UNIVERSIDAD AUTONOMAMETROPOLITANA
IZTAPALAPA
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN:EFECTO DE LA NORETISTERONA Y DE SUS
METABOLITOS REDUCIDOS SOBRE LA CAPACIDADFERTILIZANTE DE LOS OVOCITOS DE RATÓN.
LUGAR DE REALIZACIÓN:DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA
MOLECULAR. INSTITUTO NACIONAL DEPERINATOLOGÍA.
PRESENTA:PAOLA BANESSA DÍAZ CERVANTES.
MATRICULA:97335376
ASESORES:BIO. EXP. HÉCTOR FLORES HERRERA
DR. PABLO DAMIÁN MATSUMURA
FIRMA DE LOS ASESORES
11 DE JUNIO DEL 2003
INDICE
Introducción................................................................................................ 4
Antecedentes.............................................................................................. 7
Hipótesis................................................................................................... 13
Objetivo.................................................................................................... 13
Material y Método.................................................................................. 14
Resultados.............................................................................................. 18
Discusiones............................................................................................ 27
Bibliografía.......................................................................................... 39
4
TITULO DEL PROYECTO
EFECTO DE LA NORETISTERONA (NET) Y DE SUS
METABOLITOS REDUCIDOS SOBRE LA CAPACIDAD
FERTILIZANTE DE LOS OVOCITOS DE RATÓN.
INTRODUCCIÓN
El proceso de fecundación en los mamíferos puede definirse como una
secuencia de acontecimientos celulares y moleculares coordinados en los que
participan los gametos masculinos (espermatozoide) y femeninos (ovocito).
Consiste en la fusión y penetración de un espermatozoide en un ovocito y
finaliza con la primera división normal del cigoto. Para que este proceso
natural se pueda llevar a cabo con éxito, es necesario que ambos gametos
hayan llevado a cabo el proceso de maduración antes de ponerse en contacto,
este proceso tiene como finalidad la preservación de la especie (Buch, 1999).
A pesar de que la fecundación es uno de los procesos indispensables para la
preservación de la especie uno de los problemas más complejos en la
5
actualidad es la sobrepoblación, especialmente en los países en desarrollo, en
donde se incluye México, cuya tasa de natalidad sigue siendo alta (Pérez-
Palacios y cols., 1987) a pesar de que se han implementado importantes
campañas para promover la planificación familiar, desafortunadamente las
tasas de nacimiento, han bajado a un ritmo menor al esperado (Rosenfield A. y
Fathalla M., 1994).
Los métodos anticonceptivos se pueden dividen en dos grandes grupos:
mecánicos y hormonales, que se usan solos o en combinación. Dentro del
primer grupo tenemos a los anillos vaginales, dispositivos intrauterinos
(DIU’s), espermaticidas, espumas, condón, diafragmas y tapón cervical,
mientras que en el grupo de los anticonceptivos hormonales se encuentran los
orales, píldoras, inyectables e implantes subdérmicos (fíg.1). Las
formulaciones orales por lo general presentan un componente estrogénico y un
componente progestacional, el cual es una progestina sintética (Rosenfield A.
y Fathalla M., 1994) cuyo mecanismo de acción radica en la supresión de la
secreción preovulatoria de LH y FSH y por lo tanto inhibe la ovulación
eficazmente (Rudel, HW., 1967).
6
Fig.1. Muestra algunas de las presentaciones de los métodos anticonceptivos.
De acuerdo a la estructura química las progestinas sintéticas se han clasificado
en dos grupos: las que derivan de la l7-hidroxi-progesterona y aquellas que
derivan de la l9-nortestosterona.(Pérez-Palacios y cols, 1981).
La Noretisterona (NET); 17α- etinil- 17ßhidroxi- 4 estrene- 3 ona), es una
progestina sintetica de la serie 19-nortestosterona que presenta la
incorporación de un grupo etinilo en el C 17, con ordenación alfa, lo que
genera que pierda la actividad androgénica y adopte una actividad
progestacional (Pérez-Palacios y col., 1991). Esta progestina sintética fue
producida en la ciudad de México en 1951, obra de tres distinguidos
investigadores, los doctores Jorge Rosenkranz, Luis Ernesto Miramontes y
Carl Djerassi (Lemus, y cols., 1998).
7
A partir de su síntesis, NET ha sido la progestina sintética más empleada en
formulaciones anticonceptivas hormonales orales, inyectables y subdérmicas.
A través del uso clínico de NET y de estudios experimentales, se han
acumulado evidencias que indican que además del potente efecto
progestacional, la NET es capaz de producir, después de su administración
efectos estrogénicos, androgénicos en diferentes especies de mamíferos,
incluyendo al humano (Pérez- Palacios y cols., 1981).
La Noretisterona puede sufrir biotransformaciones en órganos blancos como
útero, hipotálamo, hipófisis anterior y próstata ventral de rata (Larrea, et. Al.,
1987). Estas biotransformaciones son debidas a la reducción en el anillo A, de
dicho compuesto, pasando de NET a 5α-dihidroNET (5α-NET), 3β,5α
tetrahidroNET (3β,5α-NET) y 5α,3α-tetrahidroNET (5α, 3 α-NET) (Chávez
y cols., 1985).
El efecto anticonceptivo de NET se ejerce en la unidad hipotálamo- hipófisis
en donde inhibe la ovulación al evitar la liberación cíclica de gonadotropinas
hipofisiarias. Por otro lado posee un efecto directo sobre el endometrio,
debido a que durante la terapia con este compuesto se origina un desequilibrio
en los niveles hormonales de estrógenos- progesterona, en consecuencia se
8
afecta el crecimiento y maduración idónea del endometrio (Goebelsman y
cols., 1979).
Flores y colaboradores (1999) han observado que al incubar a los
espermatozoide de ratón previamente capacitados, con 5α- NET se inhibe la
reacción acrosomal (RA); mientras que la incubación simultánea con
Progesterona y 5α- NET reduce el porcentaje de gametos reaccionados y este
efecto está en función de la dosis de 5α- NET, efecto que no es revertido por
la progesterona. Estos mismos autores observaron que al incubar a los
ovocitos fertilizados en presencia de 5α- NET se ocasionan daños en su
desarrollo hasta la etapa de mórula (Flores y cols.,1999), sin embargo, no se
conoce si dicho compuesto afecta la integridad del ovocito o la madurez del
mismo, la cual se alcanza dentro del folículo.
Al ser liberados del folículo, los ovocitos lo hacen rodeados de un complejo
de células, denominado células cúmulo que son importantes ya que sin éstas el
esperma no podría penetrar el óvulo y por lo tanto además la fecundación no
se podría llevar a cabo (Fig.2), sin embargo, estas capas de células cúmulo
están fuertemente compactadas a su alrededor, por lo que se comportan como
barreras selectivas que dificultan a la mayoría de los espermatozoides a que
9
alcancen las membranas del óvulo y evitar la polispermia. Además, los óvulos
inmaduros no pueden ser fertilizados adecuadamente hasta que alcanzan la
madurez final y el indicador de la madurez del óvulo es la presencia del
"cuerpo polar", el cual se visualiza como una pequeña célula que sobresale del
óvulo primario, liberando así la mitad de su carga genética (cromosomas), lo
que le permitirá al esperma aportar la carga genética faltante, indispensable
para un desarrollo embrionario normal (Burks y cols., 1995).
Fig.2- Muestra la estructura de un ovocito maduro.
ANTECEDENTES
Los estudios realizados para esclarecer el modo de acción de Noretisterona
han demostrado que la biotransformación de este compuesto, a nivel de los
Cuerpo Polar
Células Cúmulo
10
órganos blanco, modula la expresión de sus diferentes actividades biológicas,
ya que sus productos de transformación metabólica interactúan con los
diferentes receptores intracelulares y esto se debe a que estas
biotransformaciones le confieren al compuesto 5α reducido (5α−NET)
afinidad por los receptores intracelulares de progesterona (RP) y andrógenos
(RA) con constantes de afinidad de 2.6 x 10-7M y 1.0 x 10-8M
respectivamente (Chávez y cols., 1985), además de los efectos
antiprogestacionales (Pérez-Palacios y cols., 1991). Mientras que los
metabolitos tetrahidro-reducidos (3α, 5α− y 3ß, 5α- NET) presentan afinidad
por los receptores a estrógenos (RE), (Chávez y cols., 1985) confiriéndoles
efectos estrogénicos (Larrea y cols., 1987).
Fig.2: Muestra la estructura química de la NET y sus metabolitos
5α reducido.
5α- Esteroide reductasa
3β- Esteroide deshidrogenasa
11
Castro y colaboradores (1995) demostraron que al administrar NET en dosis
altas (5mg/kg) a conejas gestantes, se reduce la expresión del gene de la
uteroglobina (UTG; proteína que es regulada por progesterona), la
implantación del ovocito fecundado y el factor temprano de embarazo (FET).
Claros ejemplos de efectos antiprogestacionales, por otro lado, al administrar
5α- NET a dosis menores (1.5mg/kg) se produce el mismo efecto
antiimplantación, la inhibición en la síntesis del FET y de UTG, así como de
su mRNA, en una magnitud similar al encontrado con RU-486, componente
antiprogestacional muy potente (Castro y cols., 1995).
En cuanto al efecto de la NET y de su metabolitos reducidos sobre los
espermatozoides capacitados de ratón, se observó que al incubarlos en
presencia de 5α- NET no se induce la reacción acrosomal (RA), mientras que
la incubación simultánea con Progesterona y 5α- NET reduce el porcentaje de
gametos reaccionados en un efecto dependiente de la dosis. Dado que la RA
es un paso importante para la fertilización y como la 5α- NET reduce el
porcentaje de los espermatozoides reaccionados, se estudio la capacidad
fertilizante de los mismos tratados con 5α- NET y se encontró que la adición
de este compuesto reduce la proporción de los ovocitos fertilizados en forma
dependiente de la dosis.
12
Flores y colaboradores (1999), han observado que al incubar a los ovocitos
fertilizados en presencia de 5α- NET se ocasionan daños en el desarrollo
hasta la etapa de mórula, los cuales se caracterizan por la falta de unión entre
los blastómeros, la pérdida de integridad de sus membranas, así como una
reducción en el tamaño de sus blastómeros, a diferencia del grupo que
recibió progesterona que se desarrollaron de manera normal. Durante este
estudio no se exploró la posibilidad de que la NET y sus metabolitos afectan
en la capacidad fertilizante de los ovocitos, por lo que en el presente trabajo
se quiere determinó si NET y su 5α NET puede interaccionar con los
ovocitos, alterando su capacidad de ser fertilizado y el papel que tienen las
células cúmulo en la interacción con 5α NET y sobre el porcentaje de
fertilización.
13
HIPOTESIS:
El compuesto 5α-NET reduce el porcentaje de fertilización y las células
cúmulo juegan un papel importante en este proceso .
OBJETIVO GENERAL:
Determinar la capacidad antifertilizante de 5α NET y el papel de las células
cúmulo en el porcentaje de fertilización de los óvulos de ratón.
OBJETIVOS PARTICULARES:
1) Analizar la capacidad de 5α−NET para inhibir el porcentaje de
fertilización en óvulos.
2) Evaluar el efecto de las células cúmulo en la capacidad antifertilizante
de 5α−NET.
3) Determinar la interacción de 5α−NET con proteínas de membrana que
unen a P4.
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MATERIAL Y MÉTODO
Esteroides
Noretisterona y sus metabolitos fueron proporcionados por el Dr. Gustavo
García de la Mora de la Facultad de Química, UNAM.
Animales:
Se utilizaron ratones hembras de la cepa Balb/c de 12-16 semanas de edad y
ratones machos de la cepa C57bl/6j de 16 semanas de edad. Estos animales se
mantuvieron a temperatura ( 22 ± 1ºC ) y humedad ( 55 ± 5 % ) constantes,
agua y comida ad libitum y con ciclos de luz / oscuridad de 12/12 horas.
Obtención de los espermatozoides:
Con la finalidad de extraer los espermatozoides, ratones machos fueron
sacrificados por dislocación cervical. Se disectó el epidídimo y se depositó en
el medio Tyrode (T6) compuesto de NaCl 124.5 mM, KCl 2.6 mM, MgCl2
0.49 mM, NaH2PO4 0.39 mM, glucosa 5.5 mM, NaHCO3 25.0 mM, CaCl2 1.7
mM a un pH 7.2 y suplementado con 0.4 g/100 ml de albúmina de suero de
bovino. Posteriormente los espermatozoides fueron incubados en este medio
15
para su capacitación por 90 minutos a 37 °C, en una atmósfera de 5 % CO2 y
95 % aire (Mann, 1988; Eppig, 1995).
Obtención de los ovocitos
A las ratones hembras se les administró intraperitonealmente 5 UI de PMSG
(Intevert International B.V boxmeer-Holland). Después de 48 horas se les
inyectaron 5 UI de hCG (Hoechst Marion Roussel) y se sacrificaron por
dislocación cervical 19 horas después de la ultima inyección para obtener los
ovocitos, la región del ovario-oviducto fue disectada y transferida al medio
T6-BSA. Posteriormente, con la ayuda de un microscopio de disección 16 X
(Zeiss) se localizó en el ámpula al complejo de los ovocitos-células cúmulo y
fue puncionada una aguja de insulina para permitir la salida de estos. Este
complejo fue aspirado por medio de una pipeta Pasteur adelgazada de la punta
y los ovocitos se incubaron en medio T6-BSA por 30 minutos. La eliminación
de las células cúmulo se realizó mediante el desacoplamiento de las mismas
con Hialuronidasa (1 µg/ml). Los ovocitos con y sin células recibieron los
siguientes tratamientos durante una hora:
Tabla1 : Tratamiento a los que fueron sometidos los ovocitos por un periodo
de 60 minutos.
16
GRUPO TRATAMIENTO
vehículo T6-BSA (500 µl)
vehículo ETOH (5.5%) (10-5M - 500 µl)
Testigo positivo Progesterona (P4) (10-5M – 500 µl)-
Muestra problema Noretisterona (NET 1x10-3 M)
Muestra problemaDistintas concentraciones de 5α−NET
( 1X10-5 a 1X10-12M) – 500 µl
Muestra problema
Distintas concentraciones de P4
P4 (1x10-5M a 1x10-12M) + 5α-NET
(1x10-5M) – 500 µl
Testigo negativo RU-486 (1x10-5M) – 500 µl
Concluido el tiempo de incubación se adicionaron los espermatozoides,
previamente capacitados (1 X 106 espermatozoides/ ml), para que se lleve a
cabo la fertilización in vitro durante un lapso de 90 minutos (Eppig, 1995). Al
término de este período los ovocitos fueron lavados con el medio T6-BSA y se
transfirieron al medio M16 – BSA que contiene NaCl 94.7 mM, KCl 4.7 mM,
KH2PO4 1.19 mM, MgSO4 1.18 mM, lactato de sodio 0.011 mM, glucosa 5.5
mM, penicilina 200 unidades / ml, estreptomicina 200 µg / ml, NaHCO3 25.0
17
mM, y ácido pirúvico 0.036 mM ajustado a un pH de 7.2 y suplementado con
0.4% BSA (M16-BSA). Después de 15 horas de exposición a los
espermatozoides se contó el porcentaje de los ovocitos que se desarrollaron
hasta una etapa de 2 células, el cuál fue utilizado como índice de fertilización
(Mann, 1988).
Evaluación de la Viabilidad
Tanto a los ovocitos sin fertilizar como los fertilizados (caracterizados por su
desarrollo hasta en el estadio de 2 células) se transfirieron al medio T6
ajustado a un pH de 2.5 por 10 minutos con la finalidad de eliminar la zona
pelúcida (ZP). Posteriormente los ovocitos libres de la ZP se incubaron por 10
minutos con azul tripano al 1%. Concluido este tiempo se colocaron en medio
T6 y se contó el número total de los ovocitos viables y no viables, donde las
células muertas incorporan el azul tripano al citoplasma por difusión pasiva y
los viables lo eliminan por transporte activo (Hutz, 1985).
Unión a Proteínas de Membrana
Los ovocitos tanto en presencia como en ausencia de células cúmulo se
colocaron en portaobjetos los cuales contenía 5µl de formaldehído, dejándose
secar a temperatura ambiente por 30minutos, concluido este tiempo se les
18
adicionó 5µl de PBS con la finalidad de lavar los ovocitos, posteriormente se
sometieron a los siguientes tratamientos:
GRUPO TRATAMIENTO
Control P4-BSA-ITFC
Muestra problema P4 (1X10-3M- 1X10-5M) + P4-BSA-
ITFC
Muestra problema 5α-NET (1X10-3M- 1X10-5M) + P4-
BSA-ITFC
Después de 30minutos se visualizaron en un microscopio de fluorescencia,
con la finalidad de observar si nuestros compuestos interaccionaban con
proteínas membranales.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO:
Se utilizó la prueba de ANOVA (análisis de varianza). Cabe destacar que se
manejo por cada grupo una n total de 75.
RESULTADOS
Al incubar a los ovocitos con P4, tanto en presencia de células cúmulo como
en ausencia de estas, ( de 73.7% y 76.2% respectivamente), se aprecia un
19
incrementó significativo en el porcentaje de fertilización en comparación con
T6-BSA (con células 48.6% y 57.2% sin células) y ETOH (con células 47.2%
con células y 52.2% sin células). Sin embargo al incubar a los ovocitos con
NET (82.8% con células cúmulo y 85.3% sin células cúmulo) se aprecia un
incremento en el porcentaje de fertilización mayor que el observado con
progesterona . También se puede observar que el porcentaje de fertilización en
presencia de células cúmulo es ligeramente menor, esto en comparación con
los ovocitos que presentan células cúmulo (gráfica 1).
0102030405060708090
100
T6 ETOH P4 NETTratamiento
% F
ertil
izac
ión
Con célulassin células
X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05
Gráfica 1- Muestra el porcentaje de fertilización, encontrado de los vehículos,
como del control positivo y NET.
b b
a a
20
Sin embargo, al incubar a los ovocitos con 5α- NET se observa una inhibición
en el porcentaje de fertilización por debajo del índice observado con los
vehículos ETOH y Medio T6- BSA) comportamiento muy similar al que
presenta RU- 486. Sin embargo, en presencia de células cúmulo se aprecia una
ligera disminución en el porcentaje de fertilización en todos los casos en
comparación de aquellos ovocitos que están ausentes de dicho complejo
(gráfica 2).
FERTILIZACIÓN CON 5α-NET
0102030405060708090
100
ETOH P4 NET 5a-NET RU-486TRATAMIENTOS
% F
ERTI
LIZA
CIÓ
N
con célulassin células
X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05
Gráfica 2: Porcentaje de fertilización encontrado, al incubar a los ovocitos en
presencia 5α- NET .
a
b b
cc
21
Con la finalidad de determinar si el efecto antifertilizante de 5α−NET es
debido a su actividad antiprogestaciónal, se variaron las concentraciones de
5α−NET (10-5M, 10-6M, 10-8M, 10-12M) en combinación con P4 en
concentración constante (10-5M). Se observo que el porcentaje de fertilización
es semejante al obtenido con P4 sola, cuando las concentraciones de 5α−NET
son bajas (1X10-12M) disminuye conforme se aumentan las concentraciones de
5α−NET, por lo que se puede observar que 5α−NET es capaz de revertir el
efecto de P4 (gráfica 3). El efecto de la presencia o ausencia de células
cúmulo sobre el porcentaje de fertilización es semejante al observado en los
experimentos anteriores, donde la presencia de células cúmulo reduce
ligeramente el porcentaje de fertilización, pero en ningún caso es
estadísticamente significativo.
22
CONCENTRACIONES CRECIENTES DE 5α-NET
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
ETOH P4 5a-NET+P4 5a-NET(10-6)
5a-NET (10-8)
5a-NET (10-12)
Tratamiento
% F
ertil
izac
ión con células
sin células
X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05
Gráfica 3: Porcentaje de fertilización al variar las concentraciones de 5α-NET y
mantener constantes las concentraciones de P4.
Posteriormente los ovocitos fueron incubados con distintas concentraciones de
P4 (10-5M, 10-6M, 10-8M, 10-12M) en combinación con una concentración
constante de 5 α-NET (10-5M), para determinar si P4 era capaz de revertir el
efecto de 5α−NET., encontrándose que a medida que vamos bajando las
1x10-5M 1x10-6M 1X10-8M 1X10-12M 5α-NET + + + + P4 (1x10-3M)
a
b
a c
a
b
23
concentraciones P4 el porcentaje de fertilización disminuye y este tiene un
comportamiento muy similar al encontrado con el vehículo, en cuanto a los
ovocitos que están en presencia o ausencia de células cúmulo, el porcentaje de
fertilización es ligeramente menor cuando los ovocitos están en presencia de
células cúmulo, sin embargo no hay una diferencia significativa.
CONCENTRACIONES CRECIENTES DE P4
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
ETOH P4 5a-NET 5a-NET+P4
P4(10-8) P4(10-10)
P4(10-12)
Tratamientos
% F
ertil
izac
ión con células
sin células
X + DE n = 75 óvulos por grupop<0.05
Gráfica 4. Muestra el porcentaje de fertilización cuando los ovocitos se
incubaron con distintas concentraciones de P4.
__ 1X10-5M 1X10-8M 1X10-10M 1X10-12M P4 + + + + + 5α− ΝΕΤ (1X 10−5Μ)
a
b
c
d d
a
c
24
Con respecto a los experimentos de la interacción de 5α−NET con proteínas
de membrana, se observó que al incubar los ovocitos con el ligando
fluorescente (P4-BSA-ITCF) que presentaban células cúmulo los sitios de
unión a P4 se saturaron ya que se distingue un halo fluorescente alrededor del
ovocito, sin embargo cuando son incubados en presencia de 5α−NET o con P4
a concentraciones bajas 10-5M se observa que la fluorescencia disminuye,
debido a que hay competencia por los sitios de unión a P4 y cuando se
emplean concentraciones mayores (10-3 M) de estos mismos compuestos, la
fluorescencia alrededor del ovocito prácticamente desaparece tanto en
presencia de 5α−NET como con P4 (Fig. 4).
control (P4-BSA-FITC) P4 (10-5M) P4 (10-3M)
25
5α- NET (10-5M) 5α- NET (10-3M)
Figura 4- Ovocitos que contienen células cúmulo incubados con el ligando
P4-BSA-ITCF (A), bajas concentraciones (1x10-5M) de P4 (C) ó 5α−NET
(D) y altas (1X10-3M) (E y F).
Control (P4-BSA-FITC) P4 (10-5M) P4 (10-3M)
26
5α-NET (10-5M) 5α-NET (10-3M)
Figura 5- Ovocitos a los que se les han removido las células cúmulo
incubados con el ligando P4-BSA-ITCF (A), y con bajas (1x10-5M) (B y D)
o altas (1X10-3M) (E y F) concentraciones de P4 ó 5α−NET.
Cuando se incubaron a los ovocitos que carecían de células cúmulo con el
ligando fluorescente P4-BSA-ITCF (Fig. 5), se observo que la fluorescencia es
menos intensa comparados con los ovocitos intactos (con células cúmulo) y
que al incubarlos con bajas (1x10-5M) ó altas (1x10-3M) concentraciones de
5α- NET ó P4 la fluorescencia alrededor del ovocito no desaparece
totalmente. Sin embargo la florescencia se reduce en un 50% cuando los
ovocitos sin células cúmulo son incubados con altas concentraciones de
5α−NET o P4.
27
DISCUSIÓN
Como se esperaba, los resultados de este estudio indican que NET tiene un
efecto progestacional semejante al de P4, en función de un aumento en el
porcentaje de ovocitos fertilizados (82.8% con células cúmulo y 85.27% sin
células cúmulo), con respecto a los incubados con P4 (73.7% con células
cúmulo y 76.19% sin células cúmulo) y a los vehículos. También se observó
que 5α-NET tiene un efecto inhibitorio sobre el porcentaje de fertilización,
semejante al observado con el control negativo RU- 486, potente
antiprogestina. Es importante señalar que al incubar a los ovocitos con
distintas concentraciones de P4 desde 1x10-5M hasta 1x10-12M y manteniendo
constante la concentración de 5α-NET (10-5M), se observó que el porcentaje
de fertilización se reestablece a medida que la concentración de P4 es
mayor, sin alcanzar el porcentaje de fertilización observados con P4 sola. En
el experimento inverso, cuando se incubaron a los ovocitos con distintas
concentraciones de 5α-NET (de 1x10-5M a 1x10-12M) y con una
concentración constante de P4 (10-5M) se observó que el porcentaje de
fertilización se reestablece a medida que se disminuye la concentración de 5α-
NET hasta alcanzar valores semejantes a P4, cuando la concentración de 5α-
28
NET es de 1x10-12M. En cuanto a los experimentos de unión a proteínas que
unen P4, se observa 5α-NET se une a los mismos sitios de unión a P4,
además estos experimentos están sugiriendo que las células cúmulo pueden
servir como un filtro para el paso selectivo de componentes. Lo cierto es que,
con base a estos resultados, la 5α-NET podría ser un método anticonceptivo
muy eficiente, ya que afecta los procesos más importantes para que pueda
llevarse a cabo la fecundación, estos procesos son la disminución de la
reacción acrosomal (Flores y cols., 1999), por parte del espermatozoide y
disminuye la capacidad fertilizante de los óvulos. Las formulaciones en las
que se presentaría probablemente 5α-NET serían en dispositivos intrauterinos
medicados, espumas vaginales, esto en mujeres y en hombres condones que
contengan dicha formulación. Cabe destacar que en inyecciones hormonales
mensuales o anticonceptivos orales probablemente no daría resultado, ya que
NET lleva a cabo reducciones en órganos blancos, por lo que podría tener otro
efecto y no el esperado. Sin embargo se tendrían que realizar diversos
estudios para su uso en dichas formulaciones.
29
BIBLIOGRAFÍA
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