Post on 11-Apr-2017
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Profa. Yotsabeth Saúl G.
Caracas - 2016
UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELAFACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE BIOANÁLISISCÁTEDRA DE MICOLOGÍA
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Barreras Biológicas Barreras Físico-Químicas
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDERO
Inmunidad Natural
- Microbiota autóctona- Células del sistema Fagocítico mononuclear- Inflamación y Fagocitosis
INMUNIDAD HUMORAL
LINFOCITOS B
Anticuerpos(Inmunoglobulin
as)
INMUNIDAD CELULAR
LINFOCITOS T (CD4+)
Citoquinas:(IL-1…..10),
TNF, IFN
Células presentadoras de Ag: macrófagos, Cel
dendríticas, LB
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
MECANISMOS DE DEFENSA DEL HOSPEDERO
Inmunidad Adquirida
RESPUESTA INMUNITARIA EN LA INFECCIÓN FÚNGICA
RESISTENCIA SUSCEPTIBILIDAD
Th1 (inicio de la infección
fúngica)
Th2(fase progresiva de la
enfermedad)
N2 inhiben el crecimiento fúngico
Macrófagos, PMN, neutrof.
IFNɣ, IL2
favorece el crecimiento fúngico
IL 4,5,6..10
Th1
inhibe
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
1. Orientación Clínico - Epidemiológica.
2. Recolección de la muestra: exudados de lesiones cutáneas, escamas, esputo, lavado bronquial, LCR, biopsias mucocutáneas, de nódulos linfáticos, médula ósea, entre otros.
3. Examen microscópico directo de la muestra:• Al fresco: aclaramiento con KOH al 10%.• Coloraciones: Giemsa, PAS o Grocott, entre otros.
4. Aislamiento y cultivo del agente etiológico: • Medios: Sabouraud, Lactrimel, BHI, Mycosel, entre otros.• Incubación: 35-37º C y 25ºC / 4-6 semanas.
5. SOPORTE INMUNODIAGNÓSTICO:• Evaluación respuesta inmunitaria celular y humoral.
EVALUACIÓN INMUNIDAD CELULAR:
• Pruebas de Hipersensibilidad Tardía: Intradermorreacción
(IDR).• Histoplasmina• Paracoccidioidina• Coccidioidina• Candidina• Esporotriquina
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
0,1 ml solución antigénica
EVALUACIÓN INMUNIDAD CELULAR:
• Pruebas de Hipersensibilidad Tardía: Intradermorreacción
(IDR).
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Lectura 48 horas
Positividad: pápula palpable, diámetro > 5 mm
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
EVALUACIÓN INMUNIDAD CELULAR:
• Utilidad práctica de la IDR:
• Estudios epidemiológicos.
• Orientación diagnóstica.
• Seguimiento de la evolución de la micosis.
• Determinación de estados de anergia enfermedad
diseminada.
• Evaluación de terapia.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
• Técnicas de inmunoprecipitación:
• Inmunodifusión doble en gel de agarosa
(IDD)
• Inmunoelectroforésis (IEF)
• Inmunoelectrosinéresis
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
• Fijación de complemento.
• Inmunoanálisis enzimático (ELISA).
• Immunoblot.
• Aglutinación látex: Criptoccosis.
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
• Inmunodifusión Doble:
• H. capsulatum, P. brasiliensis, Coccidioides spp.y
Aspergillus spp.• Muestras: suero y LCR.• Prueba cualitativa y semicuantitativa
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Oudin J. Ann Inst Pasteur 1948; 75: 30-52.Ouchterlony O. Handbook of immunodiffusion and immunoelectrophoresis. Ann Arbor Publishers, Inc. Ann Arbor, 1968
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
• Inmunodifusión Doble:
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Oudin J. Ann Inst Pasteur 1948; 75: 30-52.Ouchterlony O. Handbook of immunodiffusion and immunoelectrophoresis. Ann Arbor Publishers, Inc. Ann Arbor, 1968
210.36.18.48/gxujingpin/dwwswx/im/7.htm
web.indstate.edu/thcme/PSP/labtests/precip.htm
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
INMUNODIFUSIÓN DOBLE:
Incubar en cámara húmeda durante 48 horas
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Antígeno 10lSueros controles 20lSuero sin diluir 20lDiluciones….1/2
…..
C: Suero controlS: Suero Problema sin diluir : Antígeno½…….: Suero diluído
1/16 1/16
1/8 1/21/21/41/4
1/8
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
• INMUNODIFUSIÓN DOBLE: Resultados de la
prueba
Suero Problem
a
Suero Control
Línea de IdentidadPositiva Identidad
Parcial
No IdentidadNegativa
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Vargas de Camino, et al. Derm Venez 1995; 33: 65-82.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.
EVALUACIÓN INMUNIDAD HUMORAL:
INMUNODIFUSIÓN DOBLE: Resultados
de la prueba
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
SITUACIONES A CONSIDERAR PARA INTERPRETAR CORRECTAMENTE PRUEBAS SEROLÓGICAS TOMANDO EN
CUENTA LA IDR:
• Casos con fuerte IDR sin detección de anticuerpos.
• Casos con escasa o nula respuesta celular y título alto de
anticuerpos.
• Paciente con infección diseminada, mal estado general e IDR
negativas:• Sin otra condición que afecte el sistema inmunitario
pueden detectarse títulos altos de anticuerpos.
• Enfermedad inmunosupresora de base: serología negativa.
• Falsos negativos serológicos: fenómeno de prozona.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Positiva 2-3 semanas después de la infección.• Positiva en el 50-60% población venezolana.
• Poco valor como prueba diagnóstica: • Infección subclínica, enfermedad activa o residual.
• En niños con lesiones pulmonares, IDR positiva: debe descartarse
histoplasmosis activa.• Negativa:
• Ausencia de infección. • Enfermedad diseminada.
HISTOPLASMIN
A:
HISTOPLAMOSIS
Principe A. et al. Micopat et Mycol Appl 1961; 15: 11-54; Laboratorio de Micología, CIB-UNEFM, Coro, Falcón-Venezuela (datos no publicados);De Souza A. Bol Inf Las Micosis en Venezuela. 1987; Año III 7: 11-12.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Positiva 3-4 semanas después de infección.
• Títulos 1:8 y 1:16 pueden tener valor presuntivo.
• Títulos mayores o iguales a 1:32 indican
histoplasmosis activa.
• Negativiza con resolución del proceso infeccioso.
SEROLOGÍA: correlacionar con datos clínicos y radiológicos
del paciente
HISTOPLAMOSIS
Torres-Rodríguez JM, et al Micología Médica. 1º Edición. Masson S.A. Barcelona, España,1993; Guimaraes AJ, et al. Braz J Microbiol 2006; 37: 1-3;Vera R. et al. Rev Soc Ven Microbiol 2007; 27 (2): 112-119.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Banda M:
• Más frecuente que banda H.
• Histoplasmosis aguda, crónica, casos activos o
curados.
• Relacionada con histoplasmina.
• Perdura largo tiempo.
SEROLOGÍAHISTOPLAMOSIS
Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.
BANDA H
BANDA M
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Banda H:
• No es influenciada por la histoplasmina.
• Histoplasmosis diseminada.
• Tiende a desaparecer con el tratamiento.
SEROLOGÍA
HISTOPLAMOSIS
BANDA H
BANDA MAlbornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas,
Venezuela, 1996.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Fase aguda: IDR y serología positiva.
• Lesiones pulmonares parahiliares: IDR positiva y serología
positiva (banda M).
• Lesiones pulmonares crónicas: IDR variable, título alto de
anticuerpos.
• Enfermedad diseminada: IDR negativa, serología positiva
(bandas M y H).
HISTOPLAMOSIS
Negroni R. Clin Trop Med and Comm Dis 1989: 4-10Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Meningitis: anticuerpos en LCR.
• Lesión residual: lesiones pulmonares, IDR positiva, serología
negativa.• Histoplasmoma: Nódulos pulmonares, IDR positiva, poco
frecuente detectar anticuerpos.
HISTOPLAMOSIS
Negroni R. Clin Trop Med and Comm Dis 1989: 4-10.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
PARACOCCIDIOIDIN
A:
PARACOCCIDIOIDOMICO
SIS
• Positiva en el 50-60% individuos población venezolana .• Sierra de San Luis, estado Falcón: 77% .
• Poco valor como prueba de orientación diagnóstica.
• Utilidad práctica:
• Evaluar integridad de la hipersensibilidad retardada.
• Evaluación de la respuesta a la terapia.
García A. Bol Inf Las Micosis en Venezuela. 1988-89; Años IV y V, 7: 12-13; Laboratorio de Micología, CIB-UNEFM, Coro, Falcón-Venezuela (datos no publicados); Mendes-Giannini MJ, et al. Am J Trop Med Hyg. 1990, 43: 200-06; Pucia R J, et al. Med Vet Mycol. 1991; 29: 57-60.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• 90% sensibilidad, 98% especificidad.
• Positividad indica infección activa.
• 1-3 bandas de precipitación.
• Poco frecuente resultados falsos negativos.
• Negativiza con la resolución del proceso
infeccioso.
SEROLOGÍA:
PARACOCCIDIOIDOMICO
SIS
Mendes-Giannini MJ, et al. Am J Trop Med Hyg. 1990; 43: 200-06; Pucia R J, et al. Med Vet Mycol. 1991; 29: 57-60.Ortega G, et al. Cint Venez 1992; 43: 355-359; Do Valle ACF, et al. . Med Mycol 2001; 39: 373-377.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Pacientes adultos con infección crónica y buen estado general
presentan IDR + y niveles detectables de anticuerpos
específicos.
• Enfermedad diseminada: IDR negativa, serología positiva.
PARACOCCIDIOIDOMICO
SIS
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Estudios epidemiológicos: 10-90% positiva en áreas
endémicas.
• 47 % Península de Paraguaná, edo. Falcón.
• 87,5 % Goajira Venezolana.
• Valor diagnóstico limitado.
COCCIDIOIDINA:
COCCIDIOIDOMICOSI
S
Mesa L, et al. Bol Inf Las Micosis en Venezuela 1986; II: 6, 30.Quintero MA, et al. Bol Inf Las Micosis en Venezuela 1987; Año III: 9-11.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Títulos bajos (1:2, 1:4): enfermedad inicial o reacciones cruzadas
e inespecíficas.
• Títulos altos: pacientes con lesiones pulmonares crónicas e
infección diseminada.
• Se puede observar una sola banda o bandas múltiples.
• Meningitis: anticuerpos LCR.• Lesiones cutáneas primarias pueden cursar con serología
negativa.
• Negativiza con la resolución del proceso infeccioso.
SEROLOGÍA: COCCIDIOIDOMICOSI
S
Franco de Arias CM, et al. Der Venz 1986; 23,24: 41-50.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Serología: inmunodifusión doble
• Diagnóstico: correlación entre serología y cuadro clínico
pulmonar.
• Aspergiloma: 3 o más bandas de precipitación.
• Aspergilosis broncopulmonar alérgica: usualmente 2
bandas de precipitación.
• Aspergilosis invasiva: no es útil IDD.
ASPERGILLOSIS
Torres.Rodríguez JM et al Micología Médica. 1º Edición. Masson, S.A. Barcelona, España, 1993;.Albornoz MB de. Temas de Micología Médica. Ed. María CB de Albornoz. Caracas, Venezuela, 1996.Costa Sidrim JJ et al. Micología médica a la luz de autores contemporáneos. 1º Edición. Guanabara Koogan S.A. Río de Janeiro, Brasil, 2004. Warnock DW. Jpn J Med Mycol 2007; 48: 1-12; Vera R. et al. Rev Soc Ven Microbiol 2007; 27 (2): 112-119.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Aglutinación látex: antígenos polisacarídicos en LCR y suero.
• Importante en diagnóstico, pronóstico y evaluación de la
terapia.
• Títulos elevados en enfermedad activa.
• Disminución progresiva durante la terapia.
• Persistencia de títulos 1:8 al final de la terapia asociado
a recaídas.
CRIPTOCOCCOSIS
Gadea I, et al. Enferm Infecc Microbiol Clin 2004; 22 (1): 32-9; Pontón J. Rev Iberoam Micol 2002; 19: 25-9;Bennett JE, et al. Trans Assoc Amer Phys 1964; 77-45; Pappalardo M, et al. Rev Inst Med Trop S Paulo 2003; 45 (6): 299-305.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
• Serología: inmunofluorescencia indirecta, fijación de complemento e inmunoanálisis enzimático. • Títulos de anticuerpos en aumento y disminución del
antígeno durante terapia es buen pronóstico.
CRIPTOCOCCOSIS
Brummer E. Mycopathologia 1998; 143: (3): 121-5.Pappalardo M. et al. Rev Inst Med Trop S Paulo 2003; 45 (6): 299-305.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Reviákina y col. / Rev Soc Ven Microbiol 2007; 27:112-119
“… Se revisaron 7653 historias micológicas en un período de 5 años (2002-2006), encontrándose 409/7653 (5,3%) casos con diagnóstico positivo para alguna de las micosis sistémicas…”
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Conclusiones:• La prueba de IDD y la aglutinación con látex, sirven como
soporte para el diagnóstico y monitoreo de la evolución y posterior seguimiento del tratamiento de los pacientes.
• La aplicación exitosa de las pruebas serológicas depende de los reactivos empleados, que deben ser de alta pureza y contar con un estricto control de calidad, lo que conducirá a la obtención de reacciones antígeno-anticuerpo más sensibles y específicas.
• En los últimos años se observa un incremento en el diagnóstico de las micosis sistémicas, debido al aumento de la población inmunosuprimida y, en especial, de los pacientes con SIDA.
INMUNODIAGNÓSTICO DE LAS MICOSIS SISTÉMICAS
Conclusiones:• Es recomendable establecer un programa de vigilancia
epidemiológica de las micosis profundas en Venezuela.
• Estas enfermedades deberían ser consideradas como de denuncia obligatoria, particularmente la histoplasmosis, paracoccidioidomicosis y la criptococosis. De no ser así este problema nunca podrá ser estudiado en su dimensión real y permanecerá subregistrado.