CULTIVO DE MERISTEMOS Y LA
OBTENCIÓN DE PLANTAS LIBRES DE
VIRUS
•Las enfermedades producidas por virus son mas difícil de erradicar
•Los virus no pueden ser controlados con la aplicación de productos químicos
¿Por qué?
Metabolismo depende Del Hospedero
• Utilización de la Termoterapia en la inactivación y/oerradicación de virus
Años 50
ápices y callos de raíces
no tienen virus virus en baja concentración
CULTIVO DE MERISTEMOS
DESARROLLO HISTÓRICO :
• kotte & Robbins (1922), crecimiento de raíces en solución mineralcon azucares.
• White (1943), observo en tomate la disminución del virus del TMVen hospederos inoculados.
• Limasset & Cournet (1949), extrapolando el experimento deWhite, observaron lo mismo.
• Morel & Martin (1952), “ aislar el meristemo de una plantainfectada y poder obtener una planta sana”.
Aislamiento de meristemos
Meristemos apicales
son
aislados
yemas terminales yemas axilares
esaséptico
se debe
desinfectar
Técnicas de asilamiento
EQUIPOS Y MATERIALES
• Estereoscopio 10-40x desinfectado con etanol 95°
• Bisturí N° 11
• Hipodérmica N° 25
• Navaja de afeitasMangos artesanales
Esterilizados con etanol 70°y flameados en mechero
Procedimiento
yema terminal o axilar desinfecta con etanol 95° x 15 s hipoclorito de calcio o,5% x 1-3 min
3-5 enjuagues con agua destilada
aislamiento
llevar a cultivo Bisturí N° 11
remoción de hojas exteriores
hipodérmica N° 25
remoción de hojas interiores
navaja
aislar el meristemo
Estereoscopio
Medio de cultivo
• Al inicio se utilizaba el medio de White
• Ahora mayormente se utiliza el MS en ocasionesenriquecido con sustancias orgánicas
• A pesar de las diferentes formulaciones ensayadas,hay especies de plantas que no crecen.
CONDICIONES AMBIENTALES DE INCUBACIÓN
Temperatura
En general 25°C
plantas plantas
clima frio-templado clima tropical
18-22°C 28°C
Luzfotoperiodo 16/8 Hrs
en general 1-2 W.m-2
Factores que influyen en el cultivo de meristemos
I. Tipos de virus
II. Tamaño de explante :
Eje:
Clavel
Cítricos : 0,1-0,15 mm
meristemo tamaño : prendimiento erradicación
tamaño : prendimiento erradicación
meristemo 0,2 mm no desarrollan
meristemo 0,75 mm desarrollan pero con virus
14,8 % prendimiento
100 % erradicación
III. Tipo de yema: algunas observaciones sugieren que yemas apicales son mas efectivas que las axilares.
IV. pH: 5,8 1
V. estaciones
VI . Consistencia del medio de cultivo
Termoterapia y cultivo de tejidos
Kobus (1890) reportar el control de una enfermedad viral con la T°primero
tallos de caña de azúcar agua caliente x 50-52°C/30 minen
en
Kunkel (1936)
durazneroA)agua caliente 50°C/10min
B)calor eco 35-38°C/2-4semanas
sano el amarillamiento mejores resultados
Termoterapia cultivo de meristemos erradicación
APLICACIÓN TERMOTERAPIA
inactivación
………………………………………..………………………………………
Fundamento de la termoterapia
Sensibilidad diferencial de la multiplicación viral y el metabolismo celular
produce
inactivación y/o erradicación viral
Postulados de la termoterapia
a. Calor seco es mas efectivo
b. Calor seco varia según el tipo de especie de plata y el tipo de virus
c. Temperatura de potenciabilidad para infectar y multiplicar no estacorrelacionado con su punto de inactivación térmica
d. Virus isotérmicos son mas fácil de controlar
e. En la mayoría de los cosas solo produce inactivación
Quimioterapia y cultivo de tejidos
Fundamento:
La aplicación de productos químicos en las plantas altera elmetabolismo celular, bloqueando así la síntesis de los virus.
Fundamento del cultivo de meristemos
Disminución progresiva del virus hacia el meristemo apical Escasa
nulaconcentración
HIPÓTESIS
auxinas no tejido vascular alta velocidad de multiplicación
supera a la del virusbloquea al virus
no hay enzimas claves mayor que la del virus
biosíntesis acelerada
No diseminación del virus
Desorganización celular