ÁREA DE SALUD HUMANA
TERAPIA GÉNETICA
DOCENTE: DR. HECTOR
VELEPUCHA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
Carrera de Medicina
MODULO IV
TERAPIA GENICA
Tratamiento de enfermedades mediante la transferencia de material genético a células
EX VIVO IN SITU
MECANISMOS DE TRANSFERENCIA VIRALES
VECTOR VIRAL
RETROVIRUS
ADENOVIRUS VIRUS ADENOSOCIADOS
HERPES VIRUSSIMPLE
VECTORES RETROVIRALES1. Remplazar genes virales gag, pol, env genes
terapéuticos. Solo LTR se conserva2. Purificados3. transferidos al paciente
VECTORES RETROVIRALESV
EN
TAJA
S • Producción alta• No afecta a
célula• Alta eficacia
DES
VEN
TAJ
AS • Material
genético limitado
• Trabaja células en mitosis
• Mutagénesis insercional
VECTORES ADENOVIRALES
• ADN doble cadena y lineal
• 36 Kb• capside icosaedrica• Vértices barras
interacción con receptores celulares
• Replicación viral
• cambiado por genes terapéuticos
Evadir sistema inmune del huésped
VECTORES ADENOVIRALESV
EN
TAJA
S • No necesita células en mitosis
• No existe mutagénesis insercional
DE
SV
EN
TAJA
S • Material genético limitado
• Corta duración• Respuesta
inmune
VIRUS ADENOASOCIADOS
• Pertenecen a la familia Parvoviridae
• ADN cadena simple• No son patógenos• Virus dependientes
(adenovirus o herpes virus)
No son patógenosInfectan células en /o no95% genoma removido
Pequeño tamañoCorta expresión
VEN
TA
JAS
DES
VEN
TA
JAS
VIRUS HERPES SIMPLE
Genoma de 153 KB
Posee ADN de doble cadena
Es neutrópico.
No afecta fisiología neuronal
Grande capacidad para material génico
1. Fosfato de calcio
2. Microinyecciones
3. Electroporación
4. Liposomas
5. ADN plasmidico desnudo
6. Inyección balística de ADN
7. Transferncia por ondas de choque
METODOS DE TRASFERNCIA NO VIRALES
Fosfato de calcio.• Precipitaciones de ADN
plasmidico que interacciona con iones de calcio, luego ClNa se añade buffer de fosfato.
Microinyeccion.• Material genético es
introducido con pipeta hacia el núcleo celular
Electroporación• Se aplica voltaje se forman
poros y penetra suspención de ADN y células
LIPOSOMAS
ADN PLASMIDICO DESNUDO• Se inyecta ADN plasmídico directamente al tejido• Mejor respuesta en músculo estriado.• Factores modificadores edad y especie.
Liposomas Cationicos
Cargados +
Co-lípidos los
estabilizan
Se unen ADN
Liposomas ph-
sensitivos
Cargado -
pH los destabilizaADN es captado por
centro acuoso
INYECCIÓN BALISTICA DE ADN• ADN plasmídico fijado a micropartículas,
se liberan a presión bombardeando a la célula
TRANSFERENCIA POR ONDAS DE CHOQUE• Ondas de choque (litotriptor) aumenta
permeabilidad de célula eucariota
NUEVAS TÉCNICAS
Cromosomas humanos artificiales
Utilizados como
vectores para
secuencias de ADN
Vectores mitocondria
les
Utilizar como
vectores para tratar
enf. Hereditaria
s y fenotipicas
Estrategias para terapia génica
CORRECCIÓN DE MUTACIONES• Enfermedades con perdida de función de gen introduce clon de gen
normal• Enfermedades autosómicas recesivas (Distrofia muscular, Fibrosis quística,
Hiprcolestorolemia)
DESTRUCCIÓN DE CELULAS ESPECÍFICAS• Tratamiento de cáncer destrucción de células cancerosas
DirectaGen toxina o
enzima
IndirectaEstimula Sist.
inmunitario
CORRECIONES DE
MUTACIONES
Recombinación génica
Ribozimas Destrucción mARN
Terapia antisentido
Bloqueo de la transcripción