INMUNOHEMATOLOGIAHEMATOLOGIA CLINICA
2013Ivan Maria Victoria
Karl Landsteiner
Modelos de la estructura de las principales proteínas activas de grupo sanguíneo
CLASIFICACION SEGÚN SU NATURALEZA QUIMICA
CARBOHIDRATOS
ABO, LEWIS, Hh
GLICOPROTEINA Kell, Xg, Scianna, Kx, MNSs (GPA GPB), Dombrock (GPI-linked)
GLICOLIPIDO P
PROTEINA Rh, LuTHERAN (iGsf), Duffy(ECR), Kidd ( Urea Transp.), Diego (Banda 3), Colton (Acuaforina-1), LW (IgSF),Chido/Rogers (C4A C4B),
CLASIFICACION ISBT: DEFINICIONES
SISTEMA DE GRUPO SANGUINEO
Sistema formado por uno o más antigenos controlados por un único locus o por un complejo de genes homólogos estrechamente ligados que no recombinan durante la meiosis
Inmunogenicidad
Nombre Sistema Inmunogenicidad
SISTEMA ABO
SISTEMA ABOClasificación ISBT: ABO, 001
Expresión:Soluble: Saliva y otros fluidos corporales, excepto LCR (en los secretores) Otras células sanguíneas: linfocitos, plaquetas (adsorbidos del plasma) Tejidos: Amplia distribución. Células epiteliales y endoteliales. Ubicación: 9q34.1-q34.2 Nombre del gen: ABO Producto del gen: A: a(1,3)N-Acetilgalactosaminiltransferasa (353 aa) B: a(1,3)Galactosaminiltransferasa (353 aa)
La mayoría de los individuos desarrollan anticuerpos frente a los antígenos ABO alogénicos aunque no hayan sido expuestos a eritrocitos extraños; esta sensibilidad se debe al contacto con epítopos idénticos que casualmente expresan de forma rutinaria una gran cantidad de microorganismos.
LOS GRUPOS SANGUÍNEOS SON ALOGÉNICOS
SISTEMA ABO: IMPORTANCIA CLINICA
•Reacciones hemolíticas postransfusionales severas
• Enfermedad hemolítica del RN leve a moderada• Asociación con la enfermedad:
• Debilitamiento de la expresión de A y B en leucemias y enfermedades que inducen éstres en la hemopoiesis (talasemia, anemia de Diamond Blackfan).
• Los antígenos A y B son marcadores tumorales (modificaciones en las cadenas de azúcares son características de cánceres y eritroleucemias).
SISTEMA ABO
ADULTOS RECIEN NACIDOS
A1 810.000 - 1.700.000
250.000 - 370.000
A2 240.000 - 290.000
140.000
B 610.000 - 830.000
200.000 - 320.000
TIPIFICACION ABO DE RUTINA
GR vs.
Anti-A Anti-B Anti-A,B
0 0 0 + 0 + 0 + + + + +
Suero vs.
GR A1 GR B GR O
+ + 0 0 + 0 + 0 0 - - -
GRUPO ABO
0AB
AB
%
B N
45 4946 2747 20 4 4
CAUSAS COMUNES DE RESULTADOS FALSO POSITIVO FALSO NEGATIVO EN
LA TIPIFICACION ABO
RESULTADOS FALSO NEGATIVO
No se agregó reactivo o suero.Proporción inapropiada de suero y de eritrocitos.Centrifugación insuficiente.Incubación a más de 20 -24ºC.Interpretación o registro incorrecto de los resultados.
RESULTADOS FALSO POSITIVO
Centrifugación excesiva.Uso de reactivos, glóbulos rojos o solución salina contaminada.Uso de material de vidrio sucio.Interpretación o registro incorrecto de los resultados.
TIPIFICACION ABO DE RUTINA
GR vs.
Anti-A Anti-B Anti-A,B
0 0 0 + 0 + 0 + + + + +
Suero vs.
GR A1 GR B GR O
+ + 0 + + 0 + + 0 + + +
GRUPO ABO
0 ? ? ?
DISCREPANCIA DISCREPANCIADISCREPANCIA
CAUSAS DE DISCREPANCIA
• SUBGRUPOS DEL ABO
• PRESENCIA DE ANTICUERPOS IRREGULARES
• POLIAGLUTINACION
Anti-A Anti-B Anti-A,B GRA1 GRB GRO
GR vs. Suero vs.
+ 0 + + + 0
Anti-A Anti-B Anti-A,B GRA1 GRA2 GRB GRO
+ 0 + + 0 + 0
Conclusiones: presencia de anti-A1
SUBGRUPOS DEL A(excluidos A1 y A2)
Métodos:1)Aglutinación con anti-A y anti-A,B2)Presencia o Ausencia de anti-A13)Presencia o ausencia de A en saliva4)Presencia o ausencia de H en saliva5)presencia de diversas glicosil transferasas
1) REACCION CELULAR CON ANTI-A Y ANTI-A,B
AGLUTINACION DEBIL NO AGLUTINACION
A3
AX
Aend(Bantu)
Am
Ay
Ael
A3AX Aend
Campo mixto (30%)
Campo mixto (10%)
Aglutina con anti-A,B
70.000 a 100.000 sitios antigénicos
4000 sitios antigénicos
200.000 sitios en los aglutinados
Transferasa débil y heterogénea
Transferasa débil No Transferasa en suero
Anti-A1 Anti-A1 s/Anti-A1
Secretor de A No secretor de A no secretor de H
No secretor de A secretor de H
Alelo dominante Alelo dominante Alelo dominante
GR vs:
Eritrocito a-A a-B a-A,B a-H GRA GRB GR0 secretores Fenotipo saliva de
Suero vs:
B 0 4+ 4+ 0 4+ 0 0 B&H B3 0 1+cm 2+cm 4+ 4+ 0 0 B&H Bm 0 0 0/+ 4+ 4+ 0 0 B&H Bx 0 0/+ 0/2+ 4+ 4+ 0 0 H
SUBGRUPOS DEL B
Anti-A Anti-B Anti-A,B GRA1 GRB GRO
GR vs. Suero vs.
0 0 0 + + +
DB UE GR O GROh
0 0 + 0
Conclusiones: Oh (BOMBAY)
SISTEMA ABO: GENÉTICA. Interacción con el sistema Hh
El locus ABO tiene tres alelos: A, B y O, y por el hecho de ser diploide todo individuo será portador de dos alelos.
GEN Hh
Fucosil transferasa
SUSTANCIA PRECURSORA
SUSTANCIA H
SISTEMA ABO
GEN A
GEN B
GEN 0
N-AcGalactosaminil transferasa
D-Galactosil transferasa
GEN AMORFO
N-AcGalactosamina
D-Galactosa
Azúcar inmunodominante
L-FucosaAzúcar inmunodominante
Un gen H situado en un locus separado codifica la sustancia precursora sobre la que actúan los productos de los genes A y B.
Fenotipo A1 A2Frecuencia 80 % 20 %
Los subgrupos de A : A1 y A2 serológicamente se diferencian por su comportamiento frente a extractos vegetales denominados “LECTINAS”.
LECTINA anti-A1 de Dolichos biflorus. LECTINA anti-H de Ulex europeaus.
Los individuos con genotipo HH o Hh producen la enzima 1,2-fucosiltransferasa que transforma la sustancia precursora en Sustancia H.Los individuos con fenotipo BOMBAY con genotipo hh no producen dicha enzima, por lo que no pueden modificar la sust. precursora, lo que hace que no puedan sintetizar SUSTANCIA H.Esto condiciona a que los genes del sistema ABO (si los tuviesen ) no pueden expresarse, por lo que parecen ser del grupo O.Presentan de manera constante además de anti-A y anti-B, un anticuerpo natural anti-H muy activo a 37ºC, capaz de hemolisar los hematíes de cualquier individuo que no sea de fenotipo BOMBAY.
GRUPO BOMBAY
Recordar…
Los títulos de anti A y anti B con frecuencia están disminuidos en pacientes ancianos y con hipogammaglobulinemia, por lo que puedo tipificar erróneamente cuando haga el GRUPO SERICO.
Los RN no producen títulos normales de anti A y anti B hasta los 3 6 meses de edad, alcanzando el titulo máximo entre los 5 a 10 años de edad.
Los alelos del grupo O en su mayoría tienen deleciones de un único nucleótido en el exón 6, lo que produce un producto no funcional. Esta deleción genera un codón stop.
El gen ABO está organizado en 7 exones y 6 intrones. Las modificaciones polimórficas ocurren tanto a nivel de exones como de intrones. El tamaño del gen es de 18 kb
SISTEMA ABOVariaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos156 176 216 235 266 268 291 352
A1 Pro Arg Phe Gly Leu Gly Asp Arg
A2 Leu
A3 Asn
AX Ile
SISTEMA ABOVariaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos156 176 216 235 266 268 291 352
B Pro Gly Phe Ser Met Ala Asp Arg
B3 Gly Trp
Cis-A,B Leu Arg Gly Leu
B(A)
SISTEMA ABOVariaciones de aminoacidos en las transferasas según alelos156 176 216 235 266 268 291 352
0 Pro Gly Phe Gly Leu Arg Asp Arg
0 Gly Gly
0
Produce una proteína sin actividad enzimática de 116 aa. Después de Val en el residuo 86 se produce una mutación de una base en el codon 87 (nt 261), generando un codon stop.
MEDIADAS POR LA INMUNIDAD
Hemolítica transfusional Aguda:
Causa: Incompatibilidad ABO
Fisiopatología: 1. Fase I : Interacción AG-AC.2. Fase II: Activación Fagocítica3. Fase III: Respuesta Sistémica
Presentación: Fiebre Nauseas / Vómitos Dolor Hipotensión Shock Disnea Complicaciones: Fallo Renal Agudo Coagulación Intravascular Diseminada
Hemolítica Transfusional Aguda
SISTEMA RH
Philip Levine
Antígenos del Sistema Rh
D f Ew VS cE Rh32 Evans Crawford JAL JAHK
C Ce G CG hrH Rh33 Rh39 Nou STEM DAK
E Cw Hro CE Rh29 HrB Tar Riv FPTT LOCR
c Cx Hr Dw Goa Rh35 Rh41 Sec MAR
e V hrS "c-like" hrB Bea Rh42 Dav BARC
Asignación Cromosomal
• Los Ags. de este Sistema son gobernados por 2 genes:
RHD y RHCE con una localización en el Cromosoma 1 (1p36.13-
p34.3)
Flegel WA; Transfusion and Apheresis Science 44 (2011) 81–91
Cartron JP et al; Vox Sanguinis 1998; 74 (Suppl. 2): 29-64
Cómo la proteína puede formar una estructura símil barril dentro de la
membrana y con función de transporte en la misma
DENSIDAD ANTIGÉNICAANTÍGENO COPIAS /G.R.
D 9.900 - 33.300C 7.200 - 56.400E 17.900 - 27.500c 37.000 - 85.000e 13.400 - 24.400
Rol Biológico• Sugerencia de Función Estructural:
Sujetos Rh Null (carecen Ag. Rh29) padecen un Síndrome con estomatocitos.
• Disminución de la expresión antigénica de los Ags. del Sistema Rh en Leucemias y otras Enfermedades Oncohematológicas.
• Función de Transporte en la Membrana: Aumento de permeabilidad catiónica.
• También se ha postulado recientemente que las proteinas Rh podrían funcionar como un canal de gas para CO2
RELACIÓN CON CONDICIONES HEMATOLÓGICAS PARTICULARES
Sugerencia de función estructural• Sind. Rh Nulo (sin Rh:29):
Estomatocitos
Antígenos del Sistema Rh
• son sintetizados en el glóbulo rojo• son detectados solamente en los
hematíes• sus determinantes proteicos están
representando el producto primario codificado por un gen
• se heredan como rasgos Codominantes
Definiciones Básicas• Las dos principales razones por las cuales los
hematíes no pueden ser genotipados son:– las pruebas serológicas revelan la presencia
o ausencia de antígenos, no de genes, y – los hematíes en circulación no poseen
núcleo y por lo tanto no expresan genes.• Dado que un genotipo de grupo
sanguíneo es una interpretación del fenotipo de un individuo, deberá calificarse como un genotipo probable.
Nomenclaturas• Ha sido usado un número de diferentes tipos de
nomenclaturas: letras mayúsculas (D, G, V); letras mayúsculas con minúsculas (C y c, E y e); superíndices (Cw, Cx), números (Rh32; Rh33) y hasta tortuosos jeroglíficos
(RoHar, ha, rhw2, DCor, R̿N, rhii), generando
tanta inconsistencia como confusión, ambas altamente indeseables.
Definiciones Básicas• En este sistema las notaciones emplean
simples letras (CDE), superíndices (Cw, Goa, Bea, etc.) y términos numéricos (Rh2)
• Los genes se escriben en itálicas empleando el nombre del sistema y el número del antígeno como un superíndice, p. ej., Rh4.
Definiciones Básicas• El fenotipo puede anotarse con letras
(D+C+E-c+e+) o con números (Rh:1,2,-3,4,5). Un complejo génico (haplotipo) puede indicarse en términos CDE o mediante el uso de un símbolo de gen. El uso de un símbolo de gen solo se aplica cuando se usa CDE taquigráfico (corto). El símbolo de gen R denota la presencia de un gen D; en tanto que r indica la ausencia de un gen D.
Madre: Rh + Padre: Rh+
Niño
Rh DD = Rh +
Rh Dd = Rh +
Rh dd = Rh -
Principales genes o haplotipos Rh
R1 CDer cdeR2 cDERo cDer’ Cder” cdERz CDEry CdE
Como convertir Nomenclatura de Fisher-Race a la de Wiener
• D R• D r
Considere sólo los genes C y/o E en el haplotipo
Gen R Gen r• CE 1 ’• CE 2 ”• CE o• CE z y
D C E c e Fenotipo Genotipo másprobable
M O + O + + Cce Cde/cde(r’r)
P + + + O + DCEe CDe/CDE(R1RZ)
RN + + + + + DCEce CDE/cde(RZ r)
D C E c e Fenotipo Genotipo másprobable
M O + O + + Cce Cde/cde(r’r)
P + + + O + DCEe CDe/CDE(R1RZ)
RN + + + + + DCEce CDe/cDE(R1R2)
D C E c e Fenotipo Genotipo másprobable
M O + O + + Cce Cde/cde(r’r)
P + + + O + DCEe CDe/CDE(R1RZ)
D C E c e Fenotipo Genotipo másprobable
M O + O + + Cce Cde/cde(r’r)
D C E c e Fenotipo Genotipo másprobable
PROBABILIDADESPADRE GENOTIPO MÁS
PROBABLE SEGÚNGENOTIPO PROMEDIO
CDe/CDe (R1R1) 97,76 %CDe/cDE (R1R2) 94,50 %cDE/cDE (R2R2) 92,79 %CDe/CDE (R1RZ) 97,89 %cDE/CDE (R2RZ) 95,25 %
Rh +Probablemente
Homocigota (D/D)
CDE/CDE (RZRZ) 100 %
96,16 %
CDe/cde (R1r) 53,09 %cDE/cde (R2r) 53,08 %
Rh +Probablemente
Heterocigota (D/d) cDe/cde (Ror) 51,60 %53,02 %
Rh + No Determinado - 70,90 %Rh Desconocido No Determinado - 58,97 %
Rh - - - 0 %
PROBABILIDADES DE UNA MADRE Rh-DE TENER UN HIJO Rh+
SEGÚN LAS CARACTERÍSTICAS DEL PADRE
La proteína Rh cruza la membrana del G.R.
Gen RHD :10 exones codificando regiones Código para proteínas
3pares de bases1 triplete = 1 aminoácido
Base Genética de la Proteína Rh
La proteína Rh cruza la membrana del G.R.
Gen RHD :10 exones codificando regiones Código para proteínas
3pares de bases1 triplete = 1 aminoácido
Base Genética de la Proteína Rh
Gen RHD :10 exones codificando regiones
Código para proteínas
Base Genética de la Proteína Rh
Rh Positivo Rh Negativo
Gen RHD
Gen RHCE
Proteína D
Proteína Cc y Ee Proteína Cc y Ee
Gen RHD Gen RHCE
Intrón 4, 600 pares de bases más largo que el Intrón 4 del gen RHD
Gen RHD
Proteina RhD
Proteina RhCcEe
Gen RHCE