ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS
M. Judith Mora R. Jefe Subdepto. Enfermedades Virales ISP
METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL A. DETECCION DE VIRUS O PRODUCTOS VIRALES
•Aislamiento viral en cultivos celulares. Enterovirus •Inoculación en animales de laboratorio: Rabia •Inoculación en huevos embrionados: Influenza
B. DETECCIÓN DIRECTA DE VIRUS O PRODUCTOS VIRALES.
•Inmunofluorescencia (IF).V Respiratorios •Inmunoensayo enzimático (ELISA). Rotavirus
C. DETERMINACION DE ANTICUERPOS /Ag Métodos serológicos (sueros pareados o muestra única)
•Inhibición de la Hemoaglutinación (IHA). Influenza
•Inmunofluorescencia (IF). VIH •ELISA (IgM –IgG) Dengue, Hanta, etc.
D. DETECCION DE MATERIAL GENETICO VIRAL
• Reacción de polimerasa en cadena (PCR)
GENERALIDADES PARA TOMA Y ENVIO DE
MUESTRAS PARA ESTUDIO VIROLOGICO
• PERIODO OPTIMO DE RECOLECCION
– Ej: Aislamiento fase aguda , Ac IgM-IgG
• TIPO DE MUESTRA
– Ej: Sangre c/EDTA, suero
• SITIO DE OBTENCION
– Ej: Deposición
• TECNICA DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
– ANF – Tórula faríngea
• RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
– Envase estéril, cierre hermético, etc
• TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
– Temperatura, medio transporte, etc
FORMULARIO DE ENVIO
Incluir formularios de datos relativos a la muestra
identificar al remitente y al destinatario.
1º
2º: protege el
embalaje/envase
secundario de los
daños físicos
durante el
transporte.
3º
Tº
Virus Entéricos • Meningitis Viral
• Vigilancia PFA
• Vigilancia Rotavirus
– Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS
•
• Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus): – Centinelas ambulatorios
– Estudio Brotes
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previos
Volumen de muestra
Transporte y conservación
Horario recepción de muestras / cepas
Plazo de respuesta
en días hábiles
Aislamiento de Enterovirus
Aislamiento en cultivos celulares
Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio de transporte LCR: envase estéril, tapa rosca. Liq.pericárdico: envase estéril tapa rosca
0-5 días de evolución
Deposición: 1 cuch. de té LCR o Líq Pericard: 1 ml ped 2 ml adulto
Congelar (-18º a -20ºC) o refrigerar (2º a 8ºC)
Lunes a viernes de 8:00 a 12:00 hrs.
15
Vigilancia Poliovirus (sospechosos PFA)
Aislamiento en cultivos celulares
Deposición sin medio de transporte en envase esteril tapa rosca
0-14 días de evolución (OMS)
10 grs. (1 cuch. de té)
Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC. .
15
Vigilancia de Virus Gastroentericos: Adenovirus entéricos, Astrovirus, Norovirus , Rotavirus y otros
Inmunoquímica y RT-PCR
* Deposición sin medio de transporte en envase esteril tapa rosca .
* 0-3 días de evolución en niños menores 5 años (consultorios Centinelas ambulatorios)
10 grs. (1 cuch. de té)
Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC. .
21
(5 a 10 muestras por Brote de diferentes pacientes)
0-3 días de evolución en brotes de gastroenteritis notificados a SEREMIS
10 grms. (1 cuch. de té)
Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC. .
Vigilancia Rotavirus (Centros Centinelas)
Técnicas Serológicas Inmunoenzimáticas y genotipificación
Deposición sin medio de transporte, envase esteril tapa rosca
0-3 días de evolución en niños, hasta 5 años de edad, hospitalizados
10 grms. (1 cuch. de té)
Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC. .
21
• Vigilancia Virus Respiratorios (ADV, VRS, PI)
e Influenza A ,B
– Vigilancia Influenza
– Vigilancia Influenza IRA grave
•
Virus Respiratorios
Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen de muestra
Transporte y conservación
Plazo de respuesta
en días hábiles
Aislamiento de Influenza A y B Aislamiento en cultivos celulares
a) Gargarismo b) Aspirado nasofaríngeo c) Tórula con secreción nasofaríngea d) Biopsia de tejidos
Máximo 3 días de evolución
Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico en frío con refrigerantes T 2 – 8 C
15
Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial , Adenovirus, Parainfluenza
a) Aspirado nasofaríngeo b) Tórula con secreción nasofaríngea c) Biopsia de tejidos (d ADV: Tórula secreción conjuntival )
Hasta 5 días de evolución
Inmunofluorescencia Indirecta para Virus Influenza A, B
Inmunofluorescencia
Frotis fijado Aspirado nasofaríngeo
Hasta 3 días de evolución
En frío con refrigerantes. T 2-8 C
3
Inmunofluorescencia Indirecta para VRS, PI, Metapneumovirus
Hasta 5 días de evolución
PCR para Influenza A, B PCR
Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción nasofaríngea o biopsia pulmón
Hasta 3 días desde inicio de los síntomas
Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico en frío con refrigerantes T 2 – 8 C
5
Inhibición de la Hemaglutinación para Virus Influenza A, B
Inhibición de la Hemaglutinación (IHA)
Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca
Muestras pareadas 1era. fase aguda y 2da. fase convaleciente
1 ml (ped) 2 ml (adul)
En frío con refrigerantes. T 2-8 C
15
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra
Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Horario recepción
Plazo de
respuesta en
días hábile
s
Vigilancia Sarampión Rubeola
ELISA, IF, aislamiento (según algoritmo ISP)
Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca. Enviar Aspirado Nasofaríngeo (*) u Orina
Enviar muestras con formulario de vigilancia con la totalidad de los antecedentes solicitados
1 ml suero. Aspirado nasofaringeo en medio de transporte viral o 50 ml orina
2 ml suero. Aspirado nasofaringeo en medio de transporte viral o 50 ml orina
Aspirado con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidades refrigerantes Tº 2-8ºC.
4
Estudio Inmunidad Sarampión
Inmunofluorescencia (IF)
Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca
No tiene 1 ml 2 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
5
Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita .
ELISA IgM (algoritmo ISP)
Suero en tubo estéril tapa rosca .
Recién nacidos < 1 año
1 ml de suero
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
10
Serología IgG Rubéola ELISA IgG Suero, en tubo estéril tapa rosca .
1 ml de suero
3 ml suero
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
10
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra
Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Horario recepción
Plazo de
respuesta en
días hábil
es
Serología IgG CITOMEGALOVIRUS
ELISA Suero en tubo estéril tapa rosca .
Estudio transplante
1 ml de suero
3 ml suero
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
10
Serología IgM Citomegalovirus
ELISA suero, en tubo estéril tapa rosca.
IgM recién nacidos < 3 meses con Síndrome de TORCH
1 ml de suero
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
10
Aislamiento de Citomegalovirus
Aislamiento en cultivos celulares
Orina,Recolección: segundo chorro. Envase estéril, tapa hermética
24 horas de evolución
3 ml 3 ml Refrigerar sin medio de transporte viral
Lunes a viernes de 8:00 a 12:00 hrs.
21
Aislamiento Herpes Simplex
Aislamiento en cultivos celulares
a) LCR en tubo estéril tapa rosca o de goma b) Contenido vesicular (Líquido de lesión) c) Tórula Secreción Vaginal
De 0- 2 días LCR: 1 ml
LCR: 1 ml
Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con refrigerantes T 2 – 8 C
Lunes a viernes de 8:00 a 12:00 hrs.
7
Aislamiento de Virus Varicela Zoster
Aislamiento en cultivos celulares
Tórula de lesión vesicular
Hasta 3 días
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
Lunes a viernes de 8:00 a 12:00 hrs.
15
VIH / SIDA • Confirmación VIH:
VIH adulto
VIH pediátrico (< 2 años)
• Carga Viral VIH
– CONASIDA- MINSAL para la atención pacientes beneficiarios de Fonasa con el objeto de evaluar efecto de terapia ARV.
Estructura del VIH
Gp12
0
Gp41
p2
4RNA
TR
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra /cepa
Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Horario recepción de muestras / cepas
Plazo de
respuesta en
días hábil
es
Confirmación VIH adulto
* Técnicas serológicas (según Algoritmo del ISP: ELISA, IFI, LIA, Ag)
* Suero o plasma
Muestra reactiva al tamizaje de VIH
1 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.
14
* Técnicas serológicas y de Biología Molecular (según Algoritmo de confirmación: PCR, RNA)
* Sangre con anticoagulante EDTA
A solicitud de la Sección SIDA
4 ml
Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 24 hrs. desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio
Lunes a jueves de 8:00 a 12:00 hrs.
14
Confirmación de VIH pediátrico
Algoritmo con técnicas serológicas y de Biología molecular
Sangre con anticoagulante EDTA
Menores de 2 años, hijos de madres VIH (+), protocolo diagnóstico de sida pediátrico (Resolución Minsal).
4 ml
Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 24 horas desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio.
Lunes a jueves de 8:00 a 12:00 hrs.
14
Carga viral para VIH
Cuantificacion de RNA viral plasmatico
Sangre con anticoagulante EDTA. Tubo tapa lila sistema de extracción al vacío.
Cuantificación de RNA viral en seguimiento de pacientes que viven con VIH (licitación MINSAL)
3 ml 6 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
Lunes a viernes de 8:00 a 12:00 hrs.
10
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Plazo de respuesta en días hábiles
Confirmación Antígeno de Superficie Hepatitis B
ELISA, neutralización (según algoritmo ISP)
Suero en tubo estéril tapa rosca o de goma
Muestra con tamizaje doblemente reactivo a HBsAg
1 ml 3 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
15
Confirmación de Virus Hepatitis C
ELISA, RT-PCR *, Inmunoblot (según Algoritmo)
* Plasma con anticoagulante (EDTA) . En tubo estéril tapa rosca o de goma
Muestra Doblemente reactiva a Ac-VHC.
3 ml de sangre (EDTA) y 1 ml de plasma
5 ml sangre (EDTA) y 3 ml plasma
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.
15
Vigilancia brotes de Hepatitis A
ELISA (IgM) Suero en tubo estéril tapa rosca .
0-10 días desde inicio los síntomas
1 ml de suero
3 ml suero
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
7
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Horario recepción de muestras / cepas
Plazo de
respuesta en
días hábile
s
Vigilancia Infección por Hantavirus
ELISA, RT-PCR (según algoritmo del ISP)
a)Sangre con EDTA (tubo tapa lila) y Sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja) b)Tejido de pulmón en tubo estéril tapa rosca, sin presevantes. (punción cardiaca)
Caso sospechoso Inicio sintomas
3 ml de sangre
5 ml sangre
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
Lunes a domingo las 24 horas
3
Vigilancia Dengue / Fiebre Amarilla
* ELISA *Aislamiento/ PCR (según algoritmo del ISP)
Suero extraído en forma estéril. En tubo estéril tapa rosca .
Con 6 o más días de evolución. IgM Para estudio brote muestra dentro de los 3 primeros días de evolución
2 ml 3 ml En frío con refrigerantes. T 2-8 C
10
Vigilancia Virus del Nilo Occidental
Técnicas Serológicas ELISA
LCR y Suero en tubo estéril tapa rosca .
> a 8 días de evolución.
1 ml suero y 1 ml de LCR
3 ml suero y 2 ml de LCR
En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes
10
Lab. Virus Oncogénicos y otros
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Plazo de
respuesta en
días hábile
s
Confirmación HTLV I/II ELISA , IF, PCR (según algoritmo)
Sangre con anticoagulante (EDTA o citrato)
Muestra Doblemente reactiva y en casos de sospecha de Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica
3ml 5 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio
15
Estudio de Brotes de Parotiditis
Serología, PCR
Suero o plasma y Orina en tubo estéril
Sólo estudio de brote según circular MINSAL
1 ml suero y 3 ml de orina
3 ml suero y 3 ml de orina
En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes
7
PCR para Virus Papiloma Humano (VPH)
PCR
Tórula de lesión o raspado de zona sospechosa de infección genital con medio de transporte estéril.Biopsias de tejidos o condiloma en tubo estéril tapa rosca con medio de transporte.
En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes
10
Factores a revisar:
• Demora en envío de las muestras desde laboratorio
• Cumplir indicaciones de envío (BS, envase, Tº)
• Identificación correcta del paciente
• Formulario indicado y vigente
• Completar antecedentes del formulario: – Fecha obtención muestra
– Inicio síntomas (ds evolución)
– Resultados exámenes solicitados (Ej. Absorbancias)
– Vacunas (Ej: Polio)
– Etc.
• Diferencias entre el código del tubo y del antecedente.
• Volumen de muestra solicitado