Tecnología de los Alimentos
Departamento de Producción Animal y
Ciencia de los Alimentos
Facultad de Veterinaria
GRUPO DE INVESTIGACIÓN DE
BIOQUÍMICA DE PROTEÍNAS DE LA
LECHE (A18)
Jornada
6-7 de junio de 2016
Dra. Mª Dolores Pérez
Titular Univ. IP: Dr. Miguel Calvo
Catedrático Univ.
Dra. Lourdes Sánchez
Catedrática Univ.
INVESTIGADORES PERMANENTES
Empresa ZEULAB (Zaragoza):
Pedro Razquín. Gerente
Luis Mata. Director técnico
Patricia Galán. Investigadora I+D
COLABORADORES
Jornada
6-7 de junio de 2016
Creación del grupo: 1986
Grupo Consolidado de
Investigación Aplicada: 2003
BECARIOS E INVESTIGADORES
Daniel Ripollés: investigador contratado predoctoral
José Antonio Parrón: investigador contratado predoctoral
Isabel Segura: investigadora contratada
Fanny Noemi Navarro: profesora visitante
3 Estudiantes realizando el Trabajo Fin de Máster
(1 con contrato del IA2)
1 Estudiante realizando
Trabajo Fin de Grado
3 Estudiantes en prácticas
Jornada
6-7 de junio de 2016
LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN
Estudio de proteínas lácteas bioactivas
con aplicación en productos funcionales
Desarrollo de técnicas inmunoquímicas
para el control de calidad de los
alimentos
Jornada
6-7 de junio de 2016
ESTUDIO DE LAS PROTEÍNAS LÁCTEAS
Aspectos físico-
químicos
Efecto de los tratamientos térmicos y no
térmicos
Actividad biológica en
modelos celulares
Utilización en alimentos
funcionales
Jornada
6-7 de junio de 2016
PROTEÍNAS CON ACTIVIDAD DEFENSIVA
Lactoferrina
Inmunoglobulinas
Lactoperoxidasa
Proteínas de la membrana del glóbulo graso
Lactoferrina en arroz
Ventria Bioscience (Sacramento, EE.UU)
Lactoferrina
humana recombinante
Lactoferrina en Aspergillus
awamori
Agennix (Houston, EE.UU)
Jornada
6-7 de junio de 2016
ESTUDIOS EN LACTOFERRINA
Comparación de lactoferrina de leche de varias
especies: termorresistencia, actividad antibacteriana,
capacidad de transporte de hierro
Efecto de los tratamientos térmicos en la estructura
determinando la pérdida de inmunorreactividad y
mediante calorimetría diferencial
Efecto de los tratamientos térmicos en la actividad
antibacteriana y la capacidad de transporte de hierro a
través de un modelo celular intestinal
Tratamiento con altas presiones: efecto en la
estructura, capacidad de fijación de hierro y actividad
antibacteriana
Jornada
6-7 de junio de 2016
Modelo de epitelio intestinal: monocapas de células Caco-2
diferenciadas en enterocitos
TRANSPORTE DE HIERRO UNIDO A LACTOFERRINA EN
MODELOS CELULARES
Jornada
6-7 de junio de 2016
hLF de leche rhLF de arroz rhLF de A. awamori
0 5 10 15 20 250
5
10
15
20
25
Time (hours)
% T
ota
l ra
dio
ac
tiv
ity
tra
ns
po
rte
d
0 5 10 15 20 250
5
10
15
20
25
Time (hours)
% T
ota
l ra
dio
ac
tiv
ity
tra
ns
po
rte
d
0 5 10 15 20 25 300
5
10
15
20
25
Time (hours)
% T
ota
l ra
dia
cti
vit
y t
ran
sp
ort
ed
Transporte de hierro
Interacción con células
EFECTO DE LAS ALTAS PRESIONES EN LA
LACTOFERRINA LF bovina:
Inmunorreactividad
500 Mpa 15 min 600 Mpa 15 min
0
20
40
60
80
100
120
140
PBS Lactosuero Leche
Co
ncen
tra
ció
n d
e l
acto
ferrin
a (%
)
Apo
Nat
Holo
0
20
40
60
80
100
120
140
PBS Lactosuero Leche
Co
ncen
tra
ció
n d
e l
acto
ferrin
a (%
)
Apo
Nat
Holo
Jornada
6-7 de junio de 2016
Actividad antibacteriana
LF frente a E. coli O157:H7
EFECTO DE LOS TRATAMIENTOS EN LA LACTOFERRINA
DE LECHE HUMANA
Tratamiento térmico Altas presiones
0
20
40
60
80
100
non treated 75ºC/15" 90ºC/15" 90ºC/10'
Ct/
C0
Jornada
6-7 de junio de 2016
CARACTERIZACIÓN DE LECHE CON
LACTOFERRINA Y LISOZIMA HUMANAS
Instituto Nacional de Tecnología
Agropecuaria (INTA) de la
Universidad Nacional de San Martín
de Buenos Aires (Argentina)
Rosita ISA, vaca bitransgénica
secreta lactoferrina y lisozima
humanas en la leche
Muestra Media ±
SD* (mg/ml)
Leche
Rosita
8,67 ± 6,18
Calostro
Rosita
6,98 ± 4,16
Actividad lisozima (ΔAbs 450/min)
Lisozima humana (1 mg/mL) 126,2
Calostro de Rosita 47,2
Leche de Rosita 29,3
Leche de vaca 4,7
Leche humana 24,1
1. LFh + LFb (0,5 + 0,5 mg/mL)
2. LFh (1 mg/mL)
3. LFb (1 mg/mL)
4,6. Lactosuero de leche de Rosita
5,7. Lactosuero de calostro de Rosita
Jornada
6-7 de junio de 2016
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE PRODUCTOS ENRIQUECIDOS
EN PROTEÍNAS DE LA MEMBRANA DEL GLÓBULO GRASO
Jornada
6-7 de junio de 2016
Actividad subproductos: mazada,
suero de mantequilla
Actividad hidrolizados de los subproductos
ACTIVIDAD ANTIVÍRICA DE SUBPRODUCTOS LÁCTEOS
Neutralización de rotavirus
en cultivos celulares por
inmunofluorescencia
Jornada
6-7 de junio de 2016
Y Y FITC
b BM
b BS
b MFG
Mo B
Mo B
S
o MFG
Mb B
Mb B
S
b MFG
Mo B
Mo B
S
o MFG
M
0
20
40
60
80
100
***
***
******
***
***
% N
eutr
aliz
atio
n
Non trea
ted
75 ºC/2
0 s
75 ºC/1
0 min
80 ºC/2
0 s
80 ºC/1
0 min
85 ºC/2
0 s
85 ºC/1
0 min
0
5
10
15
***
***
******
***
***
******
****** ******
Heat Treatment
Spec
ific
Act
ivity
Subproductos: mazada, suero de
mantequilla, membrana glóbulo graso
DESARROLLO DE TÉCNICAS INMUNOQUÍMICAS
Detección de la sustitución de especies en leche
Detección de la adulteración de productos
lácteos con proteínas vegetales
Detección de de alergenos en alimentos
Detección de alimentos transgénicos
Detección de esporos de Clostridium
tyrobutyricum causantes de la hinchazon tardía
Jornada
6-7 de junio de 2016
Desnaturalización térmica
Efecto del calor en la inmunodetección
180°C 190°C
DETECCIÓN DE CRY1A DE MAÍZ TRANSGÉNICO
Jornada
6-7 de junio de 2016
Resistencia a la pepsina
Cry 1A (b) B. thuringiensis
Cry 1A (b) de hojas de maíz
DETECCIÓN DE PROTEÍNAS ALERGÉNICAS DEL CACAHUETE
Jornada
6-7 de junio de 2016
Detección de cacahuete en galleta
ELISA competitivo Inmunocromatografía
Efecto del tratamiento térmico
Contribución a su creación y
colaboración con las líneas de I + D
de la empresa desde el año 1995
Colaboración con la empresa en la
producción de anticuerpos
policlonales para el desarrollo de
tests de diagnóstico desde el año
2008
ZEULAB (Zaragoza)
CERTEST-BIOTEC
(Zaragoza)
COLABORACIÓN CON EMPRESAS DE
BIOTECNOLOGÍA
Jornada
6-7 de junio de 2016
1. Método inmunoenzimático rápido de detección de
la presencia de leche de distinta especie en leche de
oveja
Universidad de
Zaragoza, 1989
P8902690
ZEULAB
En explotación
2. Método de aislamiento de la lactoferrina y otras
proteínas de la leche y lactosuero de quesería
utilizando un ligando insolubilizado en placas de
celulosa filtrante
Universidad de
Zaragoza, 1994
P9400477
Laboratorios
TEBIB
3. Método inmunoenzimático cuantitativo para
detectar la adulteración de leche y productos lácteos
con proteínas vegetales
Universidad de
Zaragoza, 2002
P200200534
ZEULAB
En explotación
4. Método inmunoenzimático para detectar la presencia de alergenos en alimentos procesados
Universidad de
Zaragoza, 2008
P200801913
ZEULAB
En explotación
5. Utilización de péptidos para la detección de
esporos de C. tyrobutyricum
Universidad de
Zaragoza, 2008
P200802267 ZEULAB
6. Método de detección y/o cuantificación de esporos
de C. tyrobutyricum mediante citometría de flujo
Universidad de
Zaragoza, 2008
P200803355 ZEULAB
TRANSFERENCIA DE PATENTES
En explotación
5 productos
En explotación
3 productos
En explotación
4 productos
Jornada
6-7 de junio de 2016
Inmunocromatografía:
PROTEON B-LG EXPRESS
PROTEON OVO-EXPRESS
TRANSFERENCIA DE CONOCIMIENTO
Kits de ELISA :
PROTEON-BETALACTOGLOBULINA
PROTEON-OVOMUCOIDE
Jornada
6-7 de junio de 2016
COLABORACIÓN CON GRUPOS DE INVESTIGACIÓN
Jornada
6-7 de junio de 2016
Jeremy H. Brock, Department of Bacteriology & Immunology, Western Infirmary. University of
Glasgow, Reino Unido
Thomas Haertlé, INRA, Nantes, Francia
Gary Brett, Institute of Food Research, Norwich, Reino Unido
Mercedes Ramos y Rosina López-Fandiño, Instituto de Fermentaciones Industriales (IFI) del
CSIC, Madrid
Robert Evans, Biosciences, School of Health Sciences and Social Care, Brunel University,
Uxbridge, Reino Unido
Javier Naval e Isabel Marzo, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad de
Zaragoza
Carmen Rota y Juan José Carramiñana, Grupo Seguridad Alimentaria, Universidad de Zaragoza
El-Rashdy Redwan, Genetic Engineering and Biotechnology Research Institute (GEBRI),
Alejandría, Egipto
Jesús Martínez de la Fuente y Valeria Grazú, Instituto de Nanociencia de Aragón, Zaragoza
Adrian Mutto, Universidad Nacional de San Martín de Buenos Aires, Argentina
Richard J. Fitzgerald, Department of Life Sciences, University of Limerick, Limerick, Ireland
Jan Trige Rasmussen, Protein Chemistry Laboratory. Department of Molecular Biology and Genetics. Aarhus University, Aarhus, Denmark
Cristophe Blecker, Department of Food Sciences and Formulation, Gembloux Agro-Bio Tech,
University of Liège, Gembloux, Belgium
COLABORACIÓN CON INSTITUCIONES
Y EMPRESAS
Jornada
6-7 de junio de 2016
CITA. Zaragoza, España
CNTA. San Adrián, España
Banco de Sangre y Tejidos de Aragón. Zaragoza, España
ZEULAB. Zaragoza, España
CERTEST–BIOTEC. Zaragoza, España
Laboratorios Ordesa, Barcelona, España
Agennix. Houston, TX, EE.UU.
Ventria Bioscience. Sacramento, CA, EE.UU.
RESUMEN DE LA ACTIVIDAD DE
INVESTIGACIÓN DEL GRUPO
1986- 2016
Proyectos de investigación 34
Contratos de investigación 20
Publicaciones SCI 138
Capítulos de libro 6
Comunicaciones a congresos >100
Organización de congresos European Iron Club-1996
Patentes 8
Tesis doctorales 23 (+ 2 en realización)
Premios 3
Premio Ordesa 1999 de la Sociedad Española de
Gastroenterología, Hepatología y Nutrición Pediátrica
Premio al mejor proyecto en la categoría de Spin-Off
Académico. 2002. Instituto Aragonés de Fomento
Premio de Investigación “Enrique Coris Gruart” 2010
Jornada
6-7 de junio de 2016
PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN ACTUALES
Desarrollo de productos alimenticios y soluciones globales
orientados a la población infantil con alergia a las proteínas de la
leche (SOLMILK) Programa Retos-Colaboración del Programa
Estatal de Investigación, Desarrollo e Innovación Orientada a los
Retos de la Sociedad. 2016-2018
Compuestos bioactivos derivados de alimentos básicos y su acción sobre la microbiota y la fisiopatología intestinal.
Consorcio del Campus Iberus. 2014-2016
Desarrollo de un método de detección de los agentes causantes
de la hinchazón tardía en quesos por separación biomagnética.
Ministerio de Ciencia e Innovación. 2014-2017
Improving Allergy Risk Assessment Strategy for new food proteins
(ImpARAS) Cost Action. 2014-2018
Jornada
6-7 de junio de 2016
ACTIVIDAD DOCENTE
GRADO EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS
QUÍMICA Y BIOQUÍMICA DE LOS ALIMENTOS (2º CURSO)
ANÁLISIS QUÍMICO DE LOS ALIMENTOS (2º CURSO)
TECNOLOGÍA DE LA LECHE Y DE OVOPRODUCTOS (4º CURSO)
INTENSIFICACIÓN EN EL SECTOR LÁCTEO Y DE OVOPRODUCTOS (4º CURSO)
TRABAJO FIN DE GRADO
MÁSTER EN CALIDAD, SEGURIDAD Y TECNOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS
TÉCNICAS INMUNOQUÍMICAS APLICADAS AL CONTROL DE CALIDAD DE LOS ALIMENTOS
AVANCES EN LA TECNOLOGÍA Y CONTROL DE CALIDAD DE LOS PRODUCTOS LÁCTEOS
TRABAJO FIN DE MÁSTER
GESTIÓN ACADÉMICA DE COORDINACIÓN
PRÁCTICAS EXTERNAS (4º CURSO)
MÁSTER EN CALIDAD, SEGURIDAD Y TECNOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS
DOCTORADO EN CALIDAD, SEGURIDAD Y TECNOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS
Jornada
6-7 de junio de 2016
TÉCNICAS Y EQUIPAMIENTO
CULTIVOS CELULARES
• Campana de flujo laminar
• Incubador de CO2
• Microscopio invertido
• Conservación en N2 liquido
CULTIVOS BACTERIANOS Y VÍRICOS
• Ensayos antibacterianos: por siembra e inhibición de la adhesión células
• Ensayos antivíricos: inmunofluorescencia y PCR
PCR
• Sistema de PCR a tiempo real: clostridios butíricos y rotavirus
TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS
• Cromatografía preparativa a presión normal
• Filtración con membranas a diferente escala
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS
• Electroforesis vertical
• Electroforesis en Phast System
• Electroforesis en 2D
TÉCNICAS INMUNOQUÍMICAS
• Obtención de anticuerpos policlonales
• ELISA e inmunocromatografía
• Western-blotting: sistema de transferencia • Bioseparación magnética
Jornada
6-7 de junio de 2016
Jornada
6-7 de junio de 2016
¡Muchas
gracias!