, alimentos y otros
materiales de importancia sanitaria.
Salmonella shigella agar
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. Y de algunas especies de
Shigella spp. A partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su
presencia.
Mueller hinton agar
Ha sido recomendado universalmente para la prueba
de sensibilidad a los antimicrobianos.
Un antimicrobiano es una sustancia que mata o inhibe el crecimiento de microbios, tales
como las bacterias, hongos, parásitos o virus. Basado en ello, los siguientes pueden referirse a
agentes microbianos: Antibióticos, Antifúngicos, Antiparásitos entro
los cuales están los: Antihelmínticos, Antivirales.
Urea
Medio utilizado para la identificación de
microorganismos en base a la actividad ureásica. Es
particularmente útil para diferenciar Proteus spp. De
otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Las infecciones de vías urinarias son causadas por una especie
bacteriana única en más de 95% de los casos. Existe una gran
diferencia entre la flora bacteriana urinaria en los pacientes con un episodio inicial y la observada en
los pacientes con infecciones recurrentes. Escherichia coli es
común en el primer grupo, Proteus
VI. DISCUSION
En la preparación de medios de cultivos en forma líquida (caldo nutritivo) y
sólida (gelificantes) se trata es de conseguir un medio que reúna las
condiciones fisiológicas necesarias para que las células se desarrollen. Los
parámetros más importantes a tener en cuenta son la presencia de agua, la
temperatura, el pH y el oxígeno. Los medios de cultivo pueden ser sólidos,
semisólidos o líquidos, con composición química conocida o indefinida.
VII. CONCLUCION
Al finalizar el trabajo práctico estamos en capacidad y condiciones de: Preparar
adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de
medios de cultivo deshidratados. El medio de cultivo líquido (caldo nutritivo) y
gelificante fue preparado específicamente para el aislamiento de salmonella
shigella bacteria estudiada y posteriormente aislada.
VII. BIBLIOGRAFIA
BANKS W. HISTOLOGÍA VETERINARIA APLICADA. Editorial el manual
moderno. México. 1986
Biblioteca de Consulta Microsoft ® Encarta ® 2005 © 1993-2004 Microsoft
Corporation. Reservados todos los derechos.
http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf
http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Hall/3081/natural/caldo.htm