UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
“EVALUACIÓN IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE
ESENCIAL DE LANTANA CAMARA SOBRE EL MICROORGANISMO
STAPHILOCOCCUS AUREUS”.
Autor: Valencia Cantuña Verónica Obdulia
Tutor: Dra. Ma. Isabel Zambrano
Quito, abril 2018
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El tribunal constituido por: Dra. Mariela Balseca
Dra. Gabriela Tapia
Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título (o
grado académico) de Odontóloga presentado por la señorita Verónica Obdulia Valencia
Cantuña.
Con el título:
“EVALUACIÓN IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE ESENCIAL DE LANTANA CAMARA SOBRE EL MICROORGANISMO STAPHILOCOCCUS AUREUS”
Emite el siguiente veredicto: (aprobado/reprobado) ______________________________
Fecha: _________________________________
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre y Apellido Calificación Firma
Presidente Dra. Mariela Balseca __________ _______________
Vocal 1 Dra. Gabriela Tapia __________ _______________
Vocal 2 ____________________ __________ _______________
v
DEDICATORIA
En primera instancia a Dios quien inspiro mi espíritu al darme paciencia y sabiduría
para lograr este reto.
A mis padres, quienes han sido mi guía y un ejemplo a seguir como personas
incansables, apoyándome todo este tiempo y permaneciendo junto a mí en aquellos
momentos de intranquilidad y agotamiento ante las circunstancias de mi vida, también a
mis hermanas, por sus concejos y palabras de aliento y optimismo.
A José, amigo y confidente, por su apeo y confianza en todo mi trayecto académico.
A todos los que me apoyaron para concluir esta etapa de mi vida, para ellos es esta
dedicatoria, pues es a ellos a quienes se las debo por su apoyo incondicional.
vi
AGRADECIMIENTO
Una inmensa gratitud por el apoyo incondicional que me ha brindado la Dra. Ma. Isabel
Zambrano mi tutora y docente, gracias por los consejos el tiempo y paciencia invertidos
en la revisión de este trabajo.
Mi eterno agradecimiento a la Dra. Mercedes Almagro Directora Médica del Hospital
de Especialidades Eugenio Espejo, la persona que ha hecho que este trabajo sea posible.
A la Lcda. Yolanda Andrade del laboratorio de microbiología de la Facultad de
Odontología de la Universidad Central del Ecuador, por compartir sus experiencias y
conocimientos en el manejo de microorganismos.
A su vez agradezco al Dr. Darwin Rondan quien me ayudó en la elaboración del aceite
esencial de la planta Supirosa en la Facultad de Ingeniería Química de la Universidad
Central del Ecuador.
Por último, a mi Decana la Doctora Blanca Real, pues gracias a ella y su buen corazón
fue posible la culminación de esta etapa.
vii
CONTENIDO
©DERECHOS DE AUTOR ................................................................................................................ ii
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL ............................................................................. ii
APROBACIÓN DEL TRABAJO DE TITULACIÓN POR PARTE DEL TUTOR ......................................... iii
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL .................................................................iv
DEDICATORIA ................................................................................................................................ v
AGRADECIMIENTO ........................................................................................................................vi
CONTENIDO .................................................................................................................................. vii
LISTA DE TABLAS............................................................................................................................ ix
LISTA DE FIGURAS.......................................................................................................................... x
LISTA DE GRÁFICOS ....................................................................................................................... xi
LISTA DE ANEXOS ......................................................................................................................... xii
RESUMEN .................................................................................................................................... xiii
ABSTRACT .................................................................................................................................... xiv
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................. 1
CAPITULO I .................................................................................................................................... 2
MARCO TEÓRICO ........................................................................................................................... 2
1.1. FITOTERAPIA ................................................................................................... 2
1.2. FITODONTOLOGÍA ......................................................................................... 2
1.3. LANTANA CAMARA ........................................................................................ 2
1.3.1. Descripción Taxonómica y Botánica .......................................................... 3
1.3.2. ESTRUCTURA Y COMPOSICIÓN ......................................................... 3
1.3.3. USOS MEDICINALES ............................................................................... 3
1.4. Ecología de la Cavidad Bucal ............................................................................. 5
1.5. Reseña histórica del Genero Staphylococcus .................................................... 5
1.6. Staphilococcus aureus ......................................................................................... 6
1.6.1. Morfología Y Características ..................................................................... 6
1.6.2. Factores De Virulencia ................................................................................ 7
CAPITULO II ................................................................................................................................. 12
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .............................................................................................. 12
2. PROBLEMA .......................................................................................................................... 12
2.1. OBJETIVO ......................................................................................................................... 13
2.1.1. Objetivo General ......................................................................................................... 13
2.1.2. Objetivos específicos ................................................................................................... 13
2.2. JUSTIFICACIÓN ................................................................................................. 14
viii
2.3. HIPÓTESIS ........................................................................................................... 16
CAPITULO III ................................................................................................................................ 17
METODOLOGÍA............................................................................................................................ 17
3. Tipo de Diseño de la Investigación ...................................................................................... 17
3.1. POBLACIÓN Y MUESTRA ................................................................................ 18
3.1.1. Población ............................................................................................................ 18
3.1.2. Tamaño de la muestra ....................................................................................... 18
3.1.3. UNIDAD DE MUESTRA ................................................................................. 18
3.2. Criterios de inclusión y exclusión......................................................................... 18
3.2.1. Criterios de inclusión ........................................................................................ 18
3.2.2. Criterios de exclusión ........................................................................................ 18
3.2.3. Variables ............................................................................................................ 19
3.2.4. Conceptualización de las variables .................................................................. 19
3.2.5. Ejecución de variables ...................................................................................... 20
3.3. Procedimientos y técnicas ..................................................................................... 21
3.3.1. Materiales y Métodos ........................................................................................ 21
3.3.2. Preparación del aceite esencial de Lantana camara (Supirosa) ..................... 21
3.3.3. Materiales para realizar el cultivo ................................................................... 24
3.3.4. Materiales para realizar el estudio microbiológico ........................................ 24
3.3.5. Procedimiento y técnica .................................................................................... 25
3.4. Aspectos éticos ....................................................................................................... 31
CAPITULO IV ................................................................................................................................ 32
4.1.1. Análisis de resultados ........................................................................................ 32
CAPITULO V ................................................................................................................................. 42
Discusión ..................................................................................................................................... 42
CAPITULO VI ................................................................................................................................ 44
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ...................................................................................... 44
CONCLUSIONES ........................................................................................................................... 44
RECOMENDACIONES ................................................................................................................... 45
Referencias bibliográficas ........................................................................................................... 46
ANEXOS ....................................................................................................................................... 49
ix
LISTA DE TABLAS
Tabla 1 Cuadro de la ejecución de variables .............................................................................. 20 Tabla 2 Sensibilidad definida por Duraffourd ............................................................................ 29 Tabla 3 Tabla de resultados ........................................................................................................ 32 Tabla 4 Pruebas de normalidad .................................................................................................. 33 Tabla 5 Comparación entre 24H y 48H ...................................................................................... 33 Tabla 6 Comparación a las 24H .................................................................................................. 35 Tabla 7 Comparación a las 48 H ................................................................................................ 39
x
LISTA DE FIGURAS
Fig. 1 Lantana camara "Supirosa" ............................................................................................... 2 Fig. 2 Staphilococcus aureus ........................................................................................................ 6 Fig. 3 Supirosa después de 3 semanas ........................................................................................ 21 Fig. 4 Supirosa Recolectada ........................................................................................................ 21 Fig. 5 Trituración manual de las hojas y flores (Supirosa) ......................................................... 22 Fig. 6 Proceso de las hojas .......................................................................................................... 22 Fig. 7 Hidrodestilación por arrastre de vapor de agua ................................................................ 22 Fig. 8 Obtención del aceite ......................................................................................................... 23 Fig. 9 Aceite esencial de Supirosa al 100% ................................................................................ 23 Fig. 10 Staphylococcus aureus ATCC 29213 ............................................................................. 25 Fig. 11 Discos de filtro blancos .................................................................................................. 25 Fig. 12 Hisopos ........................................................................................................................... 25 Fig. 13 Cultivo en tubo de ensayo............................................................................................... 26 Fig. 14 Medios de cultivo en agar sangre ................................................................................... 26 Fig. 15 Cajas en la Cabina de seguridad biológica ..................................................................... 27 Fig. 16 Inoculación del Staphilococcus aureus ........................................................................... 27 Fig. 17 Colocación de los Discos ................................................................................................ 28 Fig. 18 Incubación ...................................................................................................................... 28 Fig. 19 Medición del Halo de inhibición .................................................................................... 29 Fig. 20 Halo de inhibición del Staphilococcus aureus ................................................................ 29 Fig. 21 Cajas Petri en autoclave .................................................................................................. 30 Fig. 22 Almacenamiento Temporal ............................................................................................ 30
xi
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1 Pueba de Wilcoxon ................................................................................................... 34 Gráfico 2 Comparación de medidas .......................................................................................... 36 Gráfico 3 Muestras Independientes a las 24H ........................................................................... 37 Gráfico 4 Prueba de dos a dos ................................................................................................... 38 Gráfico 5 ComparacIón de medidas a las 48 H ......................................................................... 39 Gráfico 6 Muestras independientes a las 48 H .......................................................................... 40 Gráfico 7 Prueba dos a dos a las 48 H ....................................................................................... 41
xii
LISTA DE ANEXOS
Anexo 1 Renuncia Al Trabajo Estadístico .................................................................................. 49 Anexo 2 Solicitud Al Hospital De Tercer Nivel Y De Especialidades Eugenio Espejo Para
Petición Del Microrganismo Staphilococcus Aureus, Cepa ATCC 29213 ................................. 50 Anexo 3 Solicitud Para El Uso De Microbiología De La Facultad De Odontología De La
Universidad Central Del Ecuador. .............................................................................................. 51 Anexo 4 Certificado Del Uso Del Laboratorio De Química De La Universidad Central Del
Ecuador ....................................................................................................................................... 52 Anexo 5 Solicitud Para El Manejo De Deshechos ...................................................................... 53 Anexo 6 Certificado Del Subcomité De Ética De La Universidad Central Del Ecuador ........... 54 Anexo 7 Certificado Del Sistema Antiplagio URKUND ........................................................... 55 Anexo 8 Certificado Del Abstract ............................................................................................... 56 Anexo 9 REPOSITORIO ........................................................................................................... 57
xiii
Tema: Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del aceite esencial de lantana
camara sobre el microorganismo staphilococcus aureus.
Autor: Verónica O Valencia Cantuña
Tutor: Dra. Ma. Isabel Zambrano
RESUMEN
El propósito de este estudio fue demostrar el efecto antibacteriano o inhibitorio del aceite
esencial de la especie Lantana camara “Supirosa”, por encontrarse en gran cantidad en
nuestro país y al formar parte de la medicina tradicional de la cultura indígena
ecuatoriana, en ésta ocasión se demostró su efectividad sobre cepas del microorganismo
Staphilococcus aureus. (ATCC® 29213™), en una evaluación in vitro. Se evaluó la
actividad antimicrobiana en 15 cultivos en cajas Petri y en cada uno de ellos se colocó 3
discos de papel filtro, el primer disco impregnado del extracto del aceite esencial de la
planta al 100%, el segundo embebido con el control positivo Clorhexidina 0.12%, y el
tercero impregnado con suero fisiológico al 0.9%, se realizó mediante el método de
difusión en disco para determinar la sensibilidad bacteriana a través de halos de inhibición
tanto a las 24 y 48 horas de estar expuesta. Los resultados demostraron que es posible la
extracción de aceite esencial de esta especie de Verbenaceae, además se comprobó que
el aceite de Lantana camara ocasionó efecto antibacteriano del 12.47 mm de diámetro a
las 24 horas y del 16.86 mm de diámetro a las 48 horas frente a cepas de Staphilococcus
aureus. (ATCC® 29213™). Como conclusión se encontró que existe un efecto inhibitorio
positivo de alto rango por el aceite esencial de Supirosa en contra de Staphilococcus
aureus. (ATCC® 29213™).
PALABRAS CLAVE: LANTANA CAMARA, STAPHYLOCOCCUS AUREUS, VERBENACEAE
xiv
Subject: In vitro Evaluation of antibacterial effect of lantana camara essential oil over
staphilococcus aureus microorganism.
Author: Verónica O Valencia Cantuña
Tutor: Dra. Ma. Isabel Zambrano
ABSTRACT
The purpose of this research was to demonstrate the antibacterial or inhibitory effect of
the essential oil of the special Lantana camara(“Supirosa”) because it is found in large
quantities in our country and because it is part of the traditional medicine of the
Ecuadorian indigenous culture; this time it was demonstrated its effectiveness on strains
of the microorganism Staphylococcus aureus. (ATCC ®29213™) in an in vitro
evaluation. The antimicrobial activity was evaluated in 15 cultures in Petri dishes; in each
one of them three discs of filter paper were placed; the first disc impregnated with the
extract of the essential oil of the plant at 100%, the second one imbibed with the positive
control Chlorhexidine 0.12%, and the third impregnated with 0.9% physiological saline
solution; it was carried out using the disk diffusion method to determine bacterial
sensitivity through inhibition halos both al 24 and 48 hours after exposure. The results
showed that it is possible to extract essential oil from this species of Verbenaceae; it was
proved that Lantana camara oil produced an antibacterial effect of 12.47mm at 24 hours
and 16.86mm al 48 hours against strains of Staphylococcus aureus. (ATCC ®29213™)
In conclusion, it was found that there is a positive inhibitory effect of high rank by the
essential oil of “Supirosa” against Staphylococcus aureus (ATCC ®29213™).
KEY WORDS: LANTANA CAMARA, STAPHYLOCOCCUS AUREUS,
VERBENACEAE
1
INTRODUCCIÓN
La medicina tradicional ha ido evolucionando a lo largo del tiempo su desarrollo ha
ocasionado que grandes industrias farmacéuticas se concentren en buscar nuevos
principios activos para expresar en forma legítima el uso terapéutico de una planta y sus
beneficios.
En los últimos años a nivel mundial se puede apreciar una tendencia al consumo de
productos naturales, es un fenómeno de cambio de actitud hacia lo natural, sumado a esto,
numerosas investigaciones indican el efecto antibacteriano que tienen los aceites
esenciales extraídos de plantas y especias. De esta forma el control microbiano mediante
el uso de aceites esenciales se ha convertido en una de las áreas de investigación más
importante teniendo como finalidad la sustitución de conservadores sintéticos por lo
orgánico o natural. (1)
Existen variedades de plantas medicinales que presentan propiedades terapéuticas y que
han sido ampliamente estudiadas, en éste caso hablaremos de la familia Verbenácea que
tiene 51 géneros, entre los que se encuentra el género Lantana con 160 especies,
destacándose Lantana cámara , conocida como “Supirosa” en Ecuador, estudios han
reportado actividad antimalárica, antibacteriana, antitumorales y antihipertensivos. (2)
La cavidad oral alberga innumerables microorganismos, es un ecosistema de complejidad
considerable. Estos microorganismos constituyen la flora oral del ser humano, la cual es
altamente diversa, son parte importante en la salud y la enfermedad oral; por lo tanto, es
de vital importancia buscar nuevas sustancias para ayudar a controlar la proliferación de
los mismos.
El staphilococcus aureus, es una bacteria grampositiva coagulasa positiva, importante
agente causal de lesiones cutáneas y mucosas que al proliferar puede causar patologías.
(3)
Por lo tanto, este trabajo de investigación se enfoca en determinar la acción antibacteriana
del aceite esencial de Lantana camara sobre las cepas del microorganismo
Staphilococcus aureus.
2
CAPITULO I
MARCO TEÓRICO
1.1. FITOTERAPIA
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), refiere el concepto de fitoterapia
como una ciencia encargada del estudio de productos vegetales ya sea en tisanas,
extractos, zumos, ungüentos, jarabes, aceites esenciales, para su posterior utilización en
la terapia de estados patológicos. (7) Definiéndolo como un tratamiento médico de algunas
enfermedades basado en el empleo de plantas medicinales y sustancias vegetales. (8)
1.2.FITODONTOLOGÍA
Rogério Cavalcante investigador brasileño, define en su libro que la Fitodontología es
una parte de la fitomedicina que se preocupa de estudiar y aplicar de forma científica a
las plantas medicinales en fitomedicamentos para usarlos en el área odontológica. (9)
1.3.LANTANA CAMARA
Fig. 1 Lantana camara "Supirosa"
Fuente: V. Valencia, 2017
3
1.3.1. Descripción Taxonómica y Botánica
Según Carvajal (2) la descripción es la siguiente
Familia: Verbenácea
Nombre científico: Lantana camara L.
Nombre común en Ecuador: Supirosa.
Nombre en inglés: common lantana, shrub verbena.
Origen: introducida.
Lugar de origen: América Central.
Estado UICN: No registrada en la lista roja de especies amenazadas de la UICN
(2013.2).
Hábito: arbusto.
Usos: Ornamental y como cercas vivas.
Ubicación principal en la parroquia de Pomasqui y al sur de Quito: viviendas varias,
creciendo de forma natural en terrenos baldíos. (10)
1.3.2. ESTRUCTURA Y COMPOSICIÓN
La Lantana camara perteneciente a la familia de las Verbenáceas, es un arbusto
considerado como una maleza de elevada y probada toxicidad para el ganado, además de
presentar propiedades medicinales, así como plaguicida, también ha sido utilizada como
planta ornamental en diferentes países. (8) (Fig. 1).
La planta tiene forma de arbusto mide entre 1 a 3 metros de alto, presenta tallos
usualmente con espinas, tiene hojas de 2 a 12 cm de longitud y de 0.5 a 6 de ancho, sus
flores son en forma de cabezuela de 0.5 a 3 cm de diámetro de colores amarillo, rojas,
naranjas, morado y una raíz pivotante. (11)
1.3.3. USOS MEDICINALES
Al tener en cuenta que estas plantas ocupan vastas extensiones de tierra en el planeta. El
aceite esencial que se obtiene a partir de sus hojas, flores, frutos y raíces ha sido utilizado
tanto en perfumería como de uso médico. (11)
4
En el uso médico la Lantana camara ha sido usada como:
Antihipertensivo (2)
Tiene actividad biológica incluyendo efectos antibacterianos. (2)
Ha sido usado como antitumoral (2)
Utilizada para el tratamiento de malaria. (11)
Usada para tratar el reumatismo. (2)
Lesiones en piel. (11)
Gracias a las propiedades de su corteza presenta actividad antipirética. (2) (11)
Funciona como cicatrizante. (12)
Actúa como antiinflamatorio. (11)
Eficaz para tratar la diarrea (11)
Usada para tratar la conjuntivitis, la dermatitis, la faringitis y ulceras bucales. (11)
(13)
Reduce la presión arterial. (13)
Ayuda a controlar el dolor de los cólicos menstruales. (13)
Afecciones gastrointestinales. (13), catarro, resfriados, tos. (11)
Propiedades antiasmáticas. (13)
Demuestra ser un potente calmante o sedante que actúa directamente sobre el
sistema nervioso. (14)
Según José Fernando Caroprese (9) en su investigación nos indica que el alcaloide
lantamina, obtenido de la corteza de las ramas y de las raíces de L. camara, muestra una
intensa actividad antipirética y antiespasmódica, propiedad comparable con la quinina.
(11)
Sin embargo, Romeu Carlos (12)nos indica que las hojas de la Lantana camara son muy
utilizadas en la medicina popular para el tratamiento de enfermedades como el tétano, el
reumatismo y la malaria, es una importante fuente de fósforo y potasio, por poseer
propiedades farmacológicas, incluyendo la bactericida, insecticida, antimutagénica y su
acción repelente contra insectos vector de la malaria. (11) (12)
En una investigación realizada por Zaida Carvajal y cols. (2), nos informa que el género
Lantana camara ha reportado actividad antimalárica y de las hojas de esta especie se han
aislado diferentes principios activos, que poseen diversas actividades biológicas
incluyendo efectos antibacterianos. (2)
Alan Venegas del Castillo y María N. Vásquez (13) en su investigación afirman que los
resultados obtenidos y basándose en trabajos anteriores el S. aureus presenta mayor
inhibición del crecimiento frente al aceite de L. camara y que este efecto inhibitorio contra
5
bacterias Gram positivas se debería a los componentes propios del aceite, quedando
demostrado que la familia del género Verbenácea presenta un potencial efecto
antimicrobiano en bacterias de interés clínico. (16)
1.4.Ecología de la Cavidad Bucal
Según Negroni, (17) la ecología de la cavidad bucal comprende el estudio de las relaciones
entre los microorganismos y el ambiente, su conocimiento radica en determinar el proceso
que involucra fundamentalmente la etiopatogenia de las enfermedades bucales y como
consecuencia su prevención, también contribuye a identificar las complicaciones
sistémicas para la microbiota bucal.
1.5.Reseña histórica del Genero Staphylococcus
Los cocos se asocian por primera vez a enfermedades humanas cuando fueron observados
en materiales purulentos provenientes de abscesos humanos. (17) En 1880 el cirujano
escocés Alexander Ogston demostró que cocos agrupados en forma de racimos eran la
causa de ciertos abscesos piógenos en humanos. Louis Pasteur llegó a una conclusión
similar al mismo tiempo, pero en París. En el año 1882, Ogston llamo a estos cocos
“Staphilococcus”, derivando el nombre de los termino griegos staphile (racimo de uvas)
y kokkus (frutilla). Morfológicamente, Ogston propuso ese término de manera de poder
diferenciarlo de los estreptococos, formadores de cadenas. Además, Ogston demostró que
la inyección a ratones de pus conteniendo estos cocos producía los mismos síntomas
observados en el humano. También observo que, si calentaba el pus y lo trataba con fenol,
la enfermedad se prevenía. (17) (18)
Según Negroni las bacterias de tipo staphilococcus se encuentran ampliamente
distribuidas en la naturaleza, especialmente en la piel, las glándulas cutáneas y las
mucosas, el tracto intestinal, genitourinario y el aparato respiratorio superior.(20)
Son un amplio grupo de bacterias Gram-positivas, cuyo diámetro oscila entre 0.5 y 1.5
micras. Este género posee alrededor de 35 especies de las cuales se destacan:
6
Staphylococcus aureus. (18)(Fig.2)
Staphylococcus epidermidis. (18)
Staphylococcus saprophyticus. (18)
1.6.Staphilococcus aureus
Fig. 2 Staphilococcus aureus
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
1.6.1. Morfología Y Características
Socorro y cols. (19), sugieren en su investigación que el Staphilococcus aureus es un coco
Gram positivo, aerobio facultativo, inmóvil, de 0.5 a 1 micrómetro de diámetro, que no
forma esporas, no posee capsula formar grupos de células irregulares semejantes a
7
racimos de uvas. En extendidos de supuración los cocos aparecen solos, en pares, en
racimos o en cadenas cortas. (4)
1.6.2. Factores De Virulencia
El Staphilococcus aureus tiene un metabolismo de tipo fermentativo y anaerobio
facultativo, catalasa positiva y oxidasa negativa. Poseen un antígeno específico el
Polisacárido A que unido al mucopéptido que se encuentra presente en su pared celular
en donde también está la Proteína A que se une a la región Fc de la Inmuno globulina
(IgG) le da la actividad fagocítica. (20)
Un peptidoglucano de la pared celular actúa como una endotoxina atrayendo los
leucocitos PMN y activa la lisozima, hidrolizando el complemento.
Los ácidos teicoicos favorecen la adhesión al igual que la capa de slime, constituida por
hidratos de carbono y proteínas extracelulares. Esta capa es muy importante ya que
facilita la adhesión e inhibe la quimiotáxis y la fagocitosis. (10)
Entre las enzimas las más conocidas es la coagulasa o factor clumping la cual formaría
un coágulo que internalizaría el microorganismo haciéndolo más difícil de fagocitar. (16)
La hemolisina estafilocócica o toxinas α, β, γ, δ se diferencian por el tipo de eritrocito que
lisan, así como también actuando sobre otras células: (18)
La toxina α daña el músculo liso, las células de la piel los macrófagos y las
plaquetas.
Las toxinas β o esfingolielinasa C son especialmente para las células con
esfingomilelina.
Las toxinas γ actúan sobre los fosfolípidos de las membranas.
Las toxinas δ es toxica para muchas células polimorfonucleares, macrófagos
linfocitos y plaquetas.
La leucocidina presenta dos compuestos que en forma sinérgica actúan dañando PMN y
macrófagos y al parecer altera la permeabilidad de la membrana celular.
Las hemolisinas destruyen a los eritrocitos por medio de canales proteicos.
Toxina epidermolítica o exfoliatina, son A y B codificadas por un plásmido y producen
la dermatitis aguda exfoliativa que es una lesión cutánea.
8
Toxina del síndrome del shock tóxico o toxina pirogénica, puede causar una lesión
escarlatiniforme. No le encuantra en todos los casos de shock séptico estafilocócico. (17)
ESTAPHYLOCOCCUS AUREUS Y SU RELACION EN LA CAVIDAD ORAL
Como se ha mencionado anteriormente el S. aureus es una bacteria que provoca
comúnmente infecciones se en la piel como foliculitis, impétigo, forúnculos y celulitis y
que gracias a las toxinas que libera puede llevar a episodios de infecciones alimenticias o
síndrome de choque tóxico.
Aunque rara vez estas infecciones causadas por estos microorganismos, pueden
ocasionalmente volverse graves cuando existe una ruptura en la piel o mucosa
permitiendo que las bacterias ingresen a la circulación sanguínea, compromete
articulaciones, corazón, sangre y sistema nervioso central. Generalmente estas
infecciones afectan a las personas que presentan un sistema inmune deprimido o que se
encuentran en tratamiento con medicamentos quimioterapéuticos. (21)(23)
Existe una extensa literatura sobre el Stafilococus aureus, sin embrago, todavía hay poca
evidencia que demuestran aspectos cualitativos y cuantitativos que indiquen colonización
e infección oral por estos microorganismos, de forma general se sabe que estas
infecciones incluyen queilitis angular, algunas infecciones endodónticas, parotiditis y
más recientemente una forma de mucositis oral en pacientes mayores dependientes de
nutrición parenteral, niños inmunocomprometidos pacientes con enfermedades
sistémicas como artitis reumatoide y diabetes mellitus. (23) (24)
Patologías relacionadas con el Staphilococcus aureus.
Queilitis angular
Conocidas como “boqueras” es un tipo de estomatitis que involucra inflamaciones de
fisuras o grietas radiales dispuestas en las comisuras labiales ya sea unilaterales o
bilaterales, son dolorosas, tiene una evolución crónica con brotes de agudización.
Aparecen cubiertas por una pseudomembrana cremosa blanquecina o amarillenta, en
ocasiones la lesión puede extenderse a la mucosa retrocomisural. Podemos reconocer
factores de causa local como puede ser la disminución o la pérdida de la dimensión
vertical de la cara en aquellas personas con edentulismo o portadores de prótesis
inadecuadas. También pueden estar relacionadas con la edad avanzada y aparición de
9
arrugas en la zona comisural, facilitándo la colonización en estos pliegues de patógenos
oportunistas como Staphilococcus aureus. (13)
El tratamiento es un proceso doble que consiste en identificar los factores predisponentes
y erradicar la infección local, la combinación antifúngica y antibiótica suelen ser eficaces
para tratar la queilitis angular según lo expresa Philip Sapp (24)
Según Wood (25) una de sus causas fundamentales parece ser la infección por C. albicans,
asociada en algunos casos a una mezcla de otros microorganismos, por ejemplo
Stafilococus aureus
La deficiencia nutricional
La deficiencia nutricional también se ha implicado en la causa de la queilitis angular. Este
factor lleva a una falta de vitamina B y hierro, es la causa más común de la queilitis
angular en el tercer mundo o países en desarrollo. La deficiencia de hierro sin embargo
no tiene una conexión directa con la ocurrencia de queilitis pero se cree que reduce la
capacidad del sistema inmunitario que luego puede permitir la infección por S. Aureus.
Generalmente el resultado de la desnutrición, incluso la dieta que no incluye el consumo
de alimentos que contienen vitamina B, también puede ser secundaria a enfermedades
subyacentes, tales como trastornos gastrointestinales.
La dermatitis de contacto irritante
Se incluye en los factores que causan la queilitis angular, y se caracteriza por el daño a la
superficie de la piel tan rápidamente como antes que la piel puede ser capaz de reparar el
daño. Saliva o babeo en las esquinas de los labios o que continuamente entran en contacto
con los labios está implicada en la aparición de la queilitis. La saliva ayuda en el proceso
de digestión a través de su composición de enzima digestivo. La enzima digestiva puede
dañar los tejidos blandos de la boca, especialmente en las comisuras de los labios, donde
gran parte de la saliva es constantemente puesta en común. La constante acumulación de
saliva en las comisuras de la boca y la zona adyacente puede conducir a la maceración, el
potencial de crecimiento y las infecciones por hongos y bacterias.
10
Enfermedades sistémicas
Los trastornos gastrointestinales pueden conducir a la deficiencia nutricional, que a su
vez puede provocar la aparición de queilitis. La granulomatosis orofacial es un trastorno
que causa la ampliación de los labios potenciales para la distorsión anatómica o alteración
que también pueden afectar a las esquinas de la boca y posteriormente llevar a la queilitis.
Pulpitis
La pulpitis se define como un proceso inflamatorio que afecta a la cavidad pulpa del
diente, y que pasa por varias etapas (pulpitis reversible e irreversible) antes de llegar a
una necrosis pulpar, como consecuencia de caries e infecciones por diferentes causa entre
ellas las yatrogenias, traumatismos y bacterias como la presencia de Staphilococcus
aureus. (14)
Absceso periapical
Complicación por caries dental y también puede resultar por un trauma a la pieza dental.
Las aberturas en el esmalte dental permiten que las bacterias infecten el centro del diente
(la pulpa). La infección puede propagarse desde la raíz del diente hasta los huesos que lo
sostienen.
Es la lesión que se presenta inicialmente cuando las circunstancias son adversas.
Probablemente es el proceso más doloroso para los pacientes y posiblemente uno de los
más peligrosos, a menudo es el resultado de una pulpitis aguda cuyo exudado se extiende
hacia los tejidos blandos y duros adyacentes. Dado que contiene una o más cepas de
microorganismos bacterianos virulentos, el exudado suele tener exotoxinas y enzimas
líticas capaces de destruir las barreras tisulares, además no existe un orificio que permita
el drenaje desde la pulpa a través de la corona hacia la cavidad bucal, produciéndose una
presión interna dentro de la membrana periodontal que origina la extrusión del diente de
su alveolo y la rápida extensión del exudado por todo el hueso medular subyacente. (24)
La infección ocasiona una acumulación de pus (tejido muerto, bacterias vivas y muertas,
glóbulos blancos) e inflamación de los tejidos internos del diente. Esto causa un dolor
intenso. Si la pulpa del diente muere, el dolor se puede detener, a menos que se desarrolle
11
un absceso. Esto es especialmente válido si la infección sigue estando activa y continúa
diseminándose y destruyendo tejido. (15)
Sinusitis Maxilar
La sinusitis maxilar puede ser aguda o crónica, puede provocar tumefacción sobre el seno
y la eminencia molar, así como dolor infraocular. La palpación sobre el maxilar
incrementa el dolor, y los dientes con raíces adyacentes al seno suelen doler o ser
sensibles a la percusión, el dolor también puede referirse a otros dientes de la arcada y al
oído, y en la sinusitis crónica existen normalmente secreciones nasales y postnasales
acompañada de respiración fétida y obstrucción o dolor vago en el lado facial afectado
(16)
Osteomielitis
La osteomielitis es una infección bacteriana del hueso para un número alarmante de
pacientes que son admitidos en hospitales, el Staphilococcus aureus es un patógeno
bacteriano prominente y el agente causal aislado más frecuente de la osteomielitis
inducida por infección. El tratamiento de las infecciones por osteomielitis es un desafío
debido a una variedad de factores, incluyendo la baja biodisponibilidad de los antibióticos
en el tejido óseo, el aumento de la resistencia a los antibióticos en patógenos bacterianos
y las propiedades similares al biofilm de la infección. En muchos casos, los médicos se
dejan con el desbridamiento quirúrgico como la única opción para eliminar las bacterias
invasoras y lograr un sitio estéril. Cuando se trata de una articulación protésica infectada,
a menudo se requiere la extracción y el reemplazo de la articulación. Debido a estos
desafíos, la osteomielitis es devastadora para muchos pacientes con consecuencias
dolorosas a largo plazo y limitadas opciones de tratamiento. (17)
12
CAPITULO II
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
2. PROBLEMA
Frente a la velocidad con la que las bacterias logran desarrollar resistencia a fármacos
tradicionales y ya que la producción de nuevas moléculas es lenta, el uso de plantas con
fines terapéuticos es de gran utilidad, ya que de ellas son obtenidas innumerables
sustancias químicas. Estudios recientes han demostrado que los vapores generados por
los aceites esenciales de plantas poseen efectos antibacterianos, siendo estas nuevas
alternativas eficaces para el control de las infecciones bacterianas. (1)
La medicina natural es considerada como una de las alternativas terapéuticas en todo el
mundo, especialmente en países tercermundistas en donde el uso empírico de las plantas
ha sido una opción por su bajo costo y fácil acceso.
Ecuador es una región privilegiada en el mundo por presentar una biodiversidad
enriquecida con innumerables especies vegetales, estos últimos años han sido
investigadas numerosas especies de plantas y han reportado efectos fitoterapéuticos. Es
el caso de la Lantana camara que gracias a investigaciones en varios países como
Colombia, Venezuela y Cuba se ha utilizado como antimicrobiano, antifúngico,
antiasmático, etc. Es por ello que con la presente investigación se pretende utilizar su
aceite esencial como alternativa antibacteriana para preservar la salud de la cavidad oral
frente a microorganismos, tales como el Staphilococcus aureus. (3)
El Staphilococcus aureus, conocido comúnmente como estafilococo áureo o dorado, es
una bacteria anaerobia facultativa grampositiva productora de coagulasa y catalasa que
se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimándose que una de cada
tres personas se halla colonizadas, pero no infectadas. Puede producir una amplia gama
de enfermedades, que van desde infecciones cutáneas y de las mucosas relativamente
benignas, hasta enfermedades de riesgo vital. Además, también puede afectar al aparato
gastrointestinal, ya sea por presencia física de Staphilococcus aureus o por la ingesta de
la enterotoxina estafilocócica secretada por la bacteria. (4)
13
2.1. OBJETIVO
2.1.1. Objetivo General
Determinar el efecto inhibitorio del aceite esencial de la planta Lantana camara
“Supirosa” sobre el microorganismo Staphilococcus aureus.
2.1.2. Objetivos específicos
Obtener aceite esencial de las hojas y flores de la planta Lantana camara mediante la
técnica de hidrodestilación.
Evaluar el halo de inhibición del microorganismo Staphilococcus aureus frente al aceite
esencial de Lantana camara al 100% en la caja Petri a las 24 horas.
Evaluar el halo de inhibición del microorganismo Staphilococcus aureus frente al aceite
esencial de Lantana camara al 100% en la caja Petri a las 48 horas.
Comparar el halo de inhibición del aceite esencial de Lantana camara al 100% de
concentración frente al Gluconato de Clorhexidina al 0.12%.
14
2.2.JUSTIFICACIÓN
A lo largo del último siglo la comunidad científica ha logrado grandes avances en la
creación de nuevos compuestos químicos cuyo objetivo ha sido la inhibición y evitar la
proliferación de bacterias, su resultado ha hecho que disminuyan ciertas enfermedades
que muchas veces han ocasionado verdaderas epidemias.
Es un hecho que estas investigaciones han tenido éxito y se han prolongado a todas las
áreas de la salud, en Odontología se han implementado sustancias naturales en enjuagues
bucales, pastas dentales, cambiando de esta forma la actitud hacia lo ecológico y natural.
(29) Es por ello, que con el presente trabajo se busca recolectar información actual de
extractos de sustancias naturales que actúen sobre microorganismos que afectan la
cavidad oral, así como también que sirva de base para los profesionales en Odontología
para aplicar en la práctica profesional.
La mayoría de las plantas contienen propiedades medicinales y efectos fisiológicos
múltiples, debido a que poseen más de un principio activo, estos corresponden a
compuestos químicos propios de la planta, es por esto que existe un gran interés por parte
de los investigadores en descubrir los métodos y sustancias naturales que posean
propiedades antibacterianas. (30)
Con el afán de encontrar diferentes alternativas para combatir las enfermedades causadas
por bacterias podemos determinar que las plantas producen compuestos con propiedades
antimicrobianas y pueden ser empleadas como agentes biosidas sobre cierto tipo de
microorganismos es por eso que esta investigación propone evaluar el efecto
antibacteriano in vitro del aceite esencial de “Lantana Camara” (Supirosa), sobre el
Staphilococcus aureus, un agente que normalmente puede encontrárselo en cualquier
zona anatómica del cuerpo humano (mucosas, piel), pero al proliferar puede volverse
patógeno produciendo diferentes afecciones a nivel de la cavidad oral como queilitis
angular, algunas infecciones endodónticas, parotiditis y más recientemente una forma de
mucositis oral en pacientes mayores dependientes de nutrición parenteral, niños
inmunocomprometidos, pacientes con enfermedades sistémicas como artitis reumatoide
y diabetes mellitus,(23) (24) también es causante de foliculitis, impétigo, forúnculos y
celulitis.(3)
15
Los seres humanos son un reservorio natural del Staphilococcus aureus, entre el 30 y el
50% de los adultos sanos están colonizados, y entre el 10 y el 20% se mantienen
colonizados permanentemente. Esta bacteria forma parte de la microbiota normal del ser
humano y tiene colonización selectiva de narinas, pliegues intertriginosos, perineo, axilas
y vagina, no obstante, las personas colonizadas tienen un riesgo mayor de sufrir
infecciones. (5)
La observación, identificación, descripción e investigación experimental de los efectos
de las drogas utilizadas en la medicina tradicional es un concepto reciente de la
etnofarmacología, surgido en la década de los 60’s en el ámbito de los agentes
psicoactivos que han ayudado a grandes farmacéuticas hacer uso de las plantas y su
potencial para obtener agentes terapéuticos que ayuden al tratamiento de algunas
enfermedades de gran prevalencia entre la población. (3)
En el Ecuador se la conoce como Supirosa es un arbusto que se utiliza como ornamental
y como cercas vivas, se originó en América Central y en el Ecuador se encuentra ubicada
principalmente en la parroquia de Pomasqui y al sur de Quito, también creciendo de forma
natural en terrenos baldíos. (3)
El aceite esencial es obtenido de las partes de la planta como hojas, flores, tallos y frutos,
la composición y nivel antimicrobiano que alcanza varía de acuerdo a estas. (6)
En el caso de la Lantana camara sus hojas y flores fueron las que se usaron para extraer
el aceite esencial y con esto su compuesto activo diclorometano, el mismo que es usado
en la industria farmacéutica, para la fabricación de esteroides, antibióticos, y vitaminas.
El presente proyecto demostró que el componente principal del aceite esencial de esta
planta tiene propiedades antibacterianas y estudios realizados en diferentes países como
Colombia, Perú y Cuba demuestran el poder bactericida contra microorganismos como el
Staphilococcus aureus. (3)
16
2.3.HIPÓTESIS
a. H1: La eficacia antibacteriana del aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de
concentración tiene efecto inhibitorio sobre Staphilococcus aureus.
b. H0: La eficacia antibacteriana del aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de
concentración no tiene efecto inhibitorio sobre Staphilococcus aureus.
c. H2: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración tiene efecto
inhibitorio sobre Staphilococcus aureus en 24 horas de exposición
d. H0: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración no tiene efecto
inhibitorio sobre Staphilococcus aureus en 24 horas de exposición
e. H3: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración tiene efecto
inhibitorio sobre Staphilococcus aureus en 48 horas de exposición
f. H0: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración no tiene efecto
inhibitorio sobre Staphilococcus aureus en 48 horas de exposición
17
CAPITULO III
METODOLOGÍA
3. Tipo de Diseño de la Investigación
Basándonos en las características de la investigación y por los objetivos planteados se
determina un estudio de tipo experimental “in vitro”, transversal, prospectivo, analítico y
bibliográfico.
Investigación experimental: se debe a que se trabajó con tres discos de papel blanco
humedecidos con aceite esencial de Lantana camara al 100%, otro disco blanco
humedecido de Gluconato de clorhexidina al 0,12% y por ultimo con suero fisiológico al
0.9%.
In vitro: debido a que ésta investigación incluyó modelos prácticos en cultivo
bacteriológicos enriquecidos y fueron analizados en un laboratorio.
Transversal: se recolectaron datos sobre la investigación en un solo momento y en un
tiempo único.
Prospectivo: los datos se registraron en un periodo de tiempo determinado desde el
desarrollo del estudio en el presente hacia su posterior evolución y se midió halos de
inhibición para saber si existe efecto antibacterial o inhibitorio.
Analítico: porque se investigó y analizó las causas del efecto antibacteriano de la Lantana
camara sobre el Staphilococcus aureus.
Bibliográfico: porque se basó en varios autores de textos, libros, revistas y artículos que
nos aportaron información confiable.
18
3.1.POBLACIÓN Y MUESTRA
3.1.1. Población
Conformadas por un número infinito de cepas de Staphilococcus aureus ATCC 29213.
3.1.2. Tamaño de la muestra
La selección de la muestra se realizó de manera intencional y de tipo no probabilístico ya
que los elementos elegidos son a conveniencia del investigador y no al azar.
Se realizó la siembra del microorganismo puro; Staphilococcus aureus ATCC 29213, con
la asesoría y ayuda de la profesional del laboratorio de microbiología. Se efectuaron 15
inoculaciones en un tiempo de exposición de 24 y 48 horas, con tres repeticiones en cada
caja Petri (aceite esencial de Lantana camara al 100%, gluconato de clorhexidina al
0,12% y suero fisiológico al 0.9% como control negativo.).
3.1.3. UNIDAD DE MUESTRA
Se trabajó con una cepa de Staphilococcus aureus ATCC 29213 donado e identificado por
el laboratorio clínico microbiológico del Hospital de Tercer nivel y de Especialidades
Eugenio Espejo.
3.2.Criterios de inclusión y exclusión
3.2.1. Criterios de inclusión
Microorganismos libres de contacto con soluciones antimicrobianas.
Cepa pura de Staphilococcus aureus.
Aceite esencial de Lantana camara “Supirosa”.
3.2.2. Criterios de exclusión
Cultivos manipulados por el investigador
Cajas Petri plásticas
19
3.2.3. Variables
3.2.4. Conceptualización de las variables
Variables independientes
Extracto esencial de Supirosa (Lantana camara) al 100% sustancia obtenida por medio
de destilación de partes de planta silvestre. (16)
Variable dependiente
Inhibición de Staphilococcus aureus que representa la sensibilidad del microorganismo
frente al antimicrobiano (2)
Variables de control
Gluconato de clorhexidina al 0.12% es un agente antiplaca con alto grado de confiabilidad
demostrada por la estructura química que posee, utilizado de una manera racional aporta
un medicamento a tener en cuenta en sus múltiples aplicaciones en afecciones
odontológicas. (28)
Suero fisiológico al 0.9%, es una disolución acuosa de sal de mesa en agua, hasta cierto
grado compatible con los organismos vivos. (26)
20
3.2.5. Ejecución de variables
VARIABLE DEFINICIÓN TIPO CLASIFICACIÓN
INDICADOR CATEGÓRICO
ESCALA DE
MEDICIÓN
Aceite esencial (Lantana
camara)
Elemento
obtenido por
destilación de
hojas y flores de
la planta. (1)
Independ
iente
Cuantitativa
Concentración del
aceite esencial de
lantana camara al
100%
24 horas
48 horas
Nominal
1
2
Gluconato de clorhexidina
Potente
antiséptico
usado para el
control de placa
bacteriana (29)
Independ
iente
Cuantitativa
Concentración al
0.12%
Nominal
1
Suero Fisiológico
Disolución
acuosa
compatible con
los organismos
vivos (26)
Independ
iente
Cuantitativa
Concentración
0.9%
Nominal
1
Inhibición de
Staphilococc
us aureus
ATCC 29213
Sensibilidad del
microorganismo
frente al
microbiano
Dependie
nte
Cuantitativa
Diámetro del halo
de inhibición en
(mm)
Nula (-) hasta
8mm Sensible (+)
9-14mm Muy
sensible (++) 15-
19mm Sumamente
sensible (+++)
mayor de 20mm
Ordinal
Tabla 1 Cuadro de la ejecución de variables
Fuente: V. Valencia 2017
21
3.3.Procedimientos y técnicas
3.3.1. Materiales y Métodos
3.3.2. Preparación del aceite esencial de Lantana camara (Supirosa)
Fue realizado en el laboratorio de la Facultad de Química de la Universidad Central del
Ecuador, los materiales usados para el proceso fueron:
Balón de dos bocas
Manta calefactora
Refrigerante longo
Cabeza de destilación
Termómetro
Nevera
Pinzas
Colector
Matraz Erlenmeyer
Embudo de presión compensada
Soportes
Reactivos Hojas y flores trituradas de Supirosa (Lantana camara)
Procedimiento Se utilizaron 5 kilos de hojas y flores adquiridas de los parques de Pichincha-
Quito (Ecuador), las mismas que fueron escogidas y clasificadas, luego se las
limpió para dejarlas secar por un periodo de 3 semanas, después se las trituró como
se muestra en las figuras 3,4 y 5.
Fig. 4 Supirosa Recolectada
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
Fig. 3 Supirosa después de
3 semanas
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
22
El siguiente paso fue la extracción del aceite esencial de la Supirosa mediante el método
de hidrodestilación por arrastre de vapor de agua como muestran las figuras 6, 7, 8 y 9.
Fig. 5 Trituración manual de las
hojas y flores (Supirosa)
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
Fig. 6 Proceso de las hojas
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
Fig. 7 Hidrodestilación por
arrastre de vapor de agua
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
23
Fig. 8 Obtención del aceite
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
Fig. 9 Aceite esencial de Supirosa al 100%
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
24
3.3.3. Materiales para realizar el cultivo
3.3.4. Materiales para realizar el estudio microbiológico
Fue realizado en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología
de la Universidad Central del Ecuador, los materiales y sustancias que se usaron
fueron:
Estufa
Incubadora
Muestra biológica de cepas del microorganismo Staphilococcus aureus ATCC
29213
Cajas Petri plásticas de 90x21mm (#15)
Medios de cultivo agar sangre (#15)
Pinzas
Mechero
Micropipetas desechables
Discos de papel filtro de 6 mm estériles
Hisopos estériles
Discos de papel absorbentes
Gradilla
Refrigeradora
Cabina de Seguridad Biológica
Aceite esencial de Lantana camara “Supirosa”
Suero fisiológico
Clorhexidina al 0.12%
Tubos de ensay0
Gradilla
Utilería
Gorro
Mascarilla
Mandil
Guantes
Libreta de apuntes
Ficha para lectura de los halos
Regla milimetrada
25
3.3.5. Procedimiento y técnica
Activación de la cepa Staphilococcus aureus ATCC 29213
La cepa de Staphilococcus aureus ATCC 29213, fue obtenida gracias a la donación
realizada por el Hospital de Tercer nivel y de Especialidades Eugenio Espejo y fue
conservada a temperatura de 2 a 80C para su posterior activación en el laboratorio de
Microbiología de la Facultad de Odontología de la Universidad Central. Se realizó el auto
clavado durante media hora a 1210 C de los discos de control blancos y los hisopos, así
como también se realizó la activación de la cepa de Staphilococcus aureus ATCC 29213
(Figuras 10,11, 12 y 13)
Fig. 12 Hisopos
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
Fig. 10 Staphylococcus aureus
ATCC 29213
Fuente: Investigación – V.
Valencia 2017
Fig. 11 Discos de filtro blancos
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
26
Una vez esterilizados los materiales para la activación de la cepa Staphilococcus aureus
ATCC29213, se procedió a realizar el cultivo en un tubo de ensayo que contenían caldo
de nutriente (Fig. 13) y la bacteria que se encontraba en pequeñas porciones (Fig. 14). La
activación se realizó mediante la técnica de contacto (Fig. 15).
Preparación e inoculación en los medios de cultivo
Se realizó un medio de cultivo en 15 cajas Petri con agar sangre para el microorganismo
Staphilococcus aureus. (Figura 14)
Fig. 14 Medios de cultivo en agar sangre
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
Fig. 13 Cultivo en tubo de ensayo
que contenía caldo de nutrientes
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
27
Fueron colocadas las 15 cajas en la cabina de seguridad biológica para proceder a la
siembra o inoculación, se hizo uso de hisopos estériles y se procedió a sembrar con el
método de siembra por estrías en placa y el método de extensión en placa, para ello con
el hisopo se toma una muestra y a continuación se hacen estrías en zigzag sobre toda la
superficie solida del agar de la caja Petri. (Figura 15)
Fig. 15 Cajas en la Cabina de seguridad biológica
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
Fig. 16 Inoculación del Staphilococcus aureus
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
28
Colocación de los discos en las placas inoculadas
Haciendo uso del método de antibiograma de difusión en agar Kirby- Bauer se colocaron
con una pinza estéril 3 discos de papel filtro en cada caja Petri continuando el siguiente
orden: (Figuras 17)
Disco de papel filtro impregnado con el aceite esencial de lantana camara al 100%
Disco de papel filtro impregnado con gluconato de clorhexidina al 0.12%
Disco de papel filtro impregnado con Suero fisiológico al 0.9%
Posteriormente se incubó 15 cajas Petri inoculadas con Staphilococcus aureus a una
temperatura de 35± 2 0 C por 24 horas y subsiguientemente por 48 horas. (Figura 18)
Fig. 18 Incubación
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
Fig. 17 Colocación de los Discos
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
29
Lectura e interpretación de los resultados
Pasado el período de incubación se procedió a realizar la lectura del diámetro de los halos
de inhibición alrededor de los discos como una interpretación de tipo cuantitativa,
mediante la técnica de observación directa y con la ayuda de una regla milimetrada
flexible, la distancia de éste círculo es igual a la actividad inhibitoria de las sustancias.
Tomando como reseña la escala de sensibilidad definida por Duraffourd. (Figuras 19,20)
Sensibilidad definida por Duraffourd.
Si fue inferior o igual a 8 mm Nula (-)
Si fuera Igual o mayor de 9-14mm Sensible (=+)
Si fuera de 15-19mm Muy sensible (++)
Si fuera igual o superior a 20mm Sumamente sensible (+++)
Tabla 2 Sensibilidad definida por Duraffourd
Fuente: V. Valencia 2017
Fig. 19 Medición del Halo de
inhibición
Fuente: Investigación – V. Valencia
2017
Fig. 20 Halo de inhibición del
Staphilococcus aureus
Fuente: Investigación – V. Valencia
2017
30
Eliminación de los deshechos
Al terminar con la lectura de lo halos de inhibición y obteniendo los resultados se procedió
a la eliminación interna de los deshechos, se colocó las 15 cajas Petri en la autoclave para
esterilizarlas, luego se colocó en una funda de color roja para deshechos infecciosos
indicando que es contaminante, por último, se colocó en un recipiente de almacenamiento
temporal, para finalmente trasladarlo a su disposición final. (Figura 21,22)
Fig. 21 Cajas Petri en autoclave
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
Fig. 22 Almacenamiento Temporal
Fuente: Investigación – V. Valencia 2017
31
3.4. Aspectos éticos
Por ser una investigación in vitro, se solicitó la aprobación de las autoridades
correspondientes tanto de la Facultad de Ingeniería Química como de la Facultad de
Odontología de la Universidad Central del Ecuador para la elaboración del trabajo
practico del laboratorio en cuanto a la extracción del aceite como de los cultivos
microbianos.
32
CAPITULO IV
ANALISIS E INTERPRETACION
4. RESULTADOS
4.1.1. Análisis de resultados
Con los datos obtenidos de los resultados de la medición de los halos de inhibición se
procedió a registrar los datos en una tabla de Excel para luego analizarlos mediante un
método estadístico con el fin de determinar si existen diferencias significativas entre las
diferentes sustancias y el microrganismo estudiado. Las pruebas que se usaron fueron No
paramétricas Mann Whitney, Kruskal Wallis, Wilcoxon las mismas que para cada prueba
de Hipótesis, se compara el valor de significación (Sig) con el valor 0,05 (95% de
confiabilidad)
Si el nivel de significación es superior a 0,05 se acepta Ho (hipótesis inicial)
Si el nivel de significación es inferior a 0,05 se acepta Ha (hipótesis alterna).
RESULTADOS DE INHIBICIÓN SOBRE STAPHYLOCOCCUS AUREUS
#1 #2 #3 #4 ACEITE ESENCIAL DE LANTANA CAMARA
REPETICIONES 100% (24H)
100% (48H)
SUERO FISIOLÓGICO
CLORHEXIDINA 0.12%
1 11 16 2 17
2 10 15 1 17
3 12 16 2 18
4 12 17 0 19
5 12 17 2 18
6 12 17 0 18
7 12 17 3 18
8 12 17 0 17
9 13 17 0 19
10 14 17 0 19
11 14 18 3 17
12 13 17 2 18
13 14 18 3 19
14 12 17 2 19
15 14 17 2 19
Tabla 3 Tabla de resultados
Fuente: V. Valencia 2017
33
Prueba de Normalidad
Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribución Normal
Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal
En la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk, los valores del nivel de significación (Sig)
son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por lo tanto, se acepta Ha, esto es las
muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal, entonces para la
comparación de grupos se utiliza pruebas no paramétricas: Wilcoxon, Kruskal Wallis.
Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Estadístico Gl Sig. Estadístico gl Sig.
LANTANA CÁMARA 100% (24H) 0,253 15 0,011 0,873 15 0,037
LANTANA CÁMARA 100% (48H) 0,371 15 0,000 0,780 15 0,002
SUERO FISIOLÓGICO 0,273 15 0,004 0,819 15 0,006
CLORHEXIDINA 0.12% 0,251 15 0,012 0,799 15 0,004
Tabla 4 Pruebas de normalidad
Fuente: V. Valencia 2017
Pruebas no paramétricas de Wilcoxon: Comparación entre 24 horas y 48 horas
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias, medianas similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Estadísticas de muestras emparejadas
Media N
Desviación
estándar
Media de error
estándar
Par 1 LANTANA CÁMARA 100%
(24H) 12,47 15 1,187 0,307
LANTANA CÁMARA 100%
(48H) 16,87 15 0,743 0,192
Tabla 5 Comparación entre 24H y 48H
Fuente: Ing. Jaime Molina
34
Gráfico 1 Pueba de Wilcoxon
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Wilcoxon, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba
bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,
existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones, mayores valores se
tienen a las 48 horas.
35
Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis: Comparación a las 24 Horas
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias, medianas similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Descriptivos
24 HORAS
N
Medi
a
Desviació
n estándar
Error
estándar Mínimo Máximo
LANTANA CÁMARA
100% 15 12,47 1,187 0,307 10 14
SUERO
FISIOLÓGICO 15 1,47 1,187 0,307 0 3
CLORHEXIDINA
0.12% 15 18,13 0,834 0,215 17 19
Total 45 10,69 7,077 1,055 0 19
Tabla 6 Comparación a las 24H Fuente: Ing. Jaime Molina
36
Comparación de medidas
Gráfico 2 Comparación de medidas
Fuente: Ing. Jaime Molina
En la gráfica se observa que la media con los mayores valores es la de CLORHEXIDINA
0.12% con un valor de 18,13 mm, le sigue en valor la media de la LANTANA CAMARA
100% con un valor de 12,47 y al final el SUERO FISIOLÓGICO con una media de 1,47.
Para determinar si la diferencia es significativa se realiza la prueba no paramétrica
Kruskal Wallis
12,47
1,47
18,13
LANTANA CÁMARA 100% SUERO FISIOLÓGICO CLORHEXIDINA 0.12%
Comparacion de Medias24 Horas
37
Prueba de Kruskal Wallis:
Gráfico 3 Muestras Independientes a las 24H
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba
bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,
existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias
de las muestras son similares.
38
Prueba de dos a dos Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:
Gráfico 4 Prueba de dos a dos
Fuente: Ing. Jaime Molina
Son similares (Sig. mayores a 0,05) Ninguna
No son similares (Sig. menores a 0,05) CLORHEXIDINA 0.12% no es similar a LANTANA CÁMARA 100%
SUERO FISIOLÓGICO no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%
LANTANA CÁMARA 100% no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%
39
Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis: Comparación a las 48 Horas
Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de
probabilidad (Medias, medianas similares)
Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones.
Descriptivos
48 HORAS
N Media
Desviación
estándar
Error
estándar Mínimo
Máxim
o
LANTANA CÁMARA
100% 15 16,87 0,743 0,192 15 18
SUERO FISIOLÓGICO 15 1,47 1,187 0,307 0 3
CLORHEXIDINA
0.12% 15 18,13 0,834 0,215 17 19
Total 45 12,16 7,716 1,150 0 19
Tabla 7 Comparación a las 48 H
Fuente: Ing. Jaime Molina
Gráfico 5 ComparacIón de medidas a las 48 H
Autor: Ing. Jaime Molina
En la gráfica se observa que la media con los mayores valores es la de CLORHEXIDINA
0.12% con un valor de 18,13 mm, le sigue en valor la media de la LANTANA CAMARA
100% con un valor de 16,87 y al final el SUERO FISIOLÓGICO con una media de 1,47.
Para determinar si la diferencia es significativa se realiza la prueba no paramétrica
Kruskal Wallis:
Prueba de Kruskal Wallis:
16,87
1,47
18,13
LANTANA CAMARA 100% SUERO FISIOLÓGICO CLORHEXIDINA 0.12%
Comparacion de Medias48 Horas
40
Gráfico 6 Muestras independientes a las 48 H
Fuente: Ing. Jaime Molina
De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba
bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,
existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias
de las muestras son similares.
41
Prueba dos a dos Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:
Gráfico 7 Prueba dos a dos a las 48 H
Fuente: Ing. Jaime Molina
Son similares (Sig. mayores a 0,05) Ningunas
No son similares (Sig. menores a 0,05)
CLORHEXIDINA 0.12% no es similar a LANTANA CÁMARA 100%
SUERO FISIOLÓGICO no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%
LANTANA CÁMARA 100% no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%
42
CAPITULO V
Discusión
En la presente investigación, se decidió recolectar la especie Lantana camara (Supirosa),
basándonos en estudios de Carvajal (2) quien demostró que la L. camara. Y sus
componentes presentaron actividad antibacteriana en un rango de concentraciones
inocuas para células de mamíferos, también por encontrarse en grandes cantidades en
diferentes partes del país, lo que hace factible su uso en estudios in vivo como potenciales
agentes antibacterianos, después de determinar cuál o cuáles son los principios activos
responsables de esta actividad.
Los diversos estudios determinan la importancia del uso de las plantas medicinales para
los tratamientos de distintas patologías, a su vez, mencionan que de los componentes con
mayor características de efecto antimicrobiano, antinflamatorio y antifúngico son los
aceites esenciales que afirman que se pueden usar como una alternativa medicinal,
igualmente la presente investigación fue orientada a la medicina alternativa en
odontología. (35)
La actividad biosida del aceite esencial de Lantana camara ha sido probada en varios
microrganismos, Estreptococcus mutans, Echerichia coli, Enterococcus feacalis y
hongos como Cándida albicans. Sin embargo en esta investigación se comprobó el efecto
antibacteriano sobre S. aureus similar al estudio realizado en el artículo científico
elaborado por Anastasia Cruz Carrillo, (1) en donde reportó que el extracto de L. camara,
evaluado por la técnica de difusión en disco, posee actividad alta contra S. aureus con
halos de inhibición de 14,6 y 14,8mm de diámetro. En esta investigación, se pudo
encontrar efectividad intermedia ante S. aureus con zonas de inhibición de 12mm de
diámetro en promedio.
F. Reyes (33) en su artículo afirmar que los vapores generados por algunos aceites
esenciales de plantas como es el caso de la L. camara y de especias cumplen con la
actividad necesaria para ser considerados como antimicrobianos naturales, y al evaluar
su actividad frente a microorganismos de importancia odontológica como el del S.
aureus, un principal agente oportunista, se ha buscado nuevos tratamientos alternativos
ante esta especie microbiana, es por esto que dimos a conocer una sustancia natural que
puede enfrentarse a este patógeno.
Estudios realizados muestran que el método de hidrodestilado para la elaboración de
aceites esenciales, facilita la accesibilidad a un buen control del volumen de extracción,
en cuanto a la recuperación de sustancias a partir de plantas, lo que concuerda con esta
investigación, (37) ya que se extrajo un aceite esencial de alto rendimiento, muy útil y
demostrando en su porcentaje del 100% su efectividad sobre Staphilococcus aureus y
pruebas biológicas.
Por la alta demanda de medicamentos naturales ante los sintéticos, se comparó el efecto
de un producto natural frente a un producto químico a la vez, concordando con la
propuesta del estudio, (1) puesto que este estudio se comparó con el gluconato de
clorhexidina al 0.12%, siendo uno de los antimicrobianos muy utilizados en el área de
43
odontología. Este último fue necesario para determinar un control positivo y una
comparación a su efecto en relación a las sustancias naturales, enfrentándola a la cepa de
Staphilococcus aureus ATCC 29213, por el método de difusión en disco, en donde se
realizó 15 repeticiones, considerando que el efecto antimicrobiano debe evaluarse en un
tiempo determinado, coincidiendo con el estudio de Anastasia (1) en donde se utilizó S.
aureus frente a Lantana camara, cuyo efecto fue de alto grado a las 24 horas, lo que se
comprobó en nuestra investigación a las 24 y 48 horas.
De los resultados obtenidos se apreció la evaluación antimicrobiana de la sustancia
natural de Lantana camara ante Staphilococcus aureus, en donde las medidas inhibitorias
de concentración más altas entre las 24 y 48 horas fueron del gluconato de clorhexidina
al 0.12%, de 18.13mm de diámetro, además se realizó un análisis individual de las
repeticiones en donde se verifica una tendencia a la baja en relación al tiempo, seguida
del aceite esencial de Lantana camara al 100% con una medida de inhibición de 12.47mm
y 16.87mm de diámetro respectivamente, con un análisis de cada una de las repeticiones
en donde se demostró tener más tendencia a incrementar su efecto a las 48 horas.
44
CAPITULO VI
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
CONCLUSIONES
Se determinó que gracias a la técnica de hidrodestilación por vapor de arrastre es factible
la extracción del aceite esencial de las hojas y flores de la planta Lantana camara, así
como fue posible comprobar que el aceite esencial es más efectivo frente al extracto de
la misma planta.
Se comprobó el efecto inhibitorio del aceite esencial de Lantana camara en una
concentración del 100%, frente al Staphilococcus aureus, dándonos como resultado una
media de 12.47mm y 16.87mm de diámetro y el gluconato de clorhexidina al 0.12% con
una media de 18.13mm de diámetro, a las 24y 48 horas de exposición respectivamente.
También se estableció que al evaluar los halos de inhibición del microorganismo
Staphilococcus aureus ante el aceite esencial de Lantana camara a las 24 horas tubo
resultados favorables, pero a las 48 horas su actividad antibacterial aumento, siendo
similar al de la gluconato de clorhexidina al 0.12%.
Concluyendo de esta forma que el aceite esencial de la planta Supirosa tiene un buen
efecto inhibitorio frente al microorganismo Staphilococcus aureus. Sin embargo, aún no
se cuenta con información suficiente para poder darles aplicaciones reales, por lo que se
abre una puerta de oportunidad para seguir investigando y aplicarlas en el área
odontológica.
Relacionamos la efectividad antibacteriana del aceite esencial de la planta Lantana
camara al 100% frente al gluconato de clorhexidina al 0.12% como control positivo en
cultivos bacterianos de Stafilococus aureus a las 24 y 48 horas de exposición, en donde
el gluconato de clorhexidina al 0.12% a pesar de obtener porcentajes de acción más
elevado, no aumento su efecto a través del tiempo, mientras que el aceite esencial de
Lantana camara potencio su efecto a las 48 horas.
45
RECOMENDACIONES
Se recomienda el uso de este estudio como base para futuras investigaciones en cuanto a
los componentes, concentración, pruebas biológicas, que permitan establecer el uso de
los efectos antimicrobianos que posee la Lantana camara.
Es necesario la valoración de la especie vegetal Lantana camara, por ser parte de la
medicina tradicional, por lo tanto, se recomienda el uso de la misma en el área
Odontológica desde un punto de vista médico alternativa, dirigida principalmente a áreas
rurales en donde el consumo de medicamentos químicos es escaso ya sea por condiciones
económicas o geográficas.
Debido a la tendencia actual del uso de productos naturales se recomienda enfocar los
estudios a la implementación de los principios activos de las plantas naturales en
productos del cuidado oral, con el fin de disminuir el uso de químicos que ocasionalmente
causan resistencia bacteriana o alergias en personas que los consumen.
Para la extracción del aceite, se recomienda el uso de hojas grandes y secas para su
posterior preparación, ya que nos proporciona un mayor rendimiento, muy necesario para
el estudio biológico.
Es recomendable el uso del aceite esencial de Lantana camara como agente
antimicrobiano frente a otras bacterias causantes de patologías orales.
Gracias a los beneficios sobre el uso de productos naturales se recomienda informar a los
pacientes la utilización de las mismas como coadyuvante en los tratamientos
Odontológicos, y de esta manera ayudaremos a la disminución de la utilización de
químicos que son altamente tóxicos.
Se sugiere además que la planta Lantana camara puede ser utilizada como una sustancia
alternativa y eficaz en el tratamiento de infecciones estafilocócicas a nivel Odontológico
además que no posea efectos colaterales.
Se recomienda el uso de la Lantana camara como principio activo en colutorios o
empastes para uso de infecciones bacterianas.
46
Referencias bibliográficas 1. ANASTASIA CRUZ- CARRILLO NRCER. Evaluación in vitro del efecto antibacteriano de los
extractos de, Bidens pilosa, Lantana camara, Schinis molle y Silybum marianum. Rev. U.D.CA Act. E Div. Cient 13 (2): 117-124, 2010. 2010;(13).
2. Zaida Carvajal Tesoro LRZMDVGGCJMMRO. Actividad Biologica de extractos de tres plantas sobre bacterias patógenas para el humano. Revsita de la Sociedad Venezolana de Microbiología. 2013 Agosto; 33(35-39).
3. Chans GR. ESTAFILOCOCOS. 2002.
4. Torres Camacho Vanesa CCAE. Fitoterapia. Revista de Actualización Clínica. 2014; 42.
5. Francisco KMS. Odontología Preventiva de aracatuba. SAUDE. .
6. Cavalcante R. Fitodontología. In Cavalcante R.. Rio Branco; 2013.
7. http://pinzonesygorriones.blogspot.com/2014/05/flora-de-quito-i-li-flora-de-la.html.. wikipwdia. [Online].; 2014 [cited 2017 01. Available from: http://pinzonesygorriones.blogspot.com.
8. Inbaraj SD GMGJIMMMNS. Antibacterial effect of Lantana Camara Linn, on Gram Negative Bacteria and NDM-1 strain: an invitro Study. NNOVARE Academic Sciences. 2014 Febrero; 7.
9. José Fernando Caroprese Araque MIPGDAP. Anatomía microscópica y metabolitos secundarios volátiles en tres estadios. Rev. Biol. Trop. (Int. J. Trop. Biol. ISSN-0034-7744). 2011 Marzo; 59.
10. Sonia E. Castellanos MLFSSR. Morfoanatomía de las hojas de Lantana camara L. (Verbenaceae). Dominguezia. 2013; 29(2).
11. Garcia mDMM. Staphylococcus aureus resistente a meticilina. Dermatol Perú. 2012; XXII(1).
12. Romeu C, Pino J, Martín MP. Algunas consideraciones acerca de la composición química del aceite escencial de Lantana Camara L. Presente en Cuba. Fitosanidad. 2004, pp. 59-63 Septiembre ; 3(8).
13. Vásquez-Valles2 AVdCyMN. Efecto del aceite esencial de Lantana camara sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Revista Científica de la Facultad de Ciencias Biológicas. REBIOL. 2016 Enero-Junio; 36(1).
14. Negroni M. Microbiología Estomatológica, Fundamentos y guia práctica. 2nd ed. Argentina- Buenos Aires: Médica Panamericana; 2009.
15. V.Seija. www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema03.pdf. [Online].; 2016. Available from: http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema03.pdf.
16. Guadalupe Socorro Zendejas-Manzo HAFMYSP. Microbiología general de Staphylococcus aureus: Generalidades patogenicidad y métodos de identificación. Rev Biomed 2014. 2014 septiembre-diciembre; 25( 3).
17. http://www.herbogeminis.com/IMG/pdf/staphylococcus.pdf. Wikipedia. [Online]. Available from: http://www.herbogeminis.com.
18. Estrella Cervantes-García RGGPMSS. Características generales del Staphylococcus aureus. Rev Latinoam Patol Clin Med Lab 2014; 61 (1): 28-40. 2014 Febrero; 61(1).
19. Jackson MS BJGMSR. Transporte oral de estafilococos en pacientes con artritis reumatoide. Rheumatol. 1999; 38(572-2).
47
20. Smith AJ JMBJ. La ecología de las células de estafilococo en la cavidad bucal. 2001; 50(940-6).
21. Capdevila JA MRRERM. Bacteremia por Captocytophaga spp. en pacientes neutropénicos. Resultado de un estudio multicéntrico. Enferm Infecc Microbiol Clin. 20(Suppl 1): 1-208, 2002. Ortega M et al. 2002.; 20(Suppl 1)(1-208).
22. Esp.Guadalupe Rita Vitres Pedraza EMdlACG. COMPORTAMIENTO DE ALGUNAS ENFERMEDADES PULPARES COMO URGENCIA EN PACIENTES DE 15 AÑOS. Multimed. 2013; 17(4).
23. Raposo Correa PjBA. QUEILITIS ANGULAR. 2016 Febrero;(13).
24. COLS PSY. Patología Oral y Maxilofacial Contemporanea Madrid-España: Diorki; 2008.
25. WOOD N. Diagnóstico Diferencial de las Lesiones Orales y Maxilofaciales Madrid-Espña: Harcourt Brace; 1999.
26. J. Salinas RMJCL. Absceso del periodonto, conducta odontológica. Acta Odontológica Venezolana. 2008 Diciembre ; 46(3).
27. Horswill MEOYAR. MICROBIO DE LA CÉLULA HUÉSPED. Author Manuscript. 2013 Junio; XIII(6).
28. Verónica Alvarado Villanueva HMN. Plantas meedicinales: Efecto antibacteriano in vitro de Plantago Major L, Erythroxylum novogranatense, Plowman vartruxillense y Camellia sinensis sobre bacterias de importancia estomatológica. Odontol. Sanmarquina 2010; 13 (2) 21-25. 2010;(13).
29. Orozco MA. Evaluación de la actividad cicatrizante de un gel elaborado a base de los extractos de molle ( shinus molle). (2013).
30. Orlando M. Plantas medicinales de uso en Chile, Química y Farmacología. 2nd ed. Universitaria. , editor. Chile; (2004).
31. wikipedia. wikipedia. [Online].; 2016. Available from: https://es.wikipedia.org/wiki/Staphylococcus_aureus.
32. Burt S. Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in food a review. International Journal of Food Microbiology 94 (3): 223- 2253. 2004.
33. López DMdlCT. La clorhexidina, bases estructurales y aplicaciones en; la estomatología. Gaceta Médica Espirituana. 2009; 11(1).
34. Villalobos PDSM. INFLUENCIA DEL SUERO FISIOLÓGICO EN LA FORMACIÓN DE PARACLORONILINA, ESTUDIO IN VITRO. 2013..
35. Teodoro AF. 1100 Plantas Medicinales. Fitomedicina. 2003; Tomo II(2).
36. López-Malo FRJEPyA. Vapores de aceites esenciales: alternativa de antimicrobianos naturales. Departamento de Ingeniería Química, Alimentos y Ambiental, Fundación Universidad de las Américas Puebla. 2012; 29(39).
37. Guarnizo A. Experimentos de Quimica Orgánica. Enfoque en ciencias de la vida. Colombia: Elizcom.. (2009).
38. http://www.actaodontologica.com/ediciones/2011/3/art22.asp. Características generales del spp. aureus. [Online].; 2011 [cited 2017 Enero 1. Available from: http://www.actaodontologica.com.
39. Ana Karina Pardo JJAMGFMLJEG. Determinacion de la actividad antifúngica de el extracto de Lantana Camara frente a Candida spp. GEPAMOL. 2011; 15(4); 235- 242.
40. flora-de-quito-i-li-flora-de-la.html. [Online]. [cited 2014 05. Available from: http://pinzonesygorriones.blogspot.com.
41. BRM S. Prevalencia y susceptibilidad antimicrobiana de Staphylococcus ssp. en cuadros de salud y enfermedad periodontal. 2007..
48
42. Ureña JL. Microbiología Oral. 2nd ed. España: McGraw-Hill Interamericana de España S.L.; 2002.
49
ANEXOS
RENUNCIA AL TRABAJO ESTADÍSTICO
Anexo 1 Renuncia Al Trabajo Estadístico
50
PETICION DEL MICROORGANISMO AL HOSPITAL EUGENIO ESPEJO
Anexo 2 Solicitud Al Hospital De Tercer Nivel Y De Especialidades Eugenio Espejo
Para Petición Del Microrganismo Staphilococcus Aureus, Cepa ATCC 29213
51
SOLICITUD PARA EL USO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOÍA
Anexo 3 Solicitud Para El Uso De Microbiología De La Facultad De Odontología De
La Universidad Central Del Ecuador.
52
CERTIFICADO DEL USO DEL LABORATORIO DE QUÌMICA DE LA
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
Anexo 4 Certificado Del Uso Del Laboratorio De Química De La Universidad Central
Del Ecuador
53
SOLICITUD PARA EL MANEJO DE DESHECOS
Anexo 5 Solicitud Para El Manejo De Deshechos
54
CERTIFICADO DEL SUBCOMITÈ DE ÈTICA
Anexo 6 Certificado Del Subcomité De Ética De La Universidad Central Del Ecuador
55
CERTIFICADO DEL SISTEMA URKUND
Anexo 7 Certificado Del Sistema Antiplagio URKUND
56
CERTIFICADO DEL ABSTRACT
Anexo 8 Certificado Del Abstract
57
Anexo 9 REPOSITORIO
58