El género Candida contiene más de 200 especies, de las que cerca del 10% son
patógenas para el humano, causando un amplio rango de manifestaciones clínicas,
destacando la candidiasis invasiva (CI) por su elevada morbilidad y mortalidad en
pacientes inmunocomprometidos.1 Candida albicans era considerada el principal
agente etiológico de la CI, pero actualmente se reportan otras especies no-albicans,
algunas de las cuales no son sensibles al antifúngico de elección, como C. krusei.2 Por lo
que para el adecuado tratamiento de los pacientes con CI es necesario un diagnóstico
específico; sin embargo, no siempre es posible aislar e identificar al patógeno por
medio de los métodos convencionales.3,4 Por ello, se han desarrollado pruebas
moleculares para la detección e identificación de Candida spp., no obstante no son
usadas en la mayoría de los laboratorios intrahospitalarios debido a su costo o
complejidad metodológica.
Identificación simultánea de ocho especies de Candida por PCR simplex
Eduardo García Salazar1, María del Rocío Reyes-Montes2, Esperanza Duarte Escalante2, Erick Martínez Herrera1, Gustavo Acosta Altamirano1, María Guadalupe Frías De León1
1Dirección de Investigación, Hospital Regional de Alta Especialidad de Ixtapaluca2 Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM
OBJETIVO
MATERIAL Y MÉTODOS
RESULTADOS
CONCLUSIÓN
AGRADECIMIENTOS
Proyecto financiado por CONACyT PDCPN-216112
Diseñar un ensayo de PCR simplex para la identificación de Candida spp. en muestras clínicas
La PCR simplex, utilizando los oligonucleótidos CasppF y R, tiene un potencial uso para el diagnóstico de la candidiasis en laboratorios intrahospitalarios de bajos recursos.
REFERENCIAS
Diseño de oligonucleótidosSecuencias GenBank5 (18S-ITS1-5.8S-ITS2-26S Candida spp.)
Estandarización de la PCRDNA cepas ATCC de C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei,
C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. dubliniensis
Análisis de especificidadDNA de Candida spp., Histoplasma capsulatum, Sporothrix schenckii,
Paracoccidioides brasiliensis, Aspergillus fumigatus, A. niger, Cryptococcus neoformans
Análisis de sensibilidadConcentraciones de DNA de Candida spp. (10 pg/µL-20 ng/µL)
Validación en muestras clínicasDNA muestras de sangre, orina y esputo
Figura 1. Los oligonucleótidos CasppF y CasppR amplifican, por PCR simplex, fragmentos específicos para C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. dubliniensis. M: marcador de tamaño molecular de 100 pb, C(-): control negativo
Figura 2. Amplificación del DNA de aislados de a) Candida albicans, b) C. glabrata, con
los oligonucleótidos Caspp-F y Caspp-R. M: marcador de tamaño molecular 100 pb. T:
testigo negativo.
Figura 3. Especificidad de los marcadores SCAR a) C. parapsilosis, b) C.
lusitaniae.. M: marcador de tamaño molecular 100 pb. T: testigo
negativo.
Figura 4. Sensibilidad de los oligonucleótidos Caspp-F y Caspp-R para amplificar el DNA de a) Candida albicans,
b) C. glabrata, c) C. tropicalis, d) C. parapsilosis. M: marcador de tamaño molecular 100 pb. T: testigo
negativo.
Figura 5. Detección e identificación de Candida spp. en muestras de sangre, LBA y orina, utilizando los
oligonucleótidos Caspp-F y Caspp-R y DNA de cepas de referencia de Candida. albicans, C. glabrata, C.
tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei, C. guilliermondii, C. lusitaniae y C. dubliniensis. M: marcador de tamaño
molecular 100 pb. T: testigo negativo.
1. de Bedout C, Gómez BL. Infectio. 2010; 14:S159-S171.
2. De la Torre-Saldaña VA, et al. Med. Int. Méx. 2014; 30:121-132.
3. Reséndiz-Sánchez J, Morales-Aguirre JJ. Bol. Med. Hosp. Infant. Mex. 2007; 64:91-98.
4. Morales-Mendoza Y, et al. Dermatol. Rev. Mex. 2013; 57:155-158.
5. Altschul SF et al. Nucl Acids Res. 1997; 25:3389-3402.
INTRODUCCIÓN