Cada minuto hay alguien
que necesita sangre.
Es alguien que te necesita a vos
NUEVAS TECNICAS DE FRACCIONAMIENTO DE HEMOCOMPONENTES
…del fraccionamiento manual al
automatizado
THEI Cristina Arechabala THEI Beatriz Maddonni
Dra. Mónica I. Puppo Centro Regional de Hemoterapia Garrahan - 2014
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METODOS DISPONIBLES PARA OBTENER CONCENTRADOS PLAQUETARIOS (CP)
1-SANGRE ENTERA
PLASMA RICO EN PLAQUETA (PRP) = CP Individuales
BUFFY COAT (BC) = Pooles
2-AFERESIS
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SISTEMA DE CALIDAD
a. Basado en políticas nacionales y normativas internacionales
b. Procedimientos operativos documentados y validados
c. Reporte de errores e incidentes
d. Personal entrenado y evaluado
e. Equipamiento e insumos validados y aprobados para su uso
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PUNTOS CRITICOS DE LA PRODUCCION PLAQUETARIA
• Selección del donante (POE AT DON 03) = AAS - AINES
• Extracción (POE AT DON 05)
– Lavado y la asepsia del pliegue codo
– Derivación de los primeros 30 ml
– Estandarización de volúmen y tiempo de extracción <15’ con balanzas agitadoras que controlan el volúmen, el flujo y el tiempo de extracción
– Peso Bolsa 523-619 gr
• Almacenamiento previo al procesamiento (POE COMP 04)
– Tiempo < 8 hs (PRP) (o 20 hs para BC)
– Temperatura 20 a 24ºC
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Preparación de CP a partir de PRP - POE COMP 04 Centrifuga Refrigerada Thermo Fisher Scientific - Validación
1. VELOCIDAD
2. TIEMPO
3. TEMPERATURA
4. CC CONCENTRADOS PLAQUETARIOS
5. CC GLOBULOS ROJOS
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Preparación de CP a partir de PRP (POE COMP 04)
• 1º centrifugación SE a 22ºC, 3.20 min a 2630 RPM para separar PRP y GR
• 2º centrifugación del PRP 22ºC 5 min a 4100 RPM para separar CP y el plasma
• CP deben descansar 1 hora y luego de irradiadas se almacenan 20 hs en agitación a 20 - 24ºC
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Preparación de CP a partir de PRP (POE COMP 04)
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PREPARACION DE POOLES LEUCORREDUCIDOS POE COMP 05
Seleccionar 3 o 4 CP Isogrupo <24 hs y unirlos en forma estéril con conector
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PREPARACION DE POOLES LEUCORREDUCIDOS POE COMP 05
Rotular la bolsa del filtro con los Nº de c/ CP, filtrar, homogeneizar, llenar, rotular y separar la bolsita de muestra p/ realizar el control bacteriológico (POE COMP 14)
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RESULTADO: POOLES de 3 a 4 unidades de CP a partir de PRP
• Isogrupo ABO
• Leucorreducidos <24 hs
• Irradiados
• Con control Bacteriológico
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Preparación de Pooles = Ventajas
1. Tamizaje de contaminación bacteriana prealmacenamiento
• 1 test x pool= reduce costos y trabajo
2. Leucorreducción prealmacenamiento • Previene producción de citoquinas durante el
almacenamiento
• Previene la aloinmunización postransfusional
• Componentes de bajo riesgo para CMV
3. Conservación x 5 días 20-24ºC (vs 4horas para pooles preparados en circuito abierto)
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Procesador Automático de Sangre Entera -REVEOS-
Centrifuga refrigerada computarizada que procesa simultáneamente 4 unidades de sangre entera
Contiene un cabezal con 4 vasos fijos donde se ubican bolsas cuádruples
Cada vaso contiene una prensa hidráulica que permite separar las diferentes fracciones de la sangre centrifugada
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Procesador Automático -REVEOS-
Separa la unidad de sangre entera en
• Plasma
• Concentrado de glóbulos rojos
• Plaquetas interinas => Pooles
• Buffy coat
Combina en una misma plataforma
• Balanceo de las unidades
• Centrifugación
• Separación de componentes
• Sellado de las tubuladuras
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Procesador Automático de Sangre Entera - REVEOS
Protocolo de validación
Evaluar la calidad de los hemocomponentes obtenidos después de la separación automática con el procesador multi unidades
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PROTOCOLO DE VALIDACION DEL EQUIPO REVEOS
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OBJETIVO
1. Evaluar el procedimiento de Procesamiento Automático de unidades de sangre entera con el Sistema Reveos en sus dos modalidades, Fresh y Overnight.
2. Evaluar los descartables utilizados
3. Evaluar la calidad de los productos obtenidos:
• CGR
• Plasma
• Pooles de plaquetas
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RESPONSABLES DE LA VALIDACION
De la realización de la validación:
THEI Arechabala Cristina
THEI Maddonni Beatriz
De la supervisión de la validación:
Dra. Mónica Puppo
Dr. Sebastián Oknaian
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DESCRIPCIÓN DEL SISTEMA:
1. Bolsa de sangre Reveos
2. Dispositivo Reveos
3. Software Reveos System
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Bolsa de sangre Reveos:
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PROTOCOLOS DE PROCESAMIENTO REVEOS
PROTOCOLO FRESH: SE reposa de 2 a 8 horas previo procesamiento
PROTOCOLO OVERNIGHT
SE reposa de 8 a 18 horas previo
procesamiento
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MUESTRAS REQUERIDAS (número y tipo)
1. Evaluación del procedimiento de Procesamiento Automático:
- 500 unidades de SE con protocolo 3C Fresh
- 500 unidades de SE con protocolo 3C Overnight
2. Evaluación de los descartables:
- bolsas de sangre Reveos
- pooling set para plaquetas y solución aditiva de plaquetas
3. Evaluación de la Calidad de los Componentes procesados: se controlarán
- 64 GR (32 F y 32 ON),
- 64 plasmas (32 F y 32 ON)
- 64 pooles de CP (32 F y 32 ON)
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CRITERIOS DE ACEPTACIÓN:
1. Evaluación del Procedimiento de Procesamiento Automático
El procedimiento debe ser eficiente (tiempo versus cantidad de productos obtenidos y desempeño del equipamiento)
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CRITERIOS DE ACEPTACION:
2. Evaluación de los descartables
Inspección visual: aguja buen bisel, anticoagulante no turbio, empaque sellado, tubuladura no tapada ni acodada
Compatibilidad con los procedimientos vigentes.
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CRITERIOS DE ACEPTACION:
3- Evaluación de la Calidad de los Componentes procesados:
GLÓBULOS ROJOS:
Hematocrito: 50 - 70%
Hemoglobina: 40 g/bolsa
Hemoglobina libre < 600 mg/dL (<0.8%)
Peso 289 -441 g (ref. Datos históricos)
K+ a los 42 días: <51.8 mEq/l (ref. Evaluation of the properties of components prepared and stored after holding of whole blood units for 8 and 24 hours at ambient temperatura. Transfusion 2011; 51S: 7S.)
Leucocitos residuales < 5 x 106/bolsa
Cultivo negativo
Inspección visual: ausencia de hemólisis y coágulos
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CRITERIOS DE ACEPTACION:
3- Evaluación de la Calidad de los Componentes procesados:
POOLES DE PLAQUETAS:
Recuento de Plaq > a 5,5 x 1010 x el número de unidades que componen el pool.
pH > 6,8
Peso de pooles de 3 unidades > 210 g y pooles de 4 unidades > 280 g.
Leucocitos residuales < 5 x 106 leucocitos/bolsa
Cultivo negativo
Inspección visual: observación de swirling
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CRITERIOS DE ACEPTACION:
3- Evaluación de la Calidad de los Componentes procesados:
Plasma:
Peso > 193 g (referencia: Datos históricos)
Concentración de Factor VIII ≥ 0.70 UI/mL (%)
Factor V ≥ 0.70 UI/mL (%)
von Willebrand ≥ 0.70 UI/mL (%)
fibrinógeno ≥ 150 mg/dL
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INICIO DE LA VALIDACION
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Puesta en Funcionamiento del Sistema Reveos
1. Seleccionar el procedimiento (3C)
2. Introducir los código de barras de:
• Nº de identificación de donante
• Nº de lote y marca del descartable TRAZABILIDAD
• Nº operador
3. Cargar el conjunto de 4 bolsas de sangre
4. Realizar el procedimiento (17’)
5. Descargar el conjunto de 4 bolsas
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Funcionamiento del Sistema Reveos
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Funcionamiento del Sistema Reveos
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Funcionamiento del Sistema Reveos
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COMPONENTES OBTENIDOS Buffy Coat
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COMPONENTES OBTENIDOS Concentrado de Glóbulos Rojos
AGREGADO DE SAG MANITOL
FILTRADO PREALMACENAMIENTO
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COMPONENTES OBTENIDOS Unidades de Plaquetas Interinas (IPU)
• IPU provenientes del procesamiento Fresh quedan en agitador para armar los pooles al día siguiente (no más de 24 horas desde su procesamiento)
• IPU provenientes del procesamiento Overnight quedan en agitador durante 2 horas antes de armar el pool.
IPU: unidades hiper concentradas de plaquetas en 30 ml plasma
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ARMADO DE POOLES CON EL POOLING SET Y LA SOLUCION ADITIVA
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• Isogrupo ABO
• Leucorreducidos < 24 hs
• En solución aditiva (Títulos de aglutininas naturales <1/32)
• Con control Bacteriológico
• Irradiados
ARMADO DE POOLES CON EL POOLING SET Y LA SOLUCION ADITIVA
¿PLASMA? => FREEZER
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RESULTADOS DE LA VALIDACION
Se procesaron 898 unidades de SE :
339 procesadas con Protocolo 3C Fresh (500)
559 procesadas con Protocolo 3C Overnight (500)
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PROCEDIMIENTO
El procesamiento con el sistema REVEOS es mas rápido y el equipo es fácil de usar (user friendly)
No es necesario balancear las unidades antes de colocarlas en la centrifuga
Es un solo ciclo de centrifugación 17’
No requiere la separación manual
RESULTADOS DE LA VALIDACION
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DESCARTABLES
No se observaron eventos relacionados a la inspección visual
Fueron compatibles totalmente con los procedimientos vigentes (bolsa de derivación de los primeros 30 ml, solución aditiva, filtro de leucorreducción de CGR y de Plaquetas)
RESULTADOS DE LA VALIDACION
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Calidad de los CGR procesados por Sistema Reveos (67)
Cultivo Negativo (67) Leucocitos residuales (14) 0.21 x 10(6) leucocitos/bolsa (SD 0.17)
REFERENCIA Peso 289 -441 g Vol: 280 +-50 ml Hto: 50 - 70% Hb: >40 g/bolsa Hb libre < 600 mg/dL % hemolisis <0.8% K+ : <51.8 mEq/l Cultivo negativo Leuc. residuales < 5 x
106/bolsa
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Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – Recuento de Plaquetas (n 40)
NOTA
• 4 pooles de 4 tuvieron un recuento < al límite de aceptación (22.0 x 10¹º): Rango de 15.85 a 21.06 x 1010 Todas las unidades provenían de procesamiento Fresh
• 4 pooles de 3 tuvieron un recuento < al límite de aceptación (16.5 x 10¹º): Rango de 12.01 a 14.08 x 10¹º todas las unidades provenían de procesamiento Fresh
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pH promedio: 7.15 (SD 0.09)
• No hubo pooles con valores inferiores al límite de aceptación.
• 27 Pooles Fresh: – pH promedio: 7.13 (SD 0.10)
• 11 Pooles Overnight: – pH promedio: 7.19 (SD 0.04)
Ref: pH > 6,8
Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – pH (n 38)
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Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – PESO (n 39)
Pooles de 3 unidades interinas (n= 15)
• Peso promedio: 278.7g Desvío estándar 11.1g.
• No hubo pooles con valores < al límite de aceptación (210 gr)
Pooles de 4 unidades interinas (n= 24)
• Peso promedio: 302.8g Desvío estándar 14.6g.
• Un pool tuvo un peso 279g < al límite de aceptación (280g)
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Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos – Leucocitos residuales (n 38)
• Leucocitos residuales promedio: 0.07 x 10(6)leucocitos/bolsa (SD 0.12 x 106)
• No hubo pooles con valores superiores al límite de aceptación.
• 27 Pooles Fresh: Leucocitos residuales promedio: 0.04 x 106 leucocitos/bolsa (DS 0.06)
• 11 Pooles Overnigth: Leucocitos residuales promedio: 0.13 x 106 leucocitos/bolsa (DS 0.20)
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Calidad de los Pooles de plaquetas procesados por Sistema Reveos
Cultivo (n 38)
Todos los resultados fueron negativos.
Inspección visual (n 40)
El swirling en todos los pooles fue de 4+.
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Calidad de los Plasmas procesados por Sistema Reveos (n 66)
Referencias: Peso > 193 g, Factor VIII ≥ 0.70 UI/mL (%), Factor V ≥ 0.70 UI/mL (%), von Willebrand ≥ 0.70 UI/mL (%), fibrinógeno ≥ 150 mg/dL
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COMENTARIOS FINALES
• La estandarización de los procesos y de los componentes
• La repetibilidad de los resultados de los controles
• La trazabilidad de todo el proceso de producción: operador, procedimiento, unidades e insumos
• La ausencia de complejidad para el manejo del equipo
• Como los pooles se resuspenden en solución aditiva, se estudiaron adicionalmente, 31 pooles de CP, para la titulación de anticuerpos naturales anti A y anti B, resultando < a 1/32
• Permite procesar unidades hasta 18 hs después de extraídas
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• El sistema Reveos permite mejorar la
eficiencia del fraccionamiento,
reduciendo el tiempo de procesamiento,
estandarizando la preparación y
manteniendo la calidad de los
hemocomponentes
COMENTARIOS FINALES