DIAGNOSTICO MOLECULAR
DIAGNOSTICO
• ENFERMEDADES GENETICAS
• ENFERMEDADES INFECCIOSAS
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES GENETICAS
Detección del gen responsable:
• ausencia del gen
• defecto causado por deleción
• defecto causado por una mutación puntual
• defecto causado por translocación
• defecto causado por incremento de trinucleótidos repetitivos
DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS
I. Detección directa del agente etiológico
- detección visual por microscopio
- cultivo del agente patogénico
Problemas / Desventajas :
- Algunos parásitos son morfológicamente indistinguibles entre sí
- escondidos entre los tejidos
- baja sensibilidad
- patógenos dificiles de cultivar,
- contaminación de los cultivos con hongos
- toma mayor tiempo para que crezcan los patógenos en cultivo.
II. Detección indirecta por presencia de anticuerpos
Problemas / Desventaja
- no discrimina infección presente o pasada- reacciones cruzadas (por determinantes antigénicos compartidos por diferentes
microorganismos)
- Detección de algún componente o molécula del patógeno: DNA, RNA o Proteína.
- Se considera como diagnóstico directo.
- Actualmente son los sistemas de diagnóstico con mayor especificidad, mayor sensibilidad, y mayor rapidez.
DIAGNOSTICO MOLECULAR
SISTEMA DE DIAGNOSTICO TRADICIONAL
Conventional diagnosis methods
Diagnóstico Molecular
• Ribotyping• Restriction fragment length polymorphism
(RFLP)• DNA hybridization• PCR, RT-PCR, RAPD• Secuenciamiento de ácidos nucleicos
1. Prenatal
2. Pre-sintomático
3. En tiempo real (monitoreo)
DIAGNOSTICO MOLECULAR : Tres niveles
DIAGNOSTICO MOLECULAR : Tres niveles
I. Prenatal :
• enfermedades hereditarias
• Predisposición genética – sospecha clínica
II. Pre-sintomático: (Dx. temprano)
• Enfermedad infecciosa (fase temprana)
• Predisposición a Enfermedades como el cancer, autoinmunes, degenerativa, transtornos afectivos (historia clinica familiar)
III. En tiempo real (monitoreo):
• Características del patógeno (identificación, virulencia, resistencia a drogas)
• Estado inmunológico (carga antigénica, o cantidad de anticuerpos)
• Estado de la enfermedad (detección de marcadores)
• Monitoreo al tratamiento: marcadores, respuesta al tratamiento, resistencia, etc…
Gel Electrophoresis
Southern Blot Analysis
Sonda marcada
Acido nucleico inmovilizado
RFLP
GGATCCCCTAGG
Diagnóstico molecular de Anemia Falciforme:
Hb A Pro - Glu - Glu
CCT-GAG-GAG
Hb S Pro - Val - Glu
CCT GTG GAG
La enzima de restricción MstII reconoce la secuencia CCTNAGG
RFLP + DNA hybridization
Hibridación In situ
PCR
Fundamentos, Variantes & Aplicaciones
DIAGNOSTICO MOLECULAR EN EL FUTURO