DETECCION DE FLAVONOIDES EN EXTRACTO DE LAS HOJAS DE Ginkgo Biloba
L. (Ginkgoaceae) POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA.
Rodríguez Vargas Andrea; López Zuluaga Katherine*
Programa de Licenciatura en Educación Básica con énfasis en Ciencias Naturales y Educación
Ambiental. Facultad de Ciencias de la Educación. Universidad del Tolima
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RESUMEN
El ginkgo biloba es la única especie viviente de una familia de plantas llamadas
Ginkgoaceas, tienen una gran importancia a nivel farmacológico ya que se utiliza para
tratar la insuficiencia cerebral, pérdida de memoria y según estudios, podría ser
utilizado en el futuro como medicamento para tratar el Ahlzaimer; esto se debe a la
cantidad de flavonoides que poseen las hojas de esta planta, entre los cuales se
encuentran glucósidos de flavonoles, derivados del kaempferol, derivados de la
quercetina y derivados de la isorhamnetina. Las cantidades de estos compuestos
varían de acuerdo al porcentaje de extracción que se logre. Diversos métodos se han
establecido para determinar la presencia y cantidad de flavonoides en los extractos de
sus hojas, como cromatografía de capa delgada, cromatografía liquida de alto
rendimiento, cromatografía de gases y espectrofotometría de masas entre los cuales la
cromatografía de capa delgada (TLC) se destaca como el método más sencillo para
determinar la presencia de los flavonoides en el ginkgo biloba. El propósito de esta
revisión es determinar un método para extraer flavonoides en extractos de las hojas
de la planta con un buen rendimiento y utilizar la cromatografía de capa delgada para
detectar y clasificar los diferentes compuestos de este tipo.
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ABSTRACT
Ginkgo biloba is the sole specie alive in a vegetal family called Ginkgoaceas, this plant
has a great relevance at pharmacological level due to the use of their leaves to treat
cerebral insufficiency memory loss and following the studies in this field it could be used
as medicine to Ahlzaimer disease. It is due to the amount of flavonoids in the leaves of
ginkgo including flavones glycosides, kaempferol derivates, quercetina derivates and
isorhamnetina. The amounts of these compounds may vary according to the extraction
method. So many methods has been established in order to determinate the presence
and quantity of flavonoides in the extracts of their leaves, like gas chromatography, thin
layer chromatography, high performance chromatography and mass spectrometry. Of
these methods, the thin layer chromatography is the most simple to determinate the
presence of flavonoides. The aim of this review is to determinate a method to the
extraction of flavonoids in the leaves extract with a good recovery and use the thin layer
chromatography to detect and classify this compounds.
Palabras clave: Cromatografía de capa delgada. Flavonoides. Ginkgo Biloba.
INTRODUCCION
El Ginkgo Biloba es un árbol dioico de
aproximadamente 30 metros de altura
posee hojas flabeladas y es el único
sobreviviente de la familia
Ginkgoaceae. Ha adquirido importancia
farmacéutica gracias a sus beneficios
para el tratamiento contra
enfermedades cerebro vasculares2,
comercialmente se encuentra en forma
de suplementos alimenticios ya que no
ha sido aprobado por la FDA como
medicamento1 su efecto en la salud se
debe al contenido de sustancias
químicas derivadas del metabolismo
secundario de la planta, dentro de
dichos compuestos se pueden
encontrar biobalidos, ginkgolidos, y
glucósidos de flavonoides de estos1, el
ultimo ha sido utilizado en muchos
estudios y a este es al que se le
retribuye sus efectos en la salud
humana. De los métodos de detección y
cuantificación, la cromatografía de capa
fina de alto rendimiento (HPTLC) se
presenta como el más sencillo ya que
los reactivos utilizados para ello son de
fácil acceso y no tienen un alto costo
comparado con las demás variedades
de cromatografías. A continuación se
explicaran las técnicas utilizadas para el
estudio del ginkgo biloba, las pruebas
de reconocimiento, la extracción,
purificación y la cuantificación.
PRUEBAS DE RECONOCIMIENTO
La prueba de reconocimiento utilizado
convencionalmente para detectar la
presencia de flavonoides en una
muestra de ginkgo biloba es el ensayo
de Shinoda el cual consiste en hacer
reaccionar una muestra en etanol con
HCl concentrado y agregar magnesio
metálico, la muestra positiva presenta
un color rojizo, debido a que esta
prueba reconoce los núcleos
benzopirona* de algunas veces se
presentan falsos positivos. Debido a
esto, existe otra prueba de
reconocimiento la cual utiliza Zinc en
vez de Magnesio6 y diferencia los
flavononoles que dan una coloración
rojo- violeta de los flavonoles y
flavononas que presentan coloraciones
rosadas débiles.
Kaempferol
Quercetina
EXTRACCION Y PURIFICACION
Se han propuesto diversos métodos
para la extracción de flavonoides
presentes en las hojas de ginkgo biloba;
la mayoría utiliza etanol como solvente
para la extracción, aunque existen
técnicas como la extracción soxhlet la
cual utiliza un compuesto de polaridad
equivalente al analito, en este caso
Flavonoides y la sonicacion que se vale
de la energía del sonido1,2 para separar
partículas de compuestos en una
muestra, existen procedimientos que no
involucran equipo de laboratorio
especifico y que tienen una eficiencia de
extracción que va desde 70% hasta el
92 %2, este ultimo consiste en utilizar un
tamaño de hoja de entre 180 – 425 µm
un solvente de extracción compuesto de
etanol y agua en relación 7: 3, a pH 8 a
70 ºC. Este método de extracción
requiere un mecanismo de purificación
ya que para la cromatografía solo se
necesitan los flavonoides para su
clasificación y cualquier otra sustancia
podría entorpecer los resultados.
En la purificación de los glucósidos de
flavonoides y los flavonoides se han
propuesto diversos mecanismos entre
los cuales se destacan el uso de
enzimas pertenecientes a
microorganismos3 y el uso de camas de
adsorción4 , el inconveniente de estos
procedimientos es que son muy
costosos y necesitan equipos
específicos para desarrollarse, existe un
método de purificación más sencillo el
cual tiene dos procedimientos que son
sensibles para los diferentes tipos de
flavonoides2; el primero de ellos utiliza
polietilenglicol, sulfato de amonio y una
resina gelatinosa, este procedimiento es
especifico para glucósidos de
flavonoides2 y tiene una pureza de 20%
una vez terminado. El otro
procedimiento es especifico para
agliconas, y posee una pureza del 20 %
consiste en una Copolimerizacion de
alilbromuro mas etilenglicol y
dimetacrilato, el cual actúa como un
reticulante.
CLASIFICACION Y CUANTIFICACION
Dentro del estudio del ginkgo biloba se
han hecho grandes esfuerzos por
encontrar un mecanismo de
cuantificación de los flavonoides y
demás componentes de las hojas del
GB, desde cromatografía de capa fina2
hasta cromatografía de fluidos
supercríticos pasando por
espectrofotometría de masas y
cromatografía liquida1. Todos estos
procesos tienen distintos resultados y
distintas efectividades así como también
poseen aspectos que los favorecen y
aspectos en contra y no se ha
propuesto un consenso o un protocolo
que establezca una forma universal de
cuantificar este tipo de compuestos en
el ginkgo biloba. En esta revisión se
pretende implementar un mecanismo de
cuantificación y clasificación utilizando
la cromatografía en capa fina de alto
rendimiento ya que esta, a comparación
de la cromatografía de capa fina, provee
ventajas en cuanto a la detección
selectiva, cantidad de muestra, y
cuantificación2. El proceso de HPTLC en
extractos purificados de Flavonoides
posee diferentes variantes pero una de
la más efectiva es utilizar placas de
silica gel con dimensión 20 x 20 cm de
2 mm de espesor, un desarrollo
ascendente de 9 cm y una fase móvil de
acido fórmico al 5% en metanol – agua
(70: 30)2.
Fig. 2. Placa cromatografica de aliconas
y glicosidos de Flavonoides.
CONCLUSIONES
El ginkgo biloba es una planta
ampliamente estudiada en el campo de
la farmacología ya que posee
características únicas que benefician la
salud humana.
Los flavonoides presentes en la planta
pueden ser identificados por diferentes
métodos que pueden ser simples o muy
complejos y su efectividad varía de
acuerdo a la especificidad que se utilice.
El proceso de extracción establecido en
la revisión es simple y tiene un
rendimiento del 92 %, se presenta como
una alternativa sencilla al momento de
estudiar las propiedades químicas de
los flavonoides.
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