VibrioVibrio choleraecholerae : diagnóstico: diagnósticoy caracterizacióny caracterización
María Rosa ViñasInstituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS “Carlos G.
Malbrán”Servicio Enterobacterias
INEI – ANLIS “Carlos G. Malbrán”
setiembre 2014, Buenos Aires setiembre 2014, Buenos Aires Especialización en Bacteriología Clínica – UNNE11-12 de Junio 2015
� Bacilos Gram-negativos, 0,5 a 0,8 x 1,4 a 2,6 µm
� Anaerobios facultativos
Flia. Vibrionaceae(gen. Aeromonas ,Plesiomonas y Vibrio )
Características del género Características del género VibrioVibrio
� Móviles
� Oxidasa positivos, excepto V. metschnikovii
� Su crecimiento es estimulado por ClNa
(V. cholerae crece en ausencia de NaCl)
� Su metabolismo es fermentativo, pueden fermentar glucosa entre otros sustratos
�� VibrioVibrio choleraecholerae es el agente causal del cólera, enfermedad infecciosa
conocida desde la antigüedad, asociados a los serogrupos
O1 y O139O1 y O139
� El Reglamento Sanitario Internacional exige la declaración de los casos de cólera a la OMS.Las cifras se publican en el Weekly Epidemiological Record ( mortalidad 2,5% )
http://www.who.int/topics/cholera/surveillance/es/
VibrioVibrio choleraecholeraeClasificación por Clasificación por serogruposserogrupos
� Vibrio cholerae O1asociado a
cólera epidémico(toxina de cólera)
• Serotipos: Ogawa, Inaba ,
raramente, Hikojima
�Vibrio choleare O139
� Vibrio cholerae no-O1 no-O139;asociado a gastroenteritis, diarrea moderada hasta cuadros severos ó con sangre, sepsis en inmunocomprometidos y asociado a patología hepática.
(toxina de cólera) o Biotipos: Clásico y El Tor
Manifestaciones Clínicas Manifestaciones Clínicas V. V. choleraecholerae O1 y O139O1 y O139
• La infección puede ser asintomática ó presentar distinta gravedad, hasta la forma más severa, cólera: diarrea acuosa (deposiciones como “agua de arroz”), vómitos y deshidratación con perdida de electrolitos.
• Aproximadamente 1 / 20 personas infectadas • Aproximadamente 1 / 20 personas infectadas puede tener la enfermedad grave.
• La pérdida rápida de líquidos corporales lleva a la deshidratación y a la postración. Sin tratamiento adecuado, puede ocurrir la muerte en horas
• Dosis infectiva: 103 a 106 microorganismos
• Período de incubación: 1 a 3 días
� Habitualmente se aísla de casos esporádicos de diarrea y de infecciones extra-intestinales (j contacto con el ambiente acuático): infección de heridas, oídos, celulitis, apendicitis)
� Menos frecuente contagio de persona a persona
Manifestaciones Clínicas Manifestaciones Clínicas V. V. choleraecholerae nono--O1, noO1, no--O139O139
� Se han descripto casos de bacteriemia especialmente en pacientes con patología hepática (cirrosis) y/ó inmunosuprimidos (HIV, leucemia, desnutridos)
� Las infecciones por V. cholerae no-O1, no-O139 se presentan a lo largo de todo el año, aunque son más frecuentes en los meses más cálidos.
� Se han reportado brotes de diarrea causados por este microorganismo en diferentes regiones del mundo, incluyendo Argentina
Epidemiología Epidemiología V. V. choleraecholerae• V. cholerae es un habitante autóctono de
ecosistemas acuáticos
• Sensible a las temperaturas y nutrientes
• Patrón cíclico de brotes: florecimiento de copépodos-plancton
• Las personas pueden infectarse por la ingesta de • Las personas pueden infectarse por la ingesta de agua o alimentos contaminados: mariscos, ostras, mejillones crudos ó tratamiento calor mínimo, concentran hasta 300 veces / 24 hs las bacterias.
• Durante una epidemia de cólera, la enfermedad puede diseminarse rápidamente en áreas con tratamientos inadecuados de agua potable y pobres condiciones sanitarias..
Océano Atlantico Sur
San Miguel de Tucumán
Río Lules
Río Salí
Banda del Río Salí
Canal Norte
A
Vigilancia de V. cholerae de origen ambiental de plataforma bonaerense y ríos de Tucumán
Figure 1. Mapa de Argentina y los sitios de muestreo: Estación marina , agua de la costa del Atlántico y del area
V. cholerae no O1 y V. cholerae O1 (CT -)
Uruguay
Argentina
Estación marina
A
A
BC
Río de La Plata
Atlántico y del area Estuarial del Río de la Plata y agua frescade los ríos de Tucumán.(SG Fraga, 2007)
� Toxina de cólera (cholera toxin, CT)
Factores de virulencia asociados al Factores de virulencia asociados al cólera cólera V. V. choleraecholerae O1 y O139O1 y O139
� Factor de colonización
(toxin-coregulated pilus, TCP)
Toxina de cólera Toxina de cólera ––mecanismo de acciónmecanismo de acción
� Los genes que codifican la toxina CT (ctxAB) se encuentran dentro del genoma de un bacteriófago lisogénico filamentoso conocido
Toxina de cólera Toxina de cólera ––codificación genéticacodificación genética
lisogénico filamentoso conocido como CTXΦ.
� Este fago se encuentra integrado en el genoma de V. cholerae
en uno (El Tor) o dos loci (Clásico)
APA: 6 - 8 hs 37º C
Agar TCBS / TSA: 18hs 37ºC
Muestra de materia fecal en Cary Blair
Aplicación de PCR en el Flujograma de aislamiento de Aplicación de PCR en el Flujograma de aislamiento de V. V. choleraecholerae a partir de materia fecal a partir de materia fecal
PCR V. cholerae/ctxA/tcpA El Tor
Tamizaje por PCR
Extracción de ADN, 10´100ºC
bioq. mínimas
Diagnóstico presuntivo
V. cholerae O1, O139 ó no-O1 no-O139
Kligler-LIA-Indol de Triptofano-Estría TSA
Oxidasa, Pruebas bioquímicas complementariasSerotipificación O1 y O139
PCR O1 y O139
ctxA, tcpA El Tor (PCR)
24-48 hs
48-72 hs ctxA (+) y/ó tcpI (+)
PCR stn/tcpI
PCR tcpA clásicoPCR ctxB, PCR-MAMA
Subtipificación molecular PFGE, MLST, ATB, Secuenciación genómica
bioq. mínimas
+ 4hs
Diagnóstico confirmado
�Identifica si en la muestra hay V. cholerae
�Identifica si hay aislamientos que poseen ctxA, gen de la toxina de coléra (CT)
PCR Múltiple PCR Múltiple V. V. choleraecholerae//ctxActxA//tcpAtcpA
�Identifica si hay aislamientos que codifican para la proteína estructural de la fimbria TCP codificada por tcpA. Solamente reconoce el alelo El Tor
�Detecta los serogrupos O1 y O139 que son los que están asociados, por lo gral, a las cepas causales de cólera (productores de CT)
PCR Múltiple O1/O139PCR Múltiple O1/O139
CT)
�Permite asignar el serogrupo a los aislamientos autoaglutinables
�Atención: hay cepas O1 y O139 que no son productoras de CT, y pueden aparecer cepas de otros serogrupos que si lo son.
Caracterización de aislamientos por Caracterización de aislamientos por PCRPCR
Detección de factores de virulencia
* Hay diferentes factores de virulencia que pueden explicar la patogenicidad de cepas CT negativas de V. cholerae .
ToxR
HlyA/VCC
RTX
Neuraminidasa
Sistema de secreción de tipo III (vcs)
NAG-ST (codificada por el gen stn/sto)
tcpI (regulador del factor de colonización TCP)
Ampliamente distribuídos en V. cholerae
Rol patogénico aún
no establecido?
Colonias características de Colonias características de
VibrioVibrio choleraecholerae en en agaragar TCBSTCBS
Caracteres bioquímicos de Caracteres bioquímicos de VibrioVibrio
choleraecholeraeOxidasa 100 %Kligler K/A, no gas, no SH2 TSI A/A, no gas, no SH2 Glucosa (prod. de ácido) 100 %Sacarosa (prod. de ácido) 100 %
Lisina 99% Arginina 0 %Arginina 0 %Ornitina 99 %
Crec. en caldo al 0% NaCI 100 % Crec. en caldo al 1% NaCl 100 %Crec. en caldo al 6% NaCl 53 %Crec. en caldo al 8% NaCl 1 %Crec. en caldo al 10% NaCl 0 %
Roja de Metilo (1% Na CI) 99 %Voges-Proskauer (1% Na CI) 75 %
V.
cholerae
V.
Alginoly
ticus
V.
fluvialis
V.
furnisii
V.
hollisae
V.
Metschni
kovii
V.
mimicus
V.para-
haemoly-
ticus
V.
vulnificus
Aeromonas
hydrophila
Plesiomonas
shigelloides
Agar TCBS Col.amar. Col.amar Col.amar Col.amar No crece Col.amar Col.verde Col.verde Col.verde Col.amar Col.verde
Oxidasa + + + + + - + + + + +
Arginina dehidrolasa
(1%NaCl)
- - + + - + - - - + +
Ornitina decarboxilasa
(1%NaCl)
+ + - - - - + + 55% - +
Lisina decarboxilasa
(1%NaCl)
+ 50% - - - 35% + + + + +
Caracteres bioquímicos de miembros de la Caracteres bioquímicos de miembros de la FamiliaFamiliaVibrionaceaeVibrionaceae y géneros relacionadosy géneros relacionados, ,
patógenos para el hombrepatógenos para el hombre
(1%NaCl)
Crecimiento
en:
0% + - - - - - + - - + +
1% + + + + + + + + + + +
6% 53% + + + 83% 78% 49% + 55% + -
8% - + 71% 78% - 44% - 80% - - -
10% - + - - - - - - - - -
Acidificac.
a partir de:
sacarosa + + + + - + - - - + -
Celobiosa - - 39% - - - - - + - -
Lactosa - - - - - 50% - - 85% - -
Arabinosa - - + + + - - + - 84% -
Manosa 78% + + + + + + + + + -
Manitol + + + + - + + + 45% + -
Voges-
Proskauer75% + - - - + - - - + -
Col. amar.: colonia amarilla / Col. Verde: colonia verde. TCBS: agar Tiosulfato Citrato sales Biliares Sacarosa
Pruebas
bioquímicas
V. cholerae Aeromonas Plesiomonas
Sacarosa + + -
Inosita - + +
Manita + + -
Diferenciación entre Diferenciación entre VibrioVibrio choleraecholerae y otros y otros
géneros géneros GramGram--negativos, oxidasa positivosnegativos, oxidasa positivos
Manita + + -
Arginina
dehidrolasa- + (excep. A.veronii biovar
veronii (-)
+
Lisina
decarboxilasa+ + (excep. A.caviae (-) +
Ornitina
decarboxilasa+ - (excep. A.veronii biovar
veronii (+)
+
V. V. choleraecholerae O1O1Epidemiología en América LatinaEpidemiología en América Latina
� Epidemia (séptima pandemia) causada por Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor, los aislamientos fueron CT+ (ctxA, tcpA El Tor )
� Los casos de cólera se presentan asociados a brotes epidémicos y no se considera a la región
.brotes epidémicos y no se considera a la región endémica para esta enfermedad.
� En los últimos años sólo se han reportado casos de cólera asociados a:
� Brote epidémico Paraguay 2009;
� Brote epidémico Haití 2010; República Dominicana; Cuba; México. Reporte OPS-OMS, 2014.
.
� 1991.Creación de Red de Laboratorios de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria.
� LRN: caracterización fenogenotípica de aisl de V. cholerae derivados en el marco de la RND:
� Pruebas bioquímicas, ELISA para detección de CT � PCR ctxA tcpA alelo El Tor, PCR O1/O139� Subtipificación molecular: RAPD, PFGE: creación BDN de V. cholerae en el marco de la Red PulseNet de AL y C.V. cholerae en el marco de la Red PulseNet de AL y C.
� Desde 1991, programa activo de vigilancia:� V. cholerae O1 CT asociados a casos de cólera� V. cholerae O1 VNC del ambiente (ríos , estuarios)� V. cholerae no-O1no-O139 asociados a casos de
gastroenteritis, sepsis en pacientes con patología hepática y/ó oncológica, infecciones de heridas y reservorios ambientales.
SubtipificaciónSubtipificación de de V. V. choleraecholerae O1 por O1 por Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE)Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE)
V. choleraeO1 CT+
Clon epidémico 90´(1992-1998)
Dice (Opt :1.50%) (Tol 1. 5%-1.5%) (H>0.0% S>0. 0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
10
0
95
90
85
80
75
PFGE-SfiI
58H/93 ST29161
CH1502
CH2507
J18/W
ST10568
T227/W
SF336
Chaco 2005
V. choleraeO1 CT-
SF336
CH2283/05
F99H
SF1902
SF366
RB-1
SJ179/W
T717
T12550
T13074
T2220
T522
T5957
T610
T612/W
T777
T1437
Variante Tucumán
90’ (1994-1998)
• 2010, Haití, brote de cólera; al 2014: 55.736 casos, 431 muertes relacionada con var V. ch El Tor O1 de Asia ( Ali; 2011 ).
• * Vibrio cholerae O1 Ogawa, híbrido:
• Biotipo El Tor, CT alelo Clásico, perfil de R: S a tetraciclina, ciprofloxacina y kanamicina, R a trimetoprima-sulfametoxazol, furazolidona, ácido nalidíxico, sulfisoxazol y estreptomicina
SITUACION A NIVEL REGIONAL Cólera en HaitíCólera en HaitíFuente: CDC, USA
* 2010-2014 Diseminación a Rep. Dominicana, Florida en USA, Venezuela, Cuba y
México(OPS, 2014)
� El ecosistema de la Región de América C y El Caribe reservorios de genes diferentes a los de cólera epidémicode los 90´; CT biotipo Clásico, elementos genéticos
integrativos STX.
*Incorporar MAMA -PCR en el flujograma diagnóstico; Morita et al.,2008.
Cólera en Haití: comparación con aislamientos de Cólera en Haití: comparación con aislamientos de América Latina (brotes epidémicos 1993América Latina (brotes epidémicos 1993--1998)1998)SfiSfiII--PFGE en marco PFGE en marco PulseNetPulseNet Internacional Internacional
.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
100
90
80
PFGE-SfiI
SF336
ST29161
CH1502
CH2507
ST10568
CDC__2010EL-1788
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
.
.
.
.
.
1999-12-17
1993-02-02
1994-02-15
1997-07-25
1995-03-08
Nº Aislamiento País Fecha de
aislamiento
.CDC__2010EL-1788
450
CH2283
SF1902
SF366
T12550
T13074
T2220
T522
T5957
T610
T777
T1437
T717
Paraguay
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
Argentina
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
2009-03-10
2005-10-01
1998-02-23
1999-12-17
1995-01-03
1994-12-30
1994-02-25
1998-01-20
1993-12-03
1994-01-22
1994-01-28
1997-02-10
1998-01-30
.
V. V. choleraecholerae O1O1Epidemiología en América LatinaEpidemiología en América LatinaParaguay 2009Paraguay 2009� 2009: brote de cólera en Paraguay, afectó integrantes de comunidad indígena en zona de Chaco Paraguayo
..
Fuente: Dra. Natalie Weiler Gustafson. Laboratorio Central de Salud Pública de Paraguay
V. V. choleraecholerae O1O1Brote de cólera en Paraguay 2009 (ISP)Brote de cólera en Paraguay 2009 (ISP)� Las comunidades indígenas carecen de agua potable, la fuente
de abastecimiento de agua es a través de un reservorio ( tajamar) y
se distribuye a través de drenajes subterráneos a otros reservorios
mas pequeños (pozo o aljibes).
� No cuentan con desagües ni letrinas en las comunidades
Fuente: Dra. Natalie Weiler Gustafson. Laboratorio Central de Salud Pública de Paraguay
V. V. choleraecholerae O1O1Brote de cólera en Paraguay 2009Brote de cólera en Paraguay 2009� V. cholerae O1 Ogawa de un paciente y de agua de tajamar.
Se compararon entre sí y con aislamientos Vc no-O1, no-O139 de agua de tajamar
� Los dos aislamientos de Vibrio cholerae O1 (caso índice y de agua) mostraron perfiles similares, con dos bandas claras de diferencia con la primera enzima SfiI.
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
10
0
80
PFGE-SfiI
789
861
797
869
870
868
450
862
796
867
920
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Paraguay
Filadelfia
Filadelfia
Filadelfia
Filadelfia
Filadelfia
Estancia Loma Plata
Loma Plata
Parque de los recuerd
Tagua
Parque de los recuerd
Dos lagunas
Estancia San Ramón
Ebetogue
Loma plata
Caraya de los Ayoreo
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Human
Environment
Environment
Environment
Environment
Water
Water
Water
Water
Water
Water
Water
Water
Water
Water
2009-04-20
2009-04-30
2009-04-21
2009-05-03
2009-05-03
2009-05-02
2009-03-10
2009-04-30
2009-04-21
2009-05-02
2009-05-10
PYKZGS12.0003
PYKZGS12.0004
PYKZGS12.0005
PYKZGS12.0006
PYKZGS12.0006
PYKZGS12.0008
PYKZGS12.0001
PYKZGS12.0002
PYKZGS12.0009
PYKZGS12.0010
PYKZGS12.0011
Cepa Nº País Estado Ciudad Origen Muestra Fecha Patrón de PFGE
Cuadro Rojo: Aislamientos de Vibrio cholerae O1
Normativa para la Notificación a través del Sistema Nacional de Vigilancia de la Salud
(SNVS), Módulo SIVILA, Diarreas bacterianas
En qué casos investigar Vibrio cholerae?
1. Todo caso clínicamente 2. Uno de cada 5 coprocultivo sospechoso de cólera. (nodo de SIVILA)
NOTIFICACION INMEDIATA EN FICHA INDIVIDUALDE CÓLERA AL SNVS- SIVILA
Notificación en Evento Diarreas Bacterianas
Derivación al LNR, Flujograma para identificación y caracterización de
V. cholerae, análisis y notificación de resultados
� En el año 2014 el porcentaje acumulado de muestras estudiadas para cólera fue del 30,72% , requisito de estudiar para V. cholerae 1 cada 5 coprocultivos .( Plan de abordaje integral de la enfermedad diarreica aguda y plan de contingencia de cólera por V. cholerae) .
� Sin embargo, si bien se cumple con la meta a nivel nacional, a � Sin embargo, si bien se cumple con la meta a nivel nacional, a nivel provincial solamente siete provincias cumplen con el requisito de estudiar 1 cada 5 diarreas.( el resto lo cumple de manera deficiente o no lo cumple).
SIVILA, 2014
VIGILANCIA LABORATORIAL DE INFECCIÓN POR Vibrio Cholerae DESDE EL LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL ( JAM, 2014 )Tabla 1. Distribución de genotipos en aislamientos de V. cholerae ( 2003 – 2014 )
Genes de identificación Genes de virulencia
No.aislamientos
(n; %)
Origen
(n)
V.cholerae O1/O139
ctxA tcpA tcpI stn H1 A2
V. cholerae no O1 no O139 - - - - 465; 97,6 125 340 V. cholerae no O1 no O139 - - - + 3; 0,63 0 3 V. cholerae no O1 no O139 + - + - 1; 0,21 1 0 V. cholerae no O1 no O139 - - + - 2; 0,42 2 0 V. cholerae O1 + + + - 1; 0,21 1 0 V. cholerae O1 - - + - 2; 0,42 2 0 V. cholerae O1 - - - - 1; 0,21 1 0 V. cholerae O139 V. cholerae O139 - - - - 1; 0,21 1 0 N Total 476; 100 133 343 1H: human;
2A: Ambiental
� La mayoría de los aislamientos fueron confirmadosfenogenotípicamente como Vc no-O1 no-O139 negativos para CT y TCPalelo El Tor
� excepto 1 Vch O1 CT TCP alelo El Tor de un caso de cólera, 2005 (H)2 Vch no-O1 no-O139 TCP, un Vc no-O1 no-O139 CT TCP (H)3 Vch O1 CT negativo (H)1 Vch O139 CT negativo (H)3 Vch no-O1 no-O139 STN (A)
�� 2014 2014 V. chV. ch O1 y O139O1 y O139,, notificados por el notificados por el
laboratorio en el marco de la vigilancia de diarreaslaboratorio en el marco de la vigilancia de diarreas
� SE 1 y 5, 2014 Dos casos V. ch O1 de Tucumán
un caso V. ch O139 de Tucumán
un caso V. ch O1 de Jujuy
� Casos de diarrea sanguinolenta (2),
� diarrea prolongada (1) y diarrea acuosa (1).
� Sensibles a atb. Los perfiles genéticos:
V. cholerae O1 ctxA (-), tcpA El Tor (-) , tcpI ( + ) dos casos
V. cholerae O1 ctxA (-), tcpA El Tor (-) , tcpI ( - ) un caso
V. choleraeO139 ctxA (-),tcpA El Tor (-), tcpI (-) un caso
� Antecedentes epidemiológicos
de viaje a un balneario del río,
barrio con condiciones deficientes sanitarias,
asistencia a una pileta de natación días previos
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
100
90
80
70
PFGE-SfiI
CH1502
CH2507
J18/W
ST10568
ST29161
CH2283
VC182/14
VC188/14
VC920/09
VC923/09
Me11844
Me160
SO149
Vc4
Vc44
BA312
Vc602/08
Chaco
Chaco
Jujuy
Salta
Santa Fe
Chaco
Tucumán
Tucumán
Chaco
Chaco
Mendoza
Mendoza
Salta
Córdoba
Córdoba
Buenos Aires
Santa Fe
Human
Human
Enviro.
Human
Human
Human
Human
Human
Enviro.
Enviro.
Human
Human
Human
Human
Human
Human
Human
1994-02-15
1997-07-25
1992-04-07
1995-03-08
1993-02-02
2005-10-01
2014-01-26
2014-01-27
2008-12-10
2009-03-17
1996
1995
2000
1994
1994
1994
2008-04-04
ARKZGS12.0017
ARKZGS12.0017
ARKZGS12.0017
ARKZGS12.0017
ARKZGS12.0017
ARKZGS12.0018
ARKZGS12.0110
ARKZGS12.0111
ARKZGS12.0116
ARKZGS12.0116
ARKZGS12.0025
ARKZGS12.0025
ARKZGS12.0027
ARKZGS12.0049
ARKZGS12.0049
ARKZGS12.0050
ARKZGS12.0062
O1
O1
O1
O1
O1
O1
O1
O1
Non-O1, O139,.
Non-O1, O139,.
Non-O1, O139
Non-O1, O139
O49
Non- O1, O139
Non- O1, O139
Non- O1, O139
Non- O1, O139
Dendograma de relación genética de una selección de aislamientos de Vibrio cholerae de Argentina, analizados con la enzima SfiI, con el coef. Dice.
V ch O1 epidémico
V ch O1 2005 y 2014
BDN: 237 aislamientos de V. cholerae
SfiI: 218 patrones, NotI: 124 patrones
Similitud: 85,7% (SfiI)
con cepa O1 epidémica
Similitud: 61,5% (SfiI) Vc603/08
CF17170
VC465/11
VC181/14
VC704/14
VC707/14
SO47/W
Me3
SO28W
T12550
T13074
T2220
T612/W
VC591/14
Vc2037/07
BA115018
VC575/13
SO34
Pilcomayo
VC849/07
J31/W
VC183/14
ST2761
VC491/14
VC308/11
Santa Fe
Buenos Aires
Buenos Aires
Tucumán
Chaco
Chaco
Salta
Mendoza
Salta
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Tucumán
Jujuy
Tucumán
Buenos Aires
Buenos Aires
Salta
Formosa
Tucumán
Jujuy
Tucumán
Salta
Buenos Aires
Buenos Aires
Human
Human
Human
Human
Enviro.
Enviro.
Enviro.
Human
Enviro.
Human
Human
Human
Enviro.
Human
Human
Human
Human
Human
Enviro.
Human
Enviro.
Human
Human
Human
Human
2008-04-04
2002
2011-02-21
2014-01-23
2012-01-01
2012
2000
1995
2000
1995-01-03
1994-12-30
1994-02-25
1994-03-14
2014
2007
2002
2013-04-14
2000
1992
2007
2000
2014-01-24
1993
2014-02-26
2011-02-02
ARKZGS12.0062
ARKZGS12.0010
ARKZGS12.0102
ARKZGS12.0114
ARKZGS12.0131
ARKZGS12.0132
ARKZGS12.0015
ARKZGS12.0044
ARKZGS12.0028
ARKZGS12.0041
ARKZGS12.0041
ARKZGS12.0041
ARKZGS12.0041
ARKZGS12.0124
ARKZGS12.0009
ARKZGS12.0071
ARKZGS12.0117
ARKZGS12.0070
ARKZGS12.0053
ARKZGS12.0012
ARKZGS12.0091
ARKZGS12.0113
ARKZGS12.0094
ARKZGS12.0121
ARKZGS12.0090
Non- O1, O139
O36
Non-O1, O139,.
O139
Non-O1, O139
Non-O1, O139
O37
Non-O1, O139
O14
O1
O1
O1
O1
O1
Non-O1, O139
O111
Non-O1, O139,.
Non- O1, O139
Non- O1, O139
Non- O1, O139
Non- O1, O139
Non-O1, O139
O139
Non-O1, O139
Non-O1, O139
Vch O1 var Tucumán Vch O1 Jujuy 2014
� MLST: Ch 2283 mismo grupo clonal que Vc O1 epidémicas no así la Variante Tucumán. S.G. Fraga, 2008
Similitud: 61,5% (SfiI)
con la “Var Tucumán”
Cepas (n) Fecha derivación lugar de procedencia Origen Tipo de muestra Caracterización fenogenotípica ( pruebas bioquímicas-PCR)
8 2008 - 2009 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna, río Negro V. cholerae no-O1 no-O139 ctx- tcpA El Tor - stn - (8)
3 oct-13 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna V. cholerae no-O1 no-O139 ctx - tcpA El Tor - stn - (3)
6 abr-14 Resistencia, Chaco ambiental agua de laguna, río Negro V. cholerae no-O1 no-O139 ctx - tcpA El Tor - stn - (4)
V. cholerae no-O1 no-O139 ctx- tcpA El Tor - stn + (2)
N= 17
Tabla. Aislamientos de V. cholerae no-O1 de origen ambiental del Chaco 2018-2014
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]
PFGE-SfiI
100
80
PFGE-SfiI
VC708/14
VC709/14
VC704/14
VC707/14
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Environment
Environment
Environment
Environment
2009-10-01
2012-01-01
Lagoon
Lagoon
River water
River water
ARKZGS12.0130
ARKZGS12.0136
ARKZGS12.0131
ARKZGS12.0132
2014-04-21
2014-04-21
2014-04-21
2014-04-21
Figura 1- Dendograma con el coeficiente de Dice con la enzima SfiI de los aislamientos ambientales de Vibrio cholerae no-O1 no-O139 de Chaco.
VC707/14
VC1047/13
VC1049/13
VC706/14
VC1048/13
VC919/09
VC922/09
VC920/09
VC923/09
VC924/09
VC921/09
VC1379/08.
VC705/14
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Chaco
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Resistencia
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
Environment
2010-05-05
2013-03-12
2012-01-09
2012-11-19
2008-09-30
2009-03-05
2008-12-10
2009-03-17
2009-04-20
2009-02-23
2008-05-30
2012-01-09
River water
Lagoon
Lagoon
Lagoon
Lagoon
River water
Lagoon
Lagoon
Lagoon
Lagoon
Lagoon
River water
Lagoon
ARKZGS12.0132
ARKZGS12.0129
ARKZGS12.0126
ARKZGS12.0129
ARKZGS12.0128
ARKZGS12.0122
ARKZGS12.0119
ARKZGS12.0116
ARKZGS12.0116
ARKZGS12.0116
ARKZGS12.0123
ARKZGS12.0093
ARKZGS12.0135
2014-04-21
2013-10-24
2013-10-24
2014-04-21
2013-10-24
2008-08-11
2009-05-04
2009-05-04
2009-05-04
2009-05-04
2009-05-04
2008-07-17
2014-04-21
Aislamientos de V. cholerae no-O1 de agua de diferentes lagunas 2008-2009
Aislamientos de V. cholerae no-O1 stn+ de agua del río Negro 2014
No fueron identificados anteriormente en la BDN de V. cholerae
� Debido a que la resistencia a los antimicrobianos
ha ido en aumento en muchas partes del mundo,
es importante determinar la sensibilidad a los
antimicrobianos de Vibrio cholerae O1, al inicio de la
epidemia y monitorearla periódicamente.
� Los puntos de corte para interpretar las zonas de inhibición paraV. cholerae O1 fueron establecidos por la CLSI
Condiciones del test: Medio: Agar Mueller-Hinton
Inóculo: Método de crecimiento previo o suspensión de colonia directa, equivalente al estándar 0.5 de Mc
Farland. Preparar el inóculo en 0.85% NaClIncubación: 35 ± 2 ºC, aire, 16-18 horas.Control de Calidad: E.coli ATCC 25922 Servicio ANTIMICROBIANOS
INEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran
Esquema de colocación de discos para la determinación de la sensibilidad a los
antimicrobianos por el método de difusión en V. cholerae.
TET
TMS
NAL CMP
CIP
AMP
TMS: trimetoprima/sulfametoxazol, NIT: nitrofurantoína/furazolidona, AMP:
ampicilina, CIP: ciprofloxacina; TET: tetraciclina; CMP: cloranfenicol, NAL: ácido
nalidíxico.
NIT
Servicio ANTIMICROBIANOSINEI – ANLIS Dr Carlos G. Malbran
� Es importante mantener la vigilancia de V. cholerae
� Para detectar tempranamente la aparición de casos de cólera asociados a V. cholerae O1 u O139 toxigénicos.
� Para identificar V. cholerae no-O1, no-O139 asociado a casos y brotes de diarrea.asociado a casos y brotes de diarrea.
� Para monitorear la emergencia de nuevas cepas con potencial patogénico y epidémico
� La incorporación de técnicas moleculares de diagnóstico y subtipificación aportan sensibilidad y especificidad parala vigilancia de este patógeno.
DesafiosDesafios futurosfuturos
�Transferir PCR para caracterización completa de V. cholerae inclusive para detección de la variante (LRN).
� Desde LRN secuenciación genómica para análisis de cepas emergentes con características nuevas de virulencia
AgradecimientosAgradecimientos
� Servicio Enterobacterias
� Servicio Fisiopatogenia, Antimicrobianos.
� Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP). Dra. Costagliola
� Universidad Nacional de Tucumán� Hospital del Niño Jesús de Tucumán� UNNE, Chaco
� Red Nacional de Laboratorios de Diarrea y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria