STA Laboratories
Enrollamiento de la Vid(Leafroll), Estrategias para laIdentificación y Control de la
Enfermedad
Judit Monis, Ph.D.
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Enrollamiento (Leafroll)
Enfermedad causada por nueve(tal vez más) diferente especiesde virus
Otros factores o patógenos puedencausar síntomas parecidos
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Leafroll afecta la Salud del Viñedo yla Calidad de Uva
• Hasta un 70% de reducción en rendimiento
• Retardación de maduración de uva, reducción enel contenido de azúcar, y alteración del color de lafruta – en infecciones severas la fruta no madura
• Vides infectadas tienen mayor sensitividad al fríoy otros estreses
• La propagación de la enfermedad ocurre por elmovimiento de cortes de plantas enfermas
• Varias especies de cochinillas transmiten algunasespecies de virus a corta/larga distancia
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Grapevine leafroll-associated viruses
• Al menos nueve diferentes virus están asociados con laenfermedad (GLRaV-1 a GLRaV-9)
• Estos virus pertenecen a la familia, Closteroviridae:Closterovirus, Ampelovirus, and posiblemente Crinivirus
• Un virus anteriormente conocido come Grapevinerootstock stem lesion associated virus (GRSLaV) es unacepa “Red Globe” de GLRaV-2
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Grapevine leafroll-associated viruses
Closteroviridae (Familia)
Ampelovirus (cochinilla):GLRaV-1, -3, -4, -5, -6, -8, -9
Closterovirus (afidos):GLRaV-2 and variants (GLRaV-2RG/BD)
Crinivirus? (moscas blancas):GLRaV-7
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Porque vemos disperción deenfermedad?
• Hasta 1990’s el uso exclusivo de AXR-1
• Una nueva raza de Filoxera rompió laresistencia
• Muchos viñedos plantados con porta-injertos alternativos muestran brotes deinfección (particularmente leafroll)
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Influencia de Virus enIncompatibilidad al Injerto
GLRaV-2 causa incompatibilidad
• 3309C (V. riparia x V. rupestris )
• 101-14 V. riparia x V. rupestris
• Kobber 5BB (V. berlandieri x V. riparia)
• Teleki 5C (V. berlandieri x V. riparia)
• 1103 P (V. berlandieri x V. riparia)
• 1616C V. solonis x V. riparia
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La identificación adecuada esimportante
La expressión de síntomas puedeser causada por otros patógenos
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GVAEnfermedad de Syrah (Merlot ySyrah) Kobber Stem Grooving
• Transmisión por cochinillas
• Reducción calidad y rendimiento de fruta
• Afecta la lignificación de los tallos
• Decaimiento de la vid y envejecimientoprematuro
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Virus Transmitidos por Cochinilla
• GVA: Enfermedad de Shiraz y KobberStem Grooving
• GVB: Corky Bark
• GLRaV-3/otros Ampelovirus: Enfermedadde Leafroll
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Leafroll: transmisión natural(otros no mostrados : cochinilla de la uva,
harinosa de los citricos, de coloracion oscura)
Cochinilla de la vid Cochinilla de cola larga
(photos by R. J. Gill)
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Identificación del Agente Causal
– Inspecciones visuales para monitorearenfermedad (collectar muestras) ypresencia de cochinillas
– Testar en el laboratorio AMBOS porta-injerto y clón ANTES de plantar (conmetodos de muestreo recomendado en laepoca correcta.
– Es util registrar la ubicación de la plantamadre original (origen de estacas)
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Métodos para Testado
TEST DETECTA ESPECIFICIDAD/SENSITIVIDAD
Cultivo Biológico Población de Hongos yBacteria
Alta/baja
Molecular: PCR Acido nucleico delPatógeno
Alta/Alta
Molecular: ELISA Proteinas del Patógeno Moderada/Alta
Note: Se recomienda usar mas de un metodo para obtener resultados de confianza
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Muestreo Estacional
Visita Invierno
Visita Primavera
Visita Otono
Visita Verano
Panel B*
Pierce’s Disease
Panel A*Panel A*
Agrobacterium spp. y Panel de Hongos
DicFeb JulJunMayAbrMar NovOctSepAgoEne
* Panel A incluye 13 virus (más dos variantes), Panel B incluye 4 virus
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Posible Causas de Diseminaciónde Enfermedad
• No es fácil de observar la poblacion deCochinillas
• Hay un incremento en el movimiento decochinillas por trabajadores y maquinaria(viento?)
• Efecto de Porta-Injerto (mas suceptibles avirus)
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Control de Diseminación deEnfermedad
• Empezar con plantas limpias (i.e., testado libre depatógenos)
• Monitorear y controlar constantemente lascochinillas
• Higienización del equipo de campo, ropa detrabajadores, etc.
• Remoción de plantas infectadas, seguidas por unperiodo de berbecho
• Educación y communicación de viticultores
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Estrategia de Remoción de Vides• Testar plantas con síntomas para determinar la
causa (no todos los virus son transmitidos)
• Tratar las vides infectadas con insecticida (matacochinillas y hormigas) y herbicidas (mata lasraices)
• Remoción del sistema radicular
• Remoción de vides adjacentes
• Periodos de Berbecho
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Conclusiones
• Empezar el viñedo con plantas testadas (i.e.,plantas libres de patógenos)
• Proteja su viñedo de infecciones externas
• Conozca a sus vecinos (y la salud de losviñedos vecinos)
• Coordine tratamientos de insecticida conlos viñedos vecinos
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Eurofins/STA Plant HealthServices
Para más informatión contacte:
Judit Monis, Ph.D.
www.stalabs.com
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Virus Elimination is Beneficial(2006 ICVG, Stellenbosch, South Africa)
Italy (Eliminated GLRaV-1, GVA)– Increased photosynthesis and nutrition, which
translated in higher fruit yield
France (Eliminated GLRaV-1, -2, -3, GFkV,GVB)– Vigor improvement, increased fruit production and
higher sugar content (9% increase)– Improved acidity (3% decrease)
Italy- (Eliminated GLRaV-3)– improved canopy that translated on better ripening– higher soluble solids and lower titratable acids
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Disease EradicationMeristem Tissue Culture
Apical meristems are isolated from a diseased vine and cultured in vitro,regenerated plantlets are subsequently acclimated in the greenhouse forpropagation and grafting
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Biological Indexing
Twig fromsuspecteddiseased plant
Healthyindicator plantwith T-shapedcut
Diseased bud orbark put in cut ofindicator plant
New growth ofindicator plantdevelops typicalsymptoms
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Polymerase Chain Reaction (PCR)
POLYMERASE CHAIN REACTION PCR product of round
Target DNA 1 2 3 4 5…
Melt DNA
Repeat PCR cycles
Anneal Primers
Gel Electrophoresis
(Verify fragment length)
Extend DNA
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Specific PCR Detection of GLRaV-1, -5
LR
5
LR
1
LR
5
LR
5
LR
5
LR
5
LR
1
LR
5
GLRaV-1, - 5GLRaV-5
690 bp
200 bp150 bp
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Enzyme Linked Immuno-Assay (ELISA)
Rootstock and scion grown inthe greenhouse or the field
Extract plant sap(leaf, petioles, and
stems)
1. Specific antibody is adsorbed to plate2. Test sample containing virus is allowed to bind to
specific antibodies3. Enzyme-labeled specific antibody binds to virus-
antibody complex4. Enzyme substrate produces color reaction
ELISA
4.1. 2. 3.
Wash Wash Wash
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